Mecanismo de infecção do fungo Metarhizium anisopliae no carrapato Boophilus microplus em condições experimentais The penetration of the fungus Metarhizium anisopliae on Boophilus microplus in experimental conditions

O objetivo do presente trabalho foi avaliar o mecanismo de penetração do fungo Metarhizium anisopliae em Boophilus microplus em condições experimentais. As infecções foram realizadas utilizando amostra de M. anisopliae isolada de carrapatos. A suspensão de conídios do fungo foi preparada utilizando água destilada e espalhante adesivo Tween 80 e foi quantificada na concentração de 10(8) conídios/ml. As fêmeas ingurgitadas foram banhadas nesta suspensão durante cinco minutos e, após este período, foram levadas à câmara climatizada. Três dias após a infecção, as fêmeas foram fixadas utilizando tetróxido de ósmio e glutaraldeído, posteriormente desidratadas em bateria de álcool etílico com acetona. Após a desidratação, esse material foi levado à metalização e ao microscópio eletrônico de varredura, onde se observou a fixação dos conídios na cutícula das fêmeas, havendo germinação e a dilatação da extremidade do tubo germinativo em todas as amostras. Esta dilatação observada foi devido à formação do apressório, apesar de não ser possível observar esta estrutura sobre a cutícula das fêmeas ingurgitadas. O tetróxido de ósmio mostrou ser um excelente fixador para fungos, enquanto o glutaraldeído mostrou ser eficiente na fixação do artrópode. Conclui-se que a forma principal de penetração deste entomopatógeno em B. microplus é através da cutícula. Cabe aqui frisar que esta é a primeira vez que é descrito o mecanismo de penetração de M. anisopliae em carrapatos.<br>The objective of the present communication has been to draw attention to the mode of penetration of the fungus Metarhizium anisopliae through the cuticle of Boophilus microplus under experimental conditions. Samples of M. anisopliae isolated from naturally infected ticks were used to prepare a suspension of 108 conidia/ml in a destilled water with 2% of Tween 80. The engorged females were submergged in this suspension for five minutes, then transferred to 27 &plusmn; 1 &deg;C and > 80% RH in climatized chamber. Three days after the infection, females were fixed in either osmium tetroxide or glutaraldehyde, and dehydrated in alcohol / acetone for SEM. Fixation of conidia in the cuticle, formation of germinative tube and appressoria were seem. It was suggested that the penetration of this entomopathogenic fungus is primarily through the cuticle. The fixation of the fungus for SEM was best accomplished by the osmium tetroxide whereas the glutaraldehyde was more efficient fixative for the tick. It is the first time that the penetration’s mechanism of M. anisopliae is described in ticks

Efeitos de Beauveria bassiana (Bals) Vuill e Metarhizium anisopliae (Metsc) Sorok sobre fêmeas ingurgitadas de Amblyomma cajennense (Fabricius, 1787) em condições de laboratório Effects of Beauveria bassiana (Bals) Vuill and Metarhizium anisopliae (Metsc) Sorok on engorged females of Amblyomma cajennense (Fabricius, 1787) in laboratory conditions

<abstract language="eng">The in vitro susceptibility of Amblyomma cajennense engorged females to some isolated of the fungus Beauveria bassiana and Metarhizium anisopliae was verified and lethal concentrations (LC 50 and LC 90) were calculated. The females were dived in conidia suspensions for five minutes, and kept in climatically controlled chambers BOD under 27&deg; C and 80% relative humidity. Each bioassay had four treatments in concentrations of 10(5),10(6),10(7)e10(8) conidia/ml. A control group was also used. The following characteristics were evaluated: weight and period of oviposition, indexes of reproductive and nutritional efficiency and percentage of microbiological control. A dose dependent negative effect was observed in ticks treated with the suspension. All isolates tested cause a negative effect on in vitro tests of engorged females of A. cajennense, suggesting its potential for microbiological control of tick's species

