Estudos dos linfócitos T γδ e αβ na inflamação pulmonar no modelo experimental de sepse grave

Made available in DSpace on 2016-02-26T13:34:37Z (GMT). No. of bitstreams: 2 victor_bornstein_ioc_mest_2010.pdf: 1739981 bytes, checksum: 422f59df408ce1aa65ea4a342efd11cc (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2016-01-13Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, BrasilA sepse é uma das principais doenças causadoras de óbitos em unidades de tratamento intensivo. Ademais, a forma grave dessa síndrome induz uma imunossupressão prolongada que causa diversas complicações, a maior parte dessas relacionadas a infecções pulmonares. O conhecimento atual sobre a imunossupressão induzida por sepse grave é muito limitado; no entanto já foi demonstrado que esta condição induz disfunções em linfócitos T CD4 e células dendríticas devido a alterações epigenéticas. O objetivo do presente trabalho foi o de estudar os linfócitos T \03B3\03B4 no pulmão durante a sepse grave assim como possíveis dinfunções destas células durante a imunossupressão pós-sepse. Para isso, a sepse grave foi induzida em camundongos C57BL/6 através da ligação e perfuração do ceco (CLP; 9 perfurações com agulha de 21 gauge e tratamento com antibiótico por 3 dias), modelo experimental descrito por ser capaz de desencadear e manter um estado de imunossupressão. No primeiro dia após a CLP os números de linfócitos T \03B3\03B4 e \03B1\03B2 se encontram elevados no pulmão. No 3º dia, o número de linfócitos T \03B1\03B2 retornou a níveis basais, no entanto, os números de linfócitos T \03B3\03B4 continuaram elevados. A análise por citometria de fluxo da expressão de anexina V, CD25, e c-Fos, sugere que este número aumentado de linfócitos T \03B3\03B4 no 3º dia após CLP seja devido a uma rápida e duradoura proliferação destas células em órgãos linfóides secundários e não devido a uma diminuição da morte celular, evento característico da sepse. De modo interessante, o aumento da expressão de CD25 por linfócitos T \03B3\03B4 foi observada tanto no pulmão (3º e 10º dia após CLP) quanto no baço (1º, 3º e 10º dia após CLP), em tempos anteriores aos observados para os linfócitos T \03B1\03B2. No 10º dia após a CLP, os camundongos já se encontram recuperados da sepse, contudo, os linfócitos T \03B3\03B4 e \03B1\03B2 apresentam uma incapacidade de migrar em direção ao pulmão inflamado, como foi observado em ensaio de transferência adotiva. Em contrapartida, no 10º dia, um maior número de linfócitos T \03B3\03B4 (mas não \03B1\03B2) recuperados do pulmão de animais pós-sépticos estão produzindo IL-17, enquanto há um menor número de linfócitos T \03B3\03B4 IL-10+ ou IFN- \03B3+. Este aumento na produção de IL-17 foi acompanhado de um aumento do número de neutrófilos. Em síntese, esses dados sugerem que, diferente dos linfócitos T \03B1\03B2, os linfócitos T \03B3\03B4 apresentam um perfil pró-inflamatório durante a imunossupressão pós-sepse grave induzida por CLP.Sepsis is a major cause of death at intensive care units. Severe sepsis also leads to systemic long-term immunosuppression, which causes several c omplications, most of them related to lung infections. The current knowledge about sepsis-indu ced immunosuppression is poor; however it has been demonstrated that post-septic mice present dendritic and CD4 T cells dysfunction caused by epigenetic changes. In the present work, we aime d to investigate lung γδ T cells during severe sepsis and whether these cells were immunocompetent during immunosuppression post-sepsis. For that, severe sepsis was induced in C57BL/6 mice by cecal ligation and puncture (CLP; 9 punctures with 21 gauges needle and antibiotics tre atment for 3 days), a model previously described as triggering and maintaining immunosuppr ession. One day after CLP, both γδ and αβ T lymphocyte numbers were increased in lung tissue. A t day 3, αβ counts return to basal levels due to a post-sepsis apoptotic event; however, γδ T cell numbers remained elevated. This phenomenon seems to be due to an early and long-lasting prolif eration of γδ T cells (as compared to αβ ), instead of to decreased cell death rate, as assesse d by flow cytometry using annexin V, CD25, and c-Fos staining. Interestingly, the increase in CD25 expression by γδ T cells was observed in lung (3 rd and 10 th days post-CLP) and spleen (1 st , 3 rd and 10 th day post-CLP), at early time points than the ones observed for αβ T cells. At the 10 th day after CLP, mice were recovered from sepsis, bu t splenic γδ and αβ T cells showed a disability to migrate towards inf lamed lung in a cell adoptive transfer assay. Nevertheless, during day 10 th , lung γδ T cells (but not αβ T cells) recovered from post-septic mice produced increased IL-17 levels, w hereas decreased the production of IFN- γ and IL-10, showing a Th17-like response. The increased IL-17 production was accompanied by neutrophil infiltration in the lungs. In summary, t hese data suggest that, in contrast to other T lymphocytes, γδ T cells seem to maintain an effective immune-respo nse in the lungs during severe sepsis-induced immunosuppression caused by CLP

