Smanjeni omjer mineralnog ulja poboljšava prinos blastocista u sustavu mikrojažica i jednozametnim kulturama u poliesterskim mrežama - kratko priopćenje.

It is common to apply a mineral oil (MO) overlay to in vitro embryo cultures, even though the use of MO may be harmful to embryo development. To examine whether the volume of MO used in overlays for well-of-the-well (WOW) and polyester mesh (PM) single-embryo culture systems can be reduced, two sets of experiments were performed and the resulting blastocyst formation rates were compared with a conventional group (CG) embryo culture system. In Experiment 1, groups of 20 embryos in 100 μL microdrops of CDM-2 medium were plated in Petri dishes and then were covered with 3.5 mL of MO (resulting in a 1:35 ratio of medium to MO). Groups of 20 embryos were also placed in four-well plates in 400 μL CDM-2 medium per well, and the wells were covered with 400 μL MO (resulting in a 1:1 ratio of medium to MO). In Experiment 2, groups of 20 embryos were plated in four-well plates with 400 μL CDM-2 medium per well, and 1 mL of purified water was added to the center hole of the plate. Two sets of these plates were set up in parallel, and only one of the plates received an additional 400 μL of MO per well (resulting in a 1:1 ratio of medium to MO). A greater percentage of embryos reached the blastocyst stage when they were cultured in a 1:1 ratio of medium to MO, compared with embryos that were cultured in a 1:35 ratio of medium to MO (55 % vs. 41 %, respectively; P<0.01). In addition, a greater percentage of embryos reached the blastocyst stage in the WOW and PM systems that included a 1:1 ratio of medium to MO overlay than the embryos that were cultured in the presence of water in the central hole of a four-well plate without MO (48 % vs. 39 %, respectively; P<0.01). Therefore, a 1:1 ratio of medium to MO was found to improve blastocyst rates in both WOW and PM embryo culture systems.U in vitro kulturama zametaka uobičajeno je primjenjivati sloj mineralnog ulja (MU), iako to može biti štetno za razvoj embrija. U radu su provedeni pokusi s ciljem da se istraži može li se smanjiti količina primijenjenog MU u sustavu mikrojažica i u poliesterskim mrežama za uzgoj pojedinačnog zametka. Pri tome je stopa nastalih blastocista bila uspoređena s konvencionalnim načinom uzgoja zametaka. U prvom pokusu su skupine od 20 zametaka u mikrokapi od 100 μL CDM-2 medija bile stavljene na podlogu u Petrijeve zdjelice i nakon toga prekrivene s 3,5 mL MU (omjer između medija i MU iznosio je 1:35). Skupine od 20 zametaka također su bile smještene u četverodijelne plitice s 400 μL CDM-2 medija po jažici i prekrivene s 400 μL MU (omjer između medija i MU iznosio je 1:1). U drugom pokusu, skupine od 20 zametaka bile su smještene u četverodijelne plitice s 400 μL CDM-2 medija po jažici, u čiji je središnji otvor dodan 1 mL pročišćene vode. Dvije skupine tih plitica bile su istodobno postavljene, a samo u jednu pliticu dodano je 400 μL MU po jažici (omjer između medija i MU iznosio je 1:1). Veći postotak embrija dosegao je stadij blastociste kada je u kulturi bio primijenjen omjer 1:1 između medija i MU. U usporedbi sa zametcima kod kojih je u kulturi bio primijenjen omjer između medija i MU 1:35, razlika je iznosila 55 % prema 41 %, P<0,01. Osim toga, veći postotak zametaka dosegnuo je stadij blastociste u sustavu mikrojažica i poliesterskih mrežica u kojima je omjer između medija i MU bio 1:1, nego što je to bio slučaj kad je kulturi zametaka u središnjoj jažici plitice bila dodana voda (48 % prema 39 %, P<0,01). Utvrđeno je da omjer 1:1 između medija i MU poboljšava stopu razvijenih blastocista u oba sustava

Efectos de los RNAm maternos sobre la maduración del ovocito y el desarrollo embrionario temprano en mamíferos

Get in vitro matured oocytes that could be competent for in vitro fertilization with a result of 50 % viableblastocysts, is one of the main problems in the in vitro development of bovine embryos. For these reason, isnecessary to understand the cellular processes that lead to the maturation of the oocyte during folliculogenesis andsubsequent transition to the embryo. The transition from oocyte to embryo is a complex process that involvesgenomic inactivation of the oocyte and embryonic genome activation. This process occurs in cattle in thestage of 8 to 16 cells where there are a selective degradation of maternal mRNA, which were stored duringoogenesis and are the source of protein in the early stages of embryonic development. The action ofmaternal mRNA is a key for that embryonic genome activation takes place in form and time. Understandingthe involvement of these transcripts in embryonic genome activation is essential to elucidate the cellularprocesses falling in oocyte maturation in vitro protocols. The aim of this review was to gather informationfrom maternal genes that have been isolated both in the murine model and cattle, this in order toincorporate knowledge related to genomic processes that enable the development of the embryo in cattle,and to design also new strategies to improve in vitro fertilization protocols.Obtener ovocitos madurados in vitro, que sean competentes para fertilizarse y originar un porcentaje superior al 50 % de blastocitos viables, es una de las principales metas que existen en el desarrollo in vitro de embriones bovinos. Es por ello necesario entender los procesos celulares, que desembocan en la maduración del ovocito durante la foliculogénesis y su subsecuente transición al embrión. La transición del ovocito al embrión es un proceso complejo que involucra la inactivación genómica del ovocito y la activación del genoma embrionario. Este proceso se da en bovinos en la etapa de 8 a 16 células y presenta una degradación selectiva de RNAm maternos, que fueron almacenados durante la ovogénesis y son la fuente para la codificación de proteínas en las etapas iníciales del desarrollo embrionario. La acción de los RNAm maternos es clave para que la activación del genoma embrionario se realice en tiempo y forma adecuados. Entender la participación de estos transcritos en la activación del genoma embrionario, es esencial para esclarecer los procesos celulares que fallan en los protocolos de maduración de ovocitos in vitro. Es por esto que el objetivo de esta revisión fue recopilar la información de los principales RNAm maternos que han sido identificados tanto en el modelo murino como el bovino, esto con el fin de integrar el conocimiento relacionado con los procesos genómicos que permiten el desarrollo del embrión en el bovino, y diseñar nuevas estrategias que permitan mejorar los protocolos de fertilización in vitro