Ação in vitro dos fungos Beauveria bassiana (Bals) Vuill e Metarhizium anisopliae (Metsch) Sorok sobre ninfas e adultos de Amblyomma cajennense (Fabricius, 1787) (Acari: Ixodidae) In vitro action of the fungi Beauveria bassiana (Bals) Vuill and Metarhizium anisopliae (Metsch) Sorok on ninphs and adults of Amblyomma cajennense (Fabricius, 1787) (Acari: Ixodidae)

O trabalho teve por objetivo verificar a mortalidade in vitro de ninfas e adultos de Amblyomma cajennense frente à ação de isolados dos fungos Beauveria bassiana e Metarhizium anisopliae. Foram avaliados três isolados de M. anisopliae (959, 319 e E9) e dois de B. bassiana (986 e 747). As suspensões de conídios foram preparadas a partir de fungos produzidos em meio de arroz, e cada bioensaio foi constituído de quatro tratamentos nas concentrações 10(5), 10(6), 10(7), 10(8) conídios/ml e um grupo-controle. A análise constou da observação do percentual de mortalidade, 15 dias após o tratamento ou após a ecdise de adultos. Foram observadas diferenças significativas entre os tratamentos quanto à mortalidade para todos os isolados e todos os instares. Nos grupos tratados houve aumento considerável na mortalidade à medida que se aumentava a concentração de conídios na suspensão. Conclui-se que todos os isolados testados causaram mortalidade em testes in vitro sobre esses estádios evolutivos, sugerindo o controle do A. cajennense pela ação desses fungos.<br>This work aimed at the evaluation of the in vitro susceptibility of Amblyomma cajennense nimphs and adults to isolates of Beauveria bassiana and Metarhizium anisopliae fungi. Three isolates of M. anisopliae (959, 319 e E9) and two of B. bassiana (986 e 747) were used. Conidia suspensions were made from fungi grown up in a rice culture medium and each test consisted of four treated groups (10(5), 10(6), 10(7), 10(8) conidia/ ml) plus a control group. Viability of individuals was assessed 15 days after treatment or after adult ecdisis. Significative differences were found for all treatments and for all stages studied. A large reduction in the viability of ticks was observed, and this effect increased as conidia concentration raised. Based upon the results obtained, it can be concluded that all isolates tested presented an in vitro lethality for the biological stages of A. cajennense evaluated, suggesting a potential use in the biological control of this tick species

Ação do fungo Beauveria bassiana (Balsamo) Vuillemin, 1912 sobre a fase parasitária do carrapato Anocentor nitens (Neumann, 1897) Schulze, 1937 (Acari: ixodidae) Action of the fungus Beauveria bassiana (Balsamo) Vuillemin, 1912 on the parasitic phase of the tick Anocentor nitens (Neumann, 1897) Schulze, 1937 (Acari: ixodidae)

A patogenicidade do fungo Beauveria bassiana (isolado 986) foi avaliada no desenvolvimento da fase parasitária do Anocentor nitens, acompanhando o desenvolvimento de larvas não alimentadas até o estágio adulto. Foram utilizados dois tratamentos e um grupo controle com cinco repetições cada. No tratamento 1 (T1), as orelhas dos bovinos foram banhadas com a suspensão fúngica de 10(8) conídios ml-1; no tratamento 2 (T2), as orelhas foram banhadas com água destilada e espalhante adesivo. No grupo controle (C), as orelhas foram banhadas com água destilada. Após 24 horas dos tratamentos, as orelhas de cada animal foram infestadas com 100mg de larvas. Os parâmetros analisados, em cada tratamento, foram: número e peso de fêmeas recuperadas; períodos de pré-postura, postura, incubação, eclosão e longevidade; percentual de eclosão; peso da massa de ovos e da quenógina; índices de eficiência reprodutiva e nutricional. Verificou-se que, no T1 e T2, o número de fêmeas recuperadas, após 35 dias, foi significantemente menor (P<0,05) que no C. O número de fêmeas recuperadas foi 35, 70 e 117 fêmeas, no T1, T2 e C, respectivamente. As fêmeas oriundas das larvas sobreviventes dos grupos tratados não sofreram ação deletéria do entomopatógeno avaliado.<br>This study evaluated the pathogenicity of the fungus Beauveria bassiana (Isolate 986) on the development of the parasitic phase of Anocentor nitens by accompanying the development of unfed larvae until the adult stage. Two treated and one control group were used with five repetitions each. In the first treated group (T1), cattle ears were bathed with a fungal suspension of 10(8) conidia ml-1, second treated group (T2), the ears were bathed with distilled water and Tween 80 1% and the control group (C), the ears were bathed with distilled water. One day after treatment, the ears of each animal were infested with 100 mg of larvae. The parameters analyzed in each treatment were: number and weight of females recovered; periods of pre-oviposition, oviposition, incubation, eclosion and longevity; percentage of eggs hatched; weight of the egg mass and of females after oviposition. We found that in the two treated groups the number of females recovered was significantly lower (P<0.05) than in the control group. 35, 70 and 117 females were recovered from the T1, T2 and C, respectively. The females obtained from the surviving larvae of the treated groups did not suffer any deleterious effects from the entomopathogen studied

