Immunohistochemistry in the diagnosis of membranous glomerulonephritis: a comparative study of chromogen + counterstaining combination

A glomerulonefrite membranosa faz parte das doenças glomerulares que provocam glomerulonefrite crônica, apresentando-se como uma das causas da doença renal terminal. As técnicas de imunofluorescência são o gold standard no estudo imunológico desta patologia em biópsia renal, através da deteção de imunocomplexos (e.g. IgG e C3) e do seu padrão de distribuição granular característico. No entanto, a imunofluorescência não permite uma contextualização histológica e os fluorocromos utilizados possuem um reduzido tempo de atividade, ao contrário das técnicas imunoenzimáticas que utilizam cromogénios coloridos precipitados que permitem a obtenção de uma marcação permanente e a sua contextualização histológica por via da utilização de eficientes colorações de contraste. Com a finalidade de contribuir para a qualidade do diagnóstico da glomerulonefrite membranosa, em biópsias renais, procurou-se, com esta pesquisa, identificar uma técnica imunoenzimática, através da conjugação entre diferentes cromogênios e colorações de contraste, que permita a deteção de depósitos de IgG e C3, com padrão granular. Foram constituídos diferentes binômios cromogênio + coloração, com os cromogênios 3,3›- Diaminobenzidine Tetrahydrochloride e 3-Amino-9-ethylcarbazole e as colorações Periodic Acid Schiff, Periodic Acid Methenamine Silver e Hematoxilina. Foram utilizadas 72 secções de tecido provenientes de seis de casos de biópsias renais com diagnóstico de glomerulonefrite membranosa, fixados em formalina a 10% e incluídos em parafina. A recolha de dados foi realizada por observação microscópica com preenchimento de uma grelha de classificação dos parâmetros: preservação da morfologia, intensidade da marcação específica, quantidade relativa de estruturas marcadas, marcação inespecífica/fundo, contraste e padrão da marcação, que permitiu a classificação dos binómios estudados num score quantitativo de 0-100 pontos. O binômio que apresentou melhores resultados foi 3-Amino-9-ethylcarbazole + Hematoxilina (score 71,81) e o binômio 3,3›- Diaminobenzidine Tetrahydrochloride+Periodic Acid Methenamine Silver (score 7,81), apresentou os piores resultados. O resultado do teste Kruskal-Wallis indica-nos a presença de diferenças estatísticas entre os binómios em estudo (p=0,000). A Hematoxilina pode ser considerada a coloração mais eficaz, pois cumpriu a sua função de auxiliar e facilitar a observação do tipo de padrão com os dois cromogênios utilizados. O cromogênio 3-Amino-9-ethylcarbazole apresentou resultados semelhantes aos produzidos pelo 3,3›-Diaminobenzidine Tetrahydrochloride, no entanto, permitiu identificar em todos os casos o padrão granular de imunomarcação, ao contrário do que aconteceu com este último.ABSTRACT - Membranous glomerulonephritis is one of the glomerular diseases that induce chronic glomerulonephritis and one of the causes of terminal renal disease. Immunofluorescence techniques are the gold standard in the immunologic study of this disease in renal biopsy by the detection of the immunocomplexs and their granular specific pattern. However, immunofluorescence does not allow a histological contextualization and the fluorochromes that are used have a reduced timeline, contrary to immunoenzimatic techniques that use colorful chromogens which permit to obtain a permanent stain and a histological contextualization, with the help of efficient counterstaining. In order to contribute to the quality of diagnosis of membranous glomeurlonephritis in renal biopsies, we tried with this research to identify a combination of different chromogens and counterstainings that allows the detection of IgG and C3 deposits with granular pattern. So we establish different chromogen + counterstaing combination, with 3,3’- Diaminobenzidine Tetrahydrochloride and 3-Amino-9-ethylcarbazole as chromogens and Periodic Acid Schiff, Periodic Acid Methenamine Silver and Hematoxilin as counterstainings. We used 72 sections of 6 renal biopsies with membranous glomerulonephritis, formalin-fixed and paraffin-embedded. Data collection was performed by completing an assessment grid with parameters: preservation of morphology, intensity of specific staining, relative amount of labeled structures, nonspecific staining / background contrast and pattern of staining, which allowed the assignment of a 0-100 points quantitative score. 3-Amino-9-ethylcarbazole+Hematoxilin was the combination that accomplish the higher score (71.81) and 3,3’- Diaminobenzidine Tetrahydrochloride+ Periodic Acid Methenamine Silver the worst (7.81). Kruskal-Wallis test show us that exist statistical difference between the combinations in study (p=0.000). Hematoxilin was the most versatile counterstaining, because it help and facilitate the observation of the pattern produced by the two chromogen used. The chromogen 3-Amino-9-ethylcarbazole presented similar results to 3,3’-Diaminobenzidine Tetrahydrochloride, but, with the first one, all cases were evaluated as granular pattern unlike what happen with the last one