Efectos de los RNAm maternos sobre la maduración del ovocito y el desarrollo embrionario temprano en mamíferos. Revisión

Obtener o vocitos madurados in vitro , que sean competentes para fertilizarse y originar un porcentaje superior al 50 % de blastocitos viables, es una de las principales metas que existen en el desarrollo in vitro de embriones bovinos. Es por ello necesario entender los procesos celulares, que desembocan en la maduración del ovocito durante la foliculogénesis y su subsecuente transición al embrión. La transición del ovocito al embrión es un p roceso complejo que involucra la inactivación genómica del ovocito y la activación del genoma embrionario. Este proceso se da en bovinos en la etapa de 8 a 16 células y presenta una degradación selectiva de RNAm maternos, que fueron almacenados durante la ovogénesis y son la fuente para la codificación de proteínas en las etapas iníciales del desarrollo embrionario. La acción de los RNAm maternos es clave para que la activación del genoma embrionario se realice en tiempo y forma adecuados. Entender la participación de estos transcritos en la activación del genoma embrionario, es esencial para esclarecer los procesos celulares que fallan en los protocolos de maduración de ovocitos in vitro . Es por esto que el objetivo de esta revisión fue recopilar la información de los principales RNAm maternos que han sido identificados tanto en el modelo murino como el bovino, esto con el fin de integrar el conocimiento relacionado con los procesos genómicos que permiten el desarrollo del embrión en el bovino, y diseñar nuevas estrategias que permitan mejorar los protocolos de fertilización in vitro

Análisis de QTL asociados a polimorfismos de nucleótido único (SNP) involucrados en el fenotipo lechero del ganado Holstein

The aim was to identify QTLs associated with single nucleotide polymorphisms (SNPs) whose action contributes to the productive, reproductive and health phenotypic development of Holstein dairy cattle. 341 QTLs located in 120 genes of the Bos taurus UMD_3.1.1 genome and associated with 189 SNPs with effects on productive (FY, NM, MY, MTCAS, MBLF and PL), reproductive (CONCRATE, DPR, EMBSUR, DAYOPEN and CONCEPT) and health traits (SCC, BTBS and RESRATE) were identified. SNPs were verified in the dbSNP-NCBI database, according to which 42 % were located in introns. The Jvenn platform revealed that the SNPs rs135744058, rs110828053 and rs109503725 were common in all three traits. The network of correlations between traits and genes generated by MetScape (Cytoscape 3.4), showed a positive correlation between PL, DPR, DAYOPEN, CONCRATE and CONCEPT, and a negative correlation of FY with PL, NM, DPR and CONCRATE. The functionality of each gene was validated in the Gene-NCBI and UniProt databases, and ClueGo (Cytoscape 3.4) was used to select functional pathways with a significance value less than 0.05, which rendered an intertwining between the development of the mammary gland, the activation of the immune system and the response to steroid hormones evident, the GH gene being the one that directs this functionality. Although the genetic panorama shows that there is an antagonism between productive and reproductive traits, the functional genetic activity due to the 189 SNPs analyzed exhibits an interwoven action in ontological pathways that influence the production processes, as well as in reproductive and health pathways.El objetivo fue identificar QTL asociados a polimorfismos de nucleótido único (SNP) cuya acción contribuya al desarrollo fenotípico productivo, reproductivo y de salud del ganado lechero de raza Holstein. Ubicados en 120 genes del genoma Bos taurus UMD_3.1.1, se identificaron 341 QTL asociados a 189 SNP con efectos sobre rasgos productivos (FY, NM, MY, MTCAS, MBLF y PL), reproductivos (CONCRATE, DPR, EMBSUR, DAYOPEN y CONCEPT) y de salud (SCC, BTBS y RESRATE). Los SNP fueron verificados en la base de datos dbSNP-NCBI donde 42 % se ubicaron en intrones. Con la plataforma Jvenn se supo que los SNP rs135744058, rs110828053 y rs109503725, fueron comunes en los tres rasgos. La red de correlaciones entre rasgos y genes generada por MetScape (Cytoscape 3.4), mostró una correlación positiva entre PL, DPR, DAYOPEN, CONCRATE y CONCEPT; y una negativa de FY hacia PL, NM, DPR y CONCRATE. La funcionalidad de cada gen fue validada en las bases Gene-NCBI y UniProt, y por ClueGo (Cytoscape 3.4) se seleccionaron vías funcionales con un valor de significancia menor a 0.05, lo que evidenció un entrelazamiento entre el desarrollo de la glándula mamaria, la activación del sistema inmune y la respuesta a hormonas esteroideas; siendo el gen GH quien dirige dicha funcionalidad. Aunque el panorama genético muestra que existe un antagonismo entre rasgos productivos y reproductivos, la actividad genética funcional debido a los 189 SNP analizados, muestra una acción entrelazada en vías ontológicas que influyen tanto en los procesos de producción, así como en vías de reproductivas y de salud.