Controle de larvas de Boophilus microplus por Metarhizium anisopliae em pastagens infestadas artificialmente Control of Boophilus microplus larvae by Metarhizium anisopliae in artificially infested pastures

O objetivo deste trabalho foi avaliar a eficiência do controle exercido por Metarhizium anisopliae na população de Boophilus microplus, em pastagens de Brachiaria brizantha, e do híbrido Tifton 85 (Cynodon spp.), artificialmente infestadas com fêmeas ingurgitadas do carrapato. Trinta canteiros com 1 m² de área cada foram distribuídos aleatoriamente. Quinze foram pulverizados com esporos do fungo e quinze controles em cada forrageira, constituindo cinco repetições de cada tratamento, foram infestados com número e peso padronizados de fêmeas ingurgitadas do ácaro. Aplicou-se o fungo, na concentração de 1,8x10(8) conídios mL-1, em três situações: pulverização antes da infestação com o carrapato, após a infestação e posterioriormente à emergência das primeiras larvas nos capins. A ação do fungo foi avaliada no 35º, 38º, 41º, 48º, 55º e 61º dia pós-infestação, por meio da contagem de larvas recuperadas. Obteve-se controle de larvas do ácaro, que, nas avaliações realizadas entre o 35º e o 48º dia pós-infestação, variou entre 87% e 94%. As médias das contagens de estágios larvares do carrapato foram menores em todas as amostragens realizadas no capim-Tifton 85, indicando que houve efeito da pastagem na ação do fungo. A situação de aplicação influencia a atividade do fungo, com melhor resultado nas coletas realizadas entre o 41º e 55º dia após infestação em B. brizantha, e aplicação dos conídios logo após a emergência das primeiras larvas.<br>The objective of this work was to evaluate the efficiency of Metarhizium anisopliae fungus against Boophilus microplus population in Brachiaria brizantha and Tifton 85 (Cynodon) pastures, artificially infested with tick engorged females. Thirty plots of 1 m² each were randomly distributed in fifteen treated and fifteen control groups per type of grass, establishing five repetitions for each treatment. Pastures were infested with engorged tick females standardized by number and weight. Metarhizium anisopliae suspension with 1.8x10(8) conidia mL-1 concentration was sprayed on the plot in three different assays, prior infested with tick females, immediately after tick inoculation and at first larvae emergency. The fungus action was evaluated at 35th, 38th, 41st, 48th, 55th and 61st day post infestation by counting recovered larvae. A significative reduction of larvae counts occurred in fungus treated groups during 35th to 48th day post infestation, ranging between 87% and 94% of efficacy on tick larvae control. The mean values for larvae counting in Tifton 85 pasture were lower than in B. brizantha plot in all analysis, suggesting the pasture effect on fungus action. Treatment strategy influenced on M. anisopliae activity, which demonstrated better results at 41st and 55th day post infestation in B. brizantha, submitted to conidia challenge after larvae emergency