Lista de espécies de artrópodes associados a diferentes culturas frutícolas da Ilha Terceira (Açores)

Actas do I Workshop de Fruticultura : contributo para o seu desenvolvimento. Angra do Heroísmo, 21-23 Abril 2005.Conhecer a acarifauna e a entomofauna de um habitat agrícola é um dos passos fundamentais para se conseguir uma protecção integrada e sustentável das culturas. Neste trabalho apresenta-se uma lista das espécies de artrópodes encontradas em quatro culturas frutícolas da ilha Terceira (bananeiras, citrinos, macieiras e pessegueiros). Os indivíduos foram capturados com recurso a três métodos de amostragem: i) recolha directa das folhas e/ou ramos; ii) técnica dos batimentos; iii) armadilhas Malaise. No total foram estabelecidas 679 morfoespécies diferentes, tendo-se identificado, até ao momento, 218 morfoespécies até ao nível de género e/ou espécie. Destacam-se 17 espécies que são citadas pela primeira vez para a ilha Terceira, 12 são novidades para os Açores e uma espécie é citada pela primeira vez para Portugal (Fungitarsonemus peregrinus, Acariformes (Prostigmata): Tarsonemidae). Salienta-se, ainda, uma das espécies do género Encarsia sp. (Hymenoptera: Aphelenidae), que muito provavelmente será uma espécie nova para a ciência. Finalmente discute-se a importância deste estudo para trabalhos futuros, e a necessidade de desenvolver mais listas faunísticas para estas e outras culturas

Lista de espécies de artrópodes associados a diferentes culturas frutícolas da ilha Terceira (Açores, Portugal)

Copyright © 2010 SEA, Sociedad Entomológica Aragonesa.Conhecer a acarifauna e a entomofauna de um habitat agrícola é um dos passos fundamentais para se conseguir uma protecção integrada e sustentável das culturas. Neste trabalho apresenta-se uma lista das espécies de artrópodes encontradas em quatro culturas frutícolas da ilha Terceira (bananeiras, citrinos, macieiras e pessegueiros). Os indivíduos foram capturados com recurso a três métodos de amostragem: i) recolha directa das folhas e/ou ramos; ii) técnica dos batimentos; iii) armadilhas Malaise. No total foram estabelecidas 679 morfoespécies, tendo-se identificado 218 morfoespécies até ao nível de género e/ou espécie. Destacam-se 17 espécies que foram encontradas pela primeira vez para a ilha Terceira durante esta amostragem, 12 que constituíam novidades faunísticas para os Açores e uma espécie que foi citada pela primeira vez para Portugal. Finalmente discute-se a importância deste estudo para trabalhos futuros, e a necessidade de desenvolver mais listas faunísticas para estas e outras culturas.RESUMEN: Conocer la acarifauna y la entomofauna de un hábitat agrícola es uno de los primeros pasos necesarios para llegar a una protección más integrada y sostenible de los cultivos. En este trabajo se presenta el listado de especies de artrópodos que habitan en cuatro tipos de frutales en la isla Terceira (plataneros, cítricos, manzanos y melocotoneros). Los individuos fueron capturados mediante tres métodos de colecta: búsqueda directa sobre las hojas y ramas; técnica de batido; y trampas Malaise. En total se han identificado 679 morfoespecies, de las cuales 218 se identificaron hasta el nivel de género y/o espécie. Diecisiete morfoespecies se han encontrado por primera vez en Terceira durante este muestreo, 12 son nuevas para las Azores y una especie es nueva para Portugal. Además se discute la importancia de este estudio para futuros proyectos de investigación, y la necesidad de desarrolla r más listados faunísticos en es tos y otros tipos de frutales.ABSTRACT: Knowing the arthropod fauna associated with agroecosystems is essential to achieve sustainable integrated pest management. Here we present a checklist of the arthropod species found on four types of fruit crops on Terceira Island (bananas, orange-trees, apple-trees and peach-trees). The specimens were collected using three different sampling methods: i) direct collecting from leaves and/or branches; ii) beating technique; iii) Malaise traps. In total, we detected 679 morphospecies, of which 218 were identified to the genus and/or species level. Seventeen species are first records for Terceira Island, 12 for the Azores and one for Portugal. Finally we discuss the importance of this work for future studies, as well as the need to develop more checklists for these and other crops

