Hypoosmotic Test Combined with Coomassie Blue Staining in Llama Sperm

La integridad de las membranas plasmática y acrosomal es de gran importancia para determinar la capacidad fertilizante de los espermatozoides. Los objetivos de este trabajo fueron: 1) evaluar la funcionalidad de la membrana plasmática a través del tiempo mediante el test hipoosmótico (HOS) y 2) combinar la técnica de HOS con la tinción de Coomassie Blue (CB) para evaluar simultáneamente la funcionalidad de membrana y la integridad acrosomal en espermatozoides de semen fresco de llama. Se obtuvieron 12 eyaculados de 6 machos mediante electroeyaculación bajo anestesia general. Se realizó el test de endósmosis con y sin fijación en paraformadehído y evaluando a diferentes tiempos de conservación (0 hs sin fijar y 0, 2, 4 y 24 hs fijado). Una alícuota de la muestra fijada se procesó y se tiñó con CB. No se observaron diferencias significativas (p>0,05) en el porcentaje de espermatozoides con membranas funcionales al comparar la muestra no fijada y las muestras preservadas durante diferentes tiempos en la solución de fijación. Tampoco se observaron diferencias significativas (p>0,05) en el porcentaje de endósmosis en las muestras en las que sólo se realizó HOS y en las que se realizó HOS en combinación con CB. Es posible diferir el momento de la evaluación de la funcionalidad de membrana de los espermatozoides de llama mediante la técnica de HOS de la colecta del semen. La técnica dual (HOS + CB) permite evaluar en forma simultánea la funcionalidad de las membranas e integridad acrosomal en espermatozoides de semen fresco de llama, facilitando el trabajo a campo.To stablish sperm fertilization capacity membrane integrity and functionality are important characteristics to determine. The objectives of the present study were: 1) to evaluate the functionality of the plasma membrane over time by the hypoosmotic test (HOS) and 2) combined the HOS test with Coomassie Blue (CB) staining to simultaneously evaluate the functionality of membrane and acrosomal integrity in raw llama sperm. A total of 12 ejaculates from 6 adult llama males were collected using electroejaculation under general anesthesia. Hypoosmotic swelling test was performed with and without fixation in paraformaldehyde and the samples were evaluated over time (0 h without fixation and 0; 2; 4; and 24 h when fixed). To perform the CB stain one aliquot of the fixed samples was used. No significant differences (p>0.05) were observed in the percentage of sperm with membrane function when comparing fixed samples analyzed over time versus the samples not fixed. Also, no statistical differences (p>0.05) were observed on membrane functionality between the two protocols used; HOS test versus HOS combined with the CB stain. It is possible to differ the moment of the evaluation of the membrane functionality of llama spermatozoa using the HOS technique from the semen collection. The use of the dual technique (HOS + CB) allow the evaluation of sperm membrane function and acrosome status in raw llama semen with only one technique that can be applied on the field.Fil: Carretero, Maria Ignacia. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Area de Teriogenología; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Pigretti, Carla. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Area de Teriogenología; ArgentinaFil: Bertuzzi, Mariana Lucía. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Area de Teriogenología; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Fumuso, Fernanda Gabriela. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Area de Teriogenología; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentin

Comparison of extenders with the addition of egg yolk for cooling alpaca sperm obtained from deferent ducts

The use of non-commercial and commercial extenders for cooling alpaca sperm has already been reported, the latter showing certain advantages over the first. The Andromed® (AM) extender was created for use in ruminants and has also been tested in ejaculated and epididymal alpaca sperm. According to the manufacturer, this extender does not need the addition of egg yolk (EY); however, it is known that the addition of EY to some extenders improves the preservation of cooled sperm. The objective of this study therefore was to compare a non-commercial extender (Tris) with the addition of EY vs. the commercial extender AM with and without the addition of EY, for cooling alpaca sperm obtained from diverted deferent ducts. Fifteen pools of deferent duct sperm were formed using samples from two or three different males for each. Each sperm pool was evaluated and then divided into three aliquots that were diluted to a final concentration of 30 × 106 sperm ml-1 (0 h) with either: (1) Tris with 20% EY (T-EY), (2) AM, or (3) AM with 20% EY (AM-EY). Samples were cooled to 5°C and the following sperm parameters were evaluated after 24 and 48 h of storage: motility, viability, membrane function, acrosome integrity, morphology, and chromatin condensation. Motility was also evaluated after 72 h of storage. The samples that best preserved progressive and total sperm motility at the 24 and 48 h evaluation periods were the ones diluted with AM-EY, observing that with this extender these motility patterns decreased significantly after 72 h of storage compared to time 0 h (p < 0.05). A significant decrease (p < 0.05) in total and progressive motility was observed at 48 h for the T-EY and AM extender compared to 0 h. AM was the only extender in which the percentages of viable sperm decreased significantly (p < 0.05) after 48 h of conservation. For the rest of sperm parameters evaluated, no significant differences were observed between any of the extenders at any evaluation time. The Andromed® extender with the addition of 20% EY could be an alternative option for cooling alpaca sperm obtained from deferent ducts.Fil: Bertuzzi, Mariana Lucía. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigacion y Tecnología en Reproducción Animal; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Area de Teriogenología; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario; ArgentinaFil: Torres, Edita Yola. Universidad Nacional del Altiplano Puno; PerúFil: Huanca, Teodosio. Instituto Nacional de Innovación Agraria. Centro de Investigación y Producción Quinsachata; PerúFil: Neild, Deborah. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigacion y Tecnología en Reproducción Animal; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Area de Teriogenología; ArgentinaFil: Carretero, Maria Ignacia. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigacion y Tecnología en Reproducción Animal; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Area de Teriogenología; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario; Argentin

Comparación de dos diluyentes comerciales para refrigerar semen de llama

El uso de diluyentes comerciales para la criopreservación de semen presenta ciertas ventajas respecto a los artesanales, ya que son de fácil preparación y poseen menor variabilidad en su composición permitiendo obtener resultados más repetibles. No existen diluyentes comerciales diseñados específicamente para los camélidos sudamericanos. Aunque formulado para el bovino, el Andromed® (AM) ha sido utilizado para refrigerar espermatozoides de alpaca con resultados variables. Existe un único reporte que evalúa el uso de los diluyentes AM y Triladyl® para refrigerar espermatozoides de llama obtenidos por aspiración pos-coital. El objetivo de este estudio fue comparar el efecto delos diluyentes AM y Androstar Plus® (AS) en la refrigeración de semen de llama obtenido por electroeyaculación. El estudio fue llevado a cabo en la FCV-UBA. Se colectaron 14eyaculados de 4 machos de llama. Cada eyaculado fue evaluado y dividido en 2 alícuotas que se diluyeron con AM y AS (0 hs), alcanzando en ambas una concentración final de50x106 espermatozoides/ml. Las muestras fueron refrigeradas a 5°C en Equitainer® y se evaluaron las siguientes características seminales luego de 24 y 48 hs de conservación: movilidad, funcionalidad de membrana, viabilidad, integridad acrosomal, morfología y condensación de la cromatina. Los resultados fueron analizados utilizando un diseño factorial (semen fresco, AM0, AS0, AM24, AS24, AM48 y AS48). Se observó un descenso significativo en la movilidad total en AS 24 y 48 hs comparado con las 0 hs(AS0: 52,6±13,8%; AS24: 23,4±12,9% y AS48: 16,4±15,3%). Las muestras refrigeradas con AM mostraron una disminución significativa de la movilidad total a las 48 hs de conservación respecto al tiempo 0, sin haber diferencias significativas entre las 0 y las 24hs ni entre las 24 y las 48 hs (AM0: 51,1±17,4%; AM24: 29,5±25,4% y AM48:21,0±21,4%). El porcentaje de espermatozoides vivos con acrosoma intacto disminuyó en las muestras refrigeradas con AM durante 48 hs comparado con las 0 hs (p˂0,05).Mientras que, el porcentaje de espermatozoides vivos con acrosoma reaccionado fue mayor en AM 48 hs comparado con AS 24 y 48 hs (p˂0,05); sin observar diferencias significativas en el porcentaje de vivos totales entre los diluyentes en los diferentes tiempos. En cuanto a la funcionalidad de membrana, se observó un descenso significativo en AS 48 hs con respecto al semen fresco (50,9±18,4% vs 28,7±12,6%). Aunque no se observaron diferencias significativas en el porcentaje de espermatozoides con morfología normal y cromatina condensada, un mayor porcentaje (p˂0,05) de colas anormales fue observado en las muestras refrigeradas con AS comparadas con el semen fresco y con las muestras refrigeradas con AM (fresco: 11,8±7,9%; AM24: 10,9±5,2%; AM48: 9,5±4,7%;AS24: 19,2±6,0% y AS48: 21,3±12,6%). Aunque ambos diluyentes comerciales lograron conservar las características espermáticas de las muestras refrigeradas en valores aceptables, el diluyente Andromed® mostró mejores resultados y podría ser considerado como una opción para la refrigeración de semen de llama.Fil: Bertuzzi, Mariana Lucía. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Area de Teriogenología; ArgentinaFil: Fumuso, Fernanda Gabriela. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Area de Teriogenología; ArgentinaFil: Velásquez González, Nicolás. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Area de Teriogenología; ArgentinaFil: Carretero, Maria Ignacia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Area de Teriogenología; ArgentinaX Jornadas de Jóvenes InvestigadoresArgentinaUnivesidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinaria

Sperm selection in cooled llama semen with egg yolk extender

The objective of the study was to separate motile and with functional membrane integrity sperm from diluents in cooled llama semen. A total of 21 ejaculates from 7 llama males were obtained and cooled with the follow methodology. Each sample was incubated with collagenase 0.1% and then divided in two aliquots: R- diluted 1:2 with a lactose-egg yolk diluent (L-E) and Rc- centrifugated at 800 g and the pellet resuspended in L-E diluent. Both samples where them cooled at 5 °C during 24 h. Three different methodologies were used to separate sperm from diluents; Androcoll-E-Large, Percoll® (45%, 45%-70%, 45%-80%, 45%-90% y 60%-90%) and swim up. Motile llama sperm with lower amount of egg yolk was obtain only when using Percoll® 45%, 45%-70%, 45%-80%. After this the remaining samples (14 ejaculates) where processed with the following methods. Raw semen was cooled with seminal plasma (R) and without it (Rc), with the following final treatments; Percoll® 45/70 (R70), 45/80 (R80) and Percoll® 45/70 (Rc70) y 45/80 (Rc80). When sperm variables showed statistical normality results were analyzed with a factorial design, if not a Friedman test was used. The Percoll® Rc80 was the one that separated higher motile and alive sperm free from the diluent compared with the other treatments evaluated. To conclude, this protocol can be used to process cooled llama sperm to apply in assisted reproduction biotechnologies.El objetivo de este trabajo fue obtener espermatozoides móviles, libres de diluyente y con integridad funcional de la membrana plasmática a partir de eyaculados refrigerados de llama. Se refrigeraron un total de 21 eyaculados de 7 machos mediante la siguiente metodología: cada muestra se incubó en una solución de colagenasa al 0,1 % y se dividió dos alícuotas: R: se la diluyó 1:2 con un diluyente en base a lactosa-yema de huevo (L-Y) y Rc: se centrifugó a 800g y el pellet obtenido se resuspendió en 2 ml de L-Y. Ambas muestras se refrigeraron durante 24 hs a 5° C. En 7 eyaculados se probaron las siguientes metodologías: Androcoll-E-Large, Percoll® (45%, 45%-70%, 45%-80%, 45%-90% y 60%-90%) y swim up. Solamente los gradientes de Percoll® 45%-70% y 45%-80% permitieron obtener una fracción de espermatozoides móviles con una menor cantidad de yema, consecuentemente en los restantes 14 eyaculados se realizó el siguiente experimento: refrigerado con plasma seminal (R): Percoll® 45/70 (R70) y 45/80 (R80) y refrigerado sin PS (Rc): Percoll® 45/70 (Rc70) y 45/80 (Rc80). En las variables espermáticas en las que se logró normalidad se utilizó un diseño factorial y en el resto se utilizó el test de Friedman. El gradiente de Percoll® 45/80 realizado en muestras de espermatozoides refrigerados sin plasma seminal (Rc80) fue el que permitió obtener una muestra con un número suficiente de espermatozoides refrigerados móviles, libre de diluyente y con mayor porcentaje de espermatozoides vivos respecto al resto de los gradientes. Por lo tanto, es posible utilizar esta metodología en la preparación de espermatozoides refrigerados de llama para utilizar en protocolos de fertilización asistida.Fil: Giuliano, Susana María. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigacion y Tecnología en Reproducción Animal; ArgentinaFil: Santa Cruz, R.. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Area de Teriogenología; ArgentinaFil: Arraztoa, Claudia Cecilia. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigacion y Tecnología en Reproducción Animal; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Area de Teriogenología; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Fumuso, Fernanda Gabriela. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigacion y Tecnología en Reproducción Animal; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Area de Teriogenología; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Bertuzzi, Mariana Lucía. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigacion y Tecnología en Reproducción Animal; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Area de Teriogenología; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Carretero, Maria Ignacia. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigacion y Tecnología en Reproducción Animal; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Area de Teriogenología; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentin

Sperm selection in cooled llama semen with egg yolk extender

The objective of the study was to separate motile and with functional membrane integrity sperm from diluents in cooled llama semen. A total of 21 ejaculates from 7 llama males were obtained and cooled with the follow methodology. Each sample was incubated with collagenase 0.1% and then divided in two aliquots: R- diluted 1:2 with a lactose-egg yolk diluent (L-E) and Rc- centrifugated at 800 g and the pellet resuspended in L-E diluent. Both samples where them cooled at 5 °C during 24 h. Three different methodologies were used to separate sperm from diluents; Androcoll-E-Large, Percoll® (45%, 45%-70%, 45%-80%, 45%-90% y 60%-90%) and swim up. Motile llama sperm with lower amount of egg yolk was obtain only when using Percoll® 45%, 45%-70%, 45%-80%. After this the remaining samples (14 ejaculates) where processed with the following methods. Raw semen was cooled with seminal plasma (R) and without it (Rc), with the following final treatments; Percoll® 45/70 (R70), 45/80 (R80) and Percoll® 45/70 (Rc70) y 45/80 (Rc80). When sperm variables showed statistical normality results were analyzed with a factorial design, if not a Friedman test was used. The Percoll® Rc80 was the one that separated higher motile and alive sperm free from the diluent compared with the other treatments evaluated. To conclude, this protocol can be used to process cooled llama sperm to apply in assisted