Murine IL-17+ Vγ4 T lymphocytes accumulate in the lungs and play a protective role during severe sepsis

Submitted by sandra infurna ([email protected]) on 2016-04-18T16:50:53Z No. of bitstreams: 1 richard_valente_etal_IOC_2015.pdf: 1511614 bytes, checksum: 53c0a3196037eb84c301fc62a641a380 (MD5)Approved for entry into archive by sandra infurna ([email protected]) on 2016-04-18T17:07:27Z (GMT) No. of bitstreams: 1 richard_valente_etal_IOC_2015.pdf: 1511614 bytes, checksum: 53c0a3196037eb84c301fc62a641a380 (MD5)Made available in DSpace on 2016-04-18T17:07:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 richard_valente_etal_IOC_2015.pdf: 1511614 bytes, checksum: 53c0a3196037eb84c301fc62a641a380 (MD5) Previous issue date: 2015Fundação Oswaldo Cruz. Farmanguinhos. Departamento de Farmacologia. Laboratório de Farmacologia Aplicada.. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Nacional de Ciência e Tecnologia de Inovação em Doenças Negligenciadas (INCT-IDN). Centro de Desenvolvimento Tecnológico em Saúde. Rio de Janeiro, RJ, Brasil.Fundação Oswaldo Cruz. Farmanguinhos. Departamento de Farmacologia. Laboratório de Farmacologia Aplicada. Rio de Janeiro, RJ, Brasil.Fundação Oswaldo Cruz. Farmanguinhos. Departamento de Farmacologia. Laboratório de Farmacologia Aplicada. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Mount Sinai School of Medicine. New York City, NY, USA.Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Laboratório de Toxinologia. Rio de Janeiro, RJ, Brasil.Faculdade de Medicina de Petrópolis. Laboratório de Imunologia. Petrópolis, RJ, Brasil / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil.Fundação Oswaldo Cruz. Farmanguinhos. Departamento de Farmacologia. Laboratório de Farmacologia Aplicada. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Nacional de Ciência e Tecnologia de Inovação em Doenças Negligenciadas (INCT-IDN). Centro de Desenvolvimento Tecnológico em Saúde. Rio de Janeiro, RJ, Brasil.Universidade Federal do Rio de Janeiro. Centro de Ciências da Saúde. Instituto de Ciências Biomédicas. Laboratório de Inflamação, Estresse Oxidativo e Câncer. Rio de Janeiro, RJ, Brasil.Fundação Oswaldo Cruz. Farmanguinhos. Departamento de Farmacologia. Laboratório de Farmacologia Aplicada. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Nacional de Ciência e Tecnologia de Inovação em Doenças Negligenciadas (INCT-IDN). Centro de Desenvolvimento Tecnológico em Saúde. Rio de Janeiro, RJ, Brasil.Background: Lung inflammation is a major consequence of the systemic inflammatory response caused by severe sepsis. Increased migration of γδ T lymphocytes into the lungs has been previously demonstrated during experimental sepsis; however, the involvement of the γδ T cell subtype Vγ4 has not been previously described. Methods: Severe sepsis was induced by cecal ligation and puncture (CLP; 9 punctures, 21G needle) in male C57BL/ 6 mice. γδ and Vγ4 T lymphocyte depletion was performed by 3A10 and UC3-10A6 mAb i.p. administration, respectively. Lung infiltrating T lymphocytes, IL-17 production and mortality rate were evaluated. Results: Severe sepsis induced by CLP in C57BL/6 mice led to an intense lung inflammatory response, marked by the accumulation of γδ T lymphocytes (comprising the Vγ4 subtype). γδ T lymphocytes present in the lungs of CLP mice were likely to be originated from peripheral lymphoid organs and migrated towards CCL2, CCL3 and CCL5, which were highly produced in response to CLP-induced sepsis. Increased expression of CD25 by Vγ4 T lymphocytes was observed in spleen earlier than that by αβ T cells, suggesting the early activation of Vγ4 T cells. The Vγ4 T lymphocyte subset predominated among the IL-17+ cell populations present in the lungs of CLP mice (unlike Vγ1 and αβ T lymphocytes) and was strongly biased toward IL-17 rather than toward IFN-γ production. Accordingly, the in vivo administration of anti-Vγ4 mAb abrogated CLP-induced IL-17 production in mouse lungs. Furthermore, anti-Vγ4 mAb treatment accelerated mortality rate in severe septic mice, demonstrating that Vγ4 T lymphocyte play a beneficial role in host defense. Conclusions: Overall, our findings provide evidence that early-activated Vγ4 T lymphocytes are the main responsible cells for IL-17 production in inflamed lungs during the course of sepsis and delay mortality of septic mice