Os artrópodes auxiliares generalistas associados aos citrinos na ilha Terceira (Açores)

A fauna de artrópodes dos Açores, que foi recentemente listada, é composta por cerca de 2.209 espécies e subespécies (Borges et al., 2005a). Uma fracção importante da fauna de artrópodes dos Açores é constituída por espécies de predadores, incluindo predadores generalistas (e.g. Araneae – aranhas, Hemiptera‑Heteroptera, Neuroptera, Staphylinidae, Diptera‑Syphidae etc.) e parasitoides (Hymenoptera – Parasitica). Os ecossistemas agrícolas são aqueles que mais poderão beneficiar da acção dos predadores generalistas, geralmente designados por auxiliares. No entanto, a densidade dos insectos fitófagos, muitos dos quais constituem pragas, só pode ser controlada pelos auxiliares quando não é muito elevada. Apesar do elevado número de pomares existentes na ilha Terceira (Açores), a superfície ocupada por culturas frutícolas é pequena comparativamente à área coberta por pastagens (as pastagens ocupam 44% da área total; Borges 1999a). No ano 2003, iniciou‑se o projecto INTERFRUTA (projecto de cooperação entre Açores, Madeira e Canárias), que contribuiu para o maior conhecimento dos artrópodes associados a quatro culturas frutícolas (bananeiras, citrinos, macieiras e pessegueiros) da ilha Terceira (ver Santos et al., 2005a, b). Neste trabalho apresenta‑se uma lista comentada e a distribuição das espécies de artrópodes auxiliares encontradas nos pomares de Citrinos. [da Introdução

Padrões de distribuição e abundância da fauna auxiliar na ilha Terceira

I Congresso de Fruticultura e Viticultura. Angra do Heroísmo 17-19 Abril 2008.Trabalho de investigação desenvolvido no projecto INTERFRUTA II, financiado pelo programa INTERREG III-B.Neste trabalho estudam-se os padrões de abundância e distribuição da fauna auxiliar de artrópodes dos pomares da ilha Terceira. Os objectivos foram os seguintes: a) determinar a distribuição de frequências da distribuição das espécies em vários tipos de pomares; b) determinar a distribuição de frequências da abundância das espécies em vários tipos de pomares; c) testar a existência de uma relação positiva entre abundância e distribuição. Utilizaram-se técnicas padronizadas de amostragem de artrópodes das copas das fruteiras para obter dados sobre a abundância e distribuição dos artrópodes. Observou-se de forma consistente que um pequeno grupo de espécies domina estas comunidades, havendo uma grande proporção de espécies raras. A relação interespecífica positiva entre abundância e distribuição implica que deveremos promover os mecanismos de gestão que promovam a facilidade de dispersão das espécies de artrópodes auxiliares e mantenham nas comunidades as espécies comuns. Os pomares com maior abundância de artrópodes benéficos podem servir como fontes de colonização para outros pomares, desde que haja o controlo da aplicação de pesticidas e do maneio mais intensivo, duas actividades que causam um efeito negativo na riqueza e abundância das aranhas e parasitóides

Science, society, politics, and the media: joining efforts to manage the risk of termite infestation in the Azores

SRA 2008 Annual Meeting. Sunday, 7 December 2008 to Wednesday, 10 December 2008.Termites are well-established and serious pests of structural wood infestation in different parts of the world. Presently, in the Azores archipelago (Portugal), the drywood termite Cryptotermes brevis (Insecta, Isoptera) has been referred to four of the nine islands, and the damages to the buildings and other artefacts are severe and constitute a serious threat, especially in its main towns. In order to control the situation there has been a considerable scientific and political investment to survey and classify the infestation, and to develop mitigation strategies, over the last five years. Nevertheless, the infestation is far from being controlled and, also, most of the Azorean citizens are still unaware of the dangers and risks associated to this urban pest. If, however, effective educational and management practices are initiated soon, the losses from C. brevis can be greatly reduced. Therefore, the major aims of this research project are: (i) to understand people’s perspectives about the consequences of the termite infestation and their appraisal about the effectiveness of the proposed and existing management strategies; (ii) to understand the functions of the media in the making of public opinion; (iii) to develop simple ways of communicating complex technical information according to people’s perception of who is accountable and trustworthy, in order to avoid misunderstandings between science, politics, managers and society; (iv) to develop and implement devices focused on the communication between the population and the main stakeholders, to promote the involvement of citizens and their commitment as essential partners of the termite control. This paper aims to integrate data from the abovementioned stakeholders in order to identify communication problems, to create adequate strategies to solve conflicts, to facilitate dialogue and partnerships among stakeholders and to promote termite risk literacy. Data was gathered using several techniques, including interviews, descriptive-interpretative analysis of media, scientific discourses and existing operational programs. Data shows that the lack of integration among stakeholders is the most obvious barrier to be overcome by the communication devices to implement

