Associação de cumestrol à hidroxipropil-β-ciclodextrina : desenvolvimento, caracterização, avaliação da permeação cutânea e do efeito cicatrizante

O cumestrol pertence à classe dos coumestanos e está presente em várias plantas, tais como a soja, alfafa, trevo amarelo e trevo vermelho. Diversos estudos relatam sua afinidade pelos receptores estrogênicos de onde decorre sua classificação como fitoestrógeno. O cumestrol também tem sido referido como uma substância com atividade antioxidante e anti-inflamatória marcantes. No entanto, não há relatos sobre uma possível atividade cicatrizante. O cumestrol é uma molécula que apresenta reduzida hidrossolubilidade o que representa uma limitação, tanto para o desenvolvimento tecnológico de produtos de aplicação na pele, bem como para a expressão de sua atividade biológica. Neste sentido, a sua associação com ciclodextrina representa uma estratégia interessante para a promover a sua hidrossolubilidade, bem como a sua penetração cutânea. O presente trabalho tem como objetivo avaliar a permeação cutânea do cumestrol, na sua forma livre ou associada à hidroxipropil-β-ciclodextrina (HPβCD), a partir de uma base hidrofílica de hidroxipropilmetilcelulose (HPMC). Para avaliar o teor de cumestrol nas formulações e nas diversas camadas da pele foi desenvolvido um método bioanalítico indicativo de estabilidade utilizando-se cromatografia líquida de alta eficiência. O cumestrol mostrou-se instável frente à exposição contínua à luz UVC e em meio básico (NaOH 1M), e a reação de degradação obedeceu, respectivamente, cinética de ordem zero e primeira ordem. O método bioanalítico mostrou-se linear, específico, exato, preciso e robusto para quantificação de cumestrol nas diferentes camadas da pele. Os estudos in vitro de permeação cutânea (célula de Franz, utilizando pele de orelha de suínos) realizados a partir de hidrogéis e os estudos in vitro de atividade cicatrizante (cultura de fibroblastos), revelaram que a HPβCD determinou um efeito promotor, tanto da penetração do cumestrol na pele, bem como de seu efeito cicatrizante nos fibroblastos. Tais resultados são inéditos e evidenciam o potencial uso do cumestrol em preparações destinadas à prevenção do envelhecimento cutâneo e à promoção da cicatrização.Coumestrol belongs to the class of coumestans and is present in many plants, such as soybeans, alfalfa, yellow clover and red clover. Several studies have reported their affinity for estrogen receptors resulting in its classification as phytoestrogen. Coumestrol has also been referred as a substance with remarkable antioxidant and anti-inflammatory activity. However, there are no reports about a possible wound healing activity. Coumestrol is a molecule that has reduced water solubility, resulting in a limitation for technological development of products applied on the skin as well as the expression of its biological activity. In this sense, its association with cyclodextrin represents an interesting strategy to promote water solubility, and its skin penetration. Therefore, this work aims to evaluate the coumestrol skin permeation, either in its free form or associated with hydroxypropyl-β- cyclodextrin (HPβCD), from a hydroxypropyl methylcellulose (HPMC) hydrophilic base. To assess the coumestrol concentrations in formulations and in various skin layers it was developed a bioanalytical method that is indicative stability using high performance liquid chromatography. Coumestrol proved to be unstable after continuous exposure to UVC light and in basic medium (1 M NaOH), and the degradation reaction followed, respectively, zero-order and first order kinetics. The bioanalytical method was linear, specific, accurate, precise and robust for coumestrol quantitation in different skin layers. In vitro skin permeation studies (Franz cell using porcine ear skin) performed with hydrogels and in vitro wound healing effects (fibroblast cultures) showed that the HPβCD determined the promoter effect, both coumestrol skin penetration and its healing effect on fibroblasts. These new results show the potential use of coumestrol in preparations for prevention aging skin and promoting healing

Composição farmacêutica compreendendo achyrobichalcona e uso do composto achyrobichalcona

Universidade Federal do Rio Grande do SulCiências Básicas da SaúdeFarmáciaDepositad

Profile of pterostilbene-induced redox homeostasis modulation in cardiac myoblasts and heart tissue

This study was designed to investigate the effect of pterostilbene (PTS) on cardiac oxidative stress in vitro, as this is a simple and promising methodology to study cardiac disease. Cardiac myoblasts (H9c2 cells) and homogenised cardiac tissue were incubated with the PTS and cyclodextrin (PTS ? HPbCD) complex for 1 and 24 h, respectively, at concentrations of 50 lM for the cells and 25 and 50 lM for cardiac tissue. The PTS ? HPbCD complex was used to increase the solubility of PTS in water. After the pretreatment period, cardiomyoblasts were challenged with hydrogen peroxide (6.67 lM) for 10 min, while cardiac tissue was submitted to a hydroxyl radical generator system (30 min). Cellular viability, oxidative stress biomarkers (e.g. total reactive oxygen species (ROS), carbonyl assay and lipoperoxidation) and the antioxidant response (e.g. sulfhydryl and the antioxidant enzyme activities of superoxide dismutase, catalase and glutathione peroxidase) were evaluated. In cardiomyoblasts, the PTS ? HPbCD complex (50 lM) increased cellular viability. Moreover, the PTS ? HPbCD complex also significantly increased sulfhydryl levels in the cells submitted to an oxidative challenge. In cardiac tissue, lipid peroxidation, carbonyls and ROS levels were significantly increased in the groups submitted to oxidative damage, while the PTS ? HPbCD complex significantly reduced ROS levels in these groups. In addition, the PTS ? HPbCD complex also provoked increased catalase activity in both experimental protocols. These data suggest that the PTS ? HPbCD complex may play a cardioprotective role through a reduction of ROS levels associated with an improved antioxidant response

Pterostilbene reduces experimental myocardial infarction-induced oxidative stress in lung and right ventricle

Fundamento: O pterostilbeno (PS), um composto polifenólico natural e antioxidante, surge como uma intervenção promissora para minimizar danos do infarto agudo do miocárdio (IAM). Objetivo: Este estudo teve como objetivo avaliar o desempenho do PS na promoção da homeostase redox nos pulmões e no ventrículo direito (VD) de animais infartados. Métodos: Ratos Wistar machos (60 dias de idade) foram randomizados em três grupos: SHAM, IAM (infarto) e IAM+PS (IAM + pterostilbeno). Sete dias após o procedimento de IAM, os ratos foram tratados com PS (100 mg/kg/dia) por gavagem por oito dias. Os animais foram depois sacrificados e os pulmões e VD foram coletados para análise do balanço redox (diferenças foram consideradas significativas quando p<0,05). Resultados: Nossos resultados mostram que o IAM desencadeia a interrupção redox no VD e nos pulmões, o que pode contribuir para danos induzido pelo IAM nesses órgãos. Consistentemente, o PS mitigou o estresse oxidativo e restaurou as defesas antioxidantes (Glutationa – GSH nos pulmões: SHAM = 0,79 ± 0,07; IAM = 0,67 ± 0,05; IAM + PS = 0,86 ± 0,14; p<0,05), indicando seu papel protetor neste cenário. Conclusão: Nosso trabalho evidencia o potencial do uso de PS como abordagem terapêutica adjuvante após IAM para proteção dos tecidos pulmonares e cardíacos direitos.Background: Pterostilbene (PS), a natural and antioxidant polyphenolic compound emerges as a promising intervention in improving the myocardial infarction (MI) damages. Objetives: This study aimed to evaluate PS actions in promoting redox homeostasis in lungs and right ventricle (RV) of infarcted animals. Methods: Male Wistar rats (60 day-old) were randomized into three groups: SHAM, MI (infarcted), and MI+PS (MI+pterostilbene). Seven days after MI procedure, rats were treated with PS (100 mg/kg/day) via gavage for eight days. Animals were euthanized and the lungs and RV were harvested for analyses of redox balance (Differences were considered significant when p<0.05). Results: Our results show that MI triggers a redox disruption scenario in RV and lungs, which can contribute to MI-induced damage on these organs. Consistently, PS mitigated oxidative stress and restored antioxidant defenses (GSH in lungs: SHAM= 0.79±0.07; MI=0.67±0.05; MI+PS=0.86±0.14; p<0.05), indicating its protective role in this scenario. Conclusions: Our work evidences the PS potential use as an adjuvant therapeutic approach after MI focusing on protecting pulmonary and right-sided heart tissues

Isolamento de achyrobichalcona e 3-O-metilquercetina a partir de inflorescências de Achyrocline satureioides utilizando cromatografia em contracorrente de alta performance (HPCCC) e avaliação do potencial citotóxico in vitro em linhagem de câncer de mama MDA-MB-231

Achyrocline satureioides (Lam.) DC. Asteraceae, conhecida popularmente como marcela, é uma espécie vegetal estudada sob os mais diversos aspectos, químico, tecnológico e farmacológico, sendo muitas de suas propriedades atribuídas aos constituintes fenólicos presentes na planta. As investigações sobre a composição química de extratos hidroetanólicos das inflorescências de Achyrocline satureioides demonstrou a presença dos flavonoides quercetina (QCT), luteolina (LUT) e 3-O-metilquercetina (3OMQ), os quais são metabólitos secundários frequentemente relacionados às atividades biológicas. Além desses flavonoides, a achyrobichalcona (ACB) uma bichalcona de estrutura química e ocorrência inéditas foi recentemente identificada na espécie. O primeiro capítulo da tese se refere ao estudo de revisão utilizando metodologias bibliométricas, sobre as produções científicas e tecnológicas referidas na base de dados do Web of Science do Institute for Scientific Information (ISI), pertencente a Thompson-ReutersTM Company envolvendo chalconas para o tratamento do câncer/tumores. O objetivo do estudo foi mapear as publicações científicas e tecnológicas na última década, de 2006 a 2016. As palavras-chave utilizadas foram: chalcona seguida pelo símbolo (*), câncer e tumor. Independentemente da origem destas chalconas, observou-se oportunidades para o desenvolvimento de produtos visando sua vetorização em alvos biológicos para o tratamento do câncer. seguinte se caracterizou pela obtenção simultânea de frações e substâncias isoladas, bem como a identificação de novos constituintes fenólicos de inflorescências de Achyrocline satureioides. Com o intuito de obter elevadas concentrações destas substâncias com o mínimo de interferentes possível, foram realizadas extrações sucessivas com soxhlet (com os solventes hexano, acetato de etila e metanol), seguido por etapas de isolamento e purificação utilizando técnica de cromatografia em contracorrente de alta performance (HPCCC). Esta segunda parte do trabalho foi realizado em duas etapas: 1) obtenção de duas frações enriquecidas por meio do fracionamento do extrato; e 2) isolamento de ACB e 3OMQ a partir destas frações enriquecidas. A análise da fração 1 (F1) revelou a presença de outros flavonoides-agliconas que foram analisados por cromatografia líquida de ultra eficiência acoplada a detector de espectrometria de massa quadrupolo de alta definição (UPLC-QTOF/HDMS) e de ressonância magnética nuclear (RMN). Os constituintes foram identificados como canferol, isocanferol, 3,3’-di-O-metilquercetina, sendo a presença dos dois últimos relatada pela primeira vez em inflorescências da Achyrocline satureioides. A ACB e 3OMQ foram obtidas com alto grau de pureza e bom rendimento, a partir da F1 e F2, respectivamente, utilizando colunas semi-preparativa e analítica de HPCCC. Como resultado, obteve-se ACB e 3OMQ com alta pureza, respectivamente, 98% e 97% (p/p) e excelente rendimento a partir de extrato seco bruto obtido por sohxlet (69% e 65%, respectivamente), tornando estas substâncias adequadas para uso em estudos de atividade biológica. A etapa seguinte objetivou avaliar comparativamente as propriedades citotóxicas apresentadas pelos isolados, ACB e 3OMQ. Primeiramente, foi avaliado o efeito citotóxico das moléculas isoladas, ACB e 3OMQ, frente a uma linhagem celular de câncer de mama MDA-MB-231 e comparada à linhagem celular epitelial primária não transformada MCF-12A. Os resultados demonstraram que a ACB apresentou efeito citotóxico (GI50 16,68 μM) em relação à linhagem celular MDA-MB-231, com índice de seletividade superior a 2, quando comparado à linhagem MCF-12A. A 3OMQ também apresentou efeito citotóxico (GI50 43,69 μM) sobre o MDA-MB-231; no entanto, o índice de seletividade foi inferior a 2. Subsequentemente, analisou-se a ativação de caspases nas células MDA-MB-231 por citometria de imagem celular e Western Blot. ACB e 3OMQ não ativaram a caspase-8 (mecanismo extrínseco), mas foram capazes de ativar a caspase-3, caspase-7 e caspase-9. Os resultados sugerem que a apoptose na linhagem celular MDA-MB-231 foi induzida por meio de mecanismo intrínseco dependente de caspases. O conjunto de informações obtidas, somadas a maior seletividade demonstram que a ACB é um potente candidato a agente anticâncer.Achyrocline satureioides (Lam.) DC. Asteraceae, popularly known as marcela, is a plant that has been widely studied in chemical, technological and pharmacological aspects, and became well known for its properties attributed to the phenolic constituents present in the species. The investigations on the chemical composition of hydroethanolic extracts of Achyrocline satureioides inflorescences have demonstrated the presence of flavonoids quercetin (QCT), luteolin (LUT) and 3-O-methylquercetin (3OMQ), secondary metabolites often correlated with biological activities. In addition to these flavonoids, the achyrobichalcone (ACB) a bichalcone with chemical structure and occurrence unprecedented was recently identified in the species. The first chapter of the thesis refers to a review study using bibliometric methodologies on the scientific and technological productions referred in the Web of Science database of the Institute for Scientific Information (ISI) belonging to Thompson-ReutersTM Company involving chalcones for the cancer/tumors treatment. The aim of the study was to map the scientific and technological publications in the last decade, from 2006 to 2016. The keywords used were: chalcone followed by the symbol (*), cancer and tumor. Regardless of the origin of these chalcones, there were opportunities for the development of products intended for vectorization in biological targets for cancer treatment. The next stage was characterized by the simultaneous obtaining of fractions and isolated substances, as well as the identification of new phenolic constituents of Achyrocline satureioides inflorescences. In order to obtain high concentrations of these substances with as little interfering compounds as possible, successive extractions using soxhlet (with hexane, ethyl acetate and methanol solvents) were carried out followed by isolation and purification steps using high performance countercurrent chromatography (HPCCC). This second part of the work was carried out in two steps: 1) obtaining two enriched fractions through extract fractionation; and 2) isolation of ACB and 3OMQ from these enriched fractions. The analysis of fraction 1 (F1) revealed the presence of other flavonoids-aglycones that were analyzed by ultra-high performance liquid chromatography coupled to high definition quadrupole mass spectrometry detector (UPLC-QTOF/HDMS) and nuclear magnetic resonance (NMR). The constituents were identified as kaempferol, isokaempferide, 3,3'-di-O-methylquercetin. The presence of the last two were reported for the first time in Achyrocline satureioides inflorescences. ACB and 3OMQ were obtained with high purity and good yield, from F1 and F2, respectively, using HPCCC semi-preparative and analytical columns. As result, ACB and 3OMQ were obtained with high purity, respectively, 98% and 97% (w/w) and excellent yield from dry extract obtained by sohxlet (69% and 65% respectively), make them available for biological studies. The next step was to evaluate the cytotoxic properties of the isolates, ACB and 3OMQ comparatively. First, the cytotoxic effect of the isolated molecules, ACB and 3OMQ, were evaluated against a MDA-MB-231 breast cancer cell line and compared to an MCF-12A non-transformed primary epithelial cell line. The results showed that the ACB presented a cytotoxic effect (GI50 16.68 μM) on MDA-MB-231 cell line, with a selectivity index higher than 2 when compared to the MCF-12A. 3OMQ also had a cytotoxic effect (GI50 43.69 μM) on MDA-MB-231, however, the selectivity index was less than 2. Subsequently, the activation of caspases in MDA-MB-231 cells were analyzed by cell imaging and Western blot analysis. ACB and 3OMQ did not activate caspase-8 (extrinsic mechanism) but were able to activate caspase-3, caspase-7 and caspase-9. The results suggest that apoptosis in the MDA-MB-231 cell line was induced by caspase-dependent intrinsic mechanism. The set of information obtained, added to the greater selectivity demonstrate that ACB is a potent candidate as anticancer agent

Monitoramento do processo de compressão de ibuprofeno utilizando controle estatístico

O Controle Estatístico de Processo (CEP) é uma ferramenta bastante utilizada para auxiliar no controle da qualidade de parâmetros físicos como peso médio, dureza e friabilidade. Através das cartas de controle é possível detectar desvios dos parâmetros do processo, reduzindo a quantidade de produtos fora da especificação e, consequentemente, os custos da produção. A avaliação de trinta lotes de ibuprofeno em uma indústria farmacêutica, utilizando controle estatístico de processo, permitiu o fornecimento de informações imprescindíveis para a investigação detalhada dos pontos críticos do processo, diagnosticando as possíveis não conformidades na etapa de compressão deste fármaco. Desta maneira, podem-se propor atividades de melhoria, através da identificação e eliminação das causas especiais de variação no processo, com a finalidade de produzir comprimidos com qualidade

Composição farmacêutica compreendendo achyrobichalcona e uso do composto achyrobichalcona

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