Persistent genital arousal disorder: always look beyond the surface - a case report

Persistent genital arousal disorder is a rare condition characterized by unwanted intrusive symptoms of sexual arousal without specific context. Their possible aetiologies and treatments are multiple and mostly based on case reports. We aim to do a comprehensive review of persistent genital arousal disorder and describe a case of a postmenopausal woman who developed this disease and, during the follow-up, was diagnosed with advanced endometrial cancer, reminding physicians to keep in mind the possibility of multiple diagnosis in the same patient, including malignancy. Although there is no description of this association in the literature, the possible aetiologies of persistent genital arousal disorder are diverse, and we sought this rare case should be disclosed

Antibacterial activity of phenyl isothiocyanate on Escherichia coli and Staphylococcus aureus

The present study has been aimed to assess the antibacterial effects of the glucosinolate hydrolysis product phenyl isothiocyanate (PITC) against Escherichia coli and Staphylococcus aureus. Aspects on the antibacterial mode of action of PITC have also been characterized, such as the changes on surface physicochemical characteristics and membrane damage. The minimum inhibitory concentration of PITC was 1000 µg/mL, for both bacteria. The antimicrobial potential of PITC was compared with selected antibiotics (ciprofloxacin, erythromycin, streptomycin, tetracycline and spectinomycin),that reported a moderate effect. The combination of PITC with ciprofloxacin and erythromycin against S.aureus exhibited a good antimicrobial efficacy, due to an additive effect (the diameter of inhibition zones increased from 30 to 40 mm for ciprofloxacin and almost the double for erythromycin). The other combinations reported unsatisfactory results against both bacteria. The study of the physiological changes induced by PITC action demonstrated the interaction between the electrophilic compound and the bacterial cells at several points that causes changes in membrane properties (decreases negative surface charge, increases surface hydrophilicity and electron donor characteristics). PITC was also found to disturb membrane function, as manifested by phenomena such as cellular disruption and loss of membrane integrity, triggering cell death.This work was supported by Operational Programme for Competitiveness Factors - COMPETE and by FCT - Portuguese Foundation for Science and Technology through Projects Bioresist - PTDC/EBB-EBI/105085/2008; Phytodisinfectants - PTDC/DTP-SAP/1078/2012; the PhD grant (SFRH/BD/63398/2009-Anabela Borges) and the Post-Doctoral grant (SFRH/BPD/81982/2011-Lucia C. Simoes)

Os artrópodes auxiliares generalistas associados às Macieiras na ilha Terceira (Açores)

Neste trabalho apresenta-se uma listagem das espécies de artrópodes auxiliares encontradas nos pomares de macieiras (Malus sp.) durante o decorrer dos projectos INTERFRUTA e INTERFRUTA II (durante o período de 2003 a 2007), com comentários relativos à biologia e distribuição das espécies mais abundantes

Os artrópodes auxiliares generalistas associados às bananeiras na ilha Terceira (Açores)

"A biodiversidade dos artrópodes associados às fruteiras dos Açores era, até há poucos anos, quase completamente desconhecida, resumindo-se apenas a listagens de pragas e indicação de uma ou outra espécie de auxiliar (e.g., Garcia & Furtado, 1980; Schanderl & Almeida, 1992; Cruz De Boelpaepe & Teixeira, 1990; Soares et al., 1992, 1994, 1996; Costa-Comelles et al., 1994). Com o projecto INTERFRUTA (Lopes et al., 2005) foi possível realizar um inventário mais ou menos exaustivo da diversidade de artrópodes predadores generalistas que podem actuar como auxiliares no combate a muitas pragas. Este projecto teve início em 2003 e resultou já num maior conhecimento dos artrópodes associados a quatro culturas frutícolas (bananeiras, citrinos, macieiras e pessegueiros) da Ilha Terceira (ver Santos et al. 2005a, b, 2009). Em 2006 este projecto foi continuado através do INTERFRUTA II. […].Neste trabalho apresenta-se uma listagem das espécies de artrópodes predadores generalistas encontrados em pomares de bananeiras (Musa sp.), com comentários relativos à biologia e distribuição das espécies mais comuns." (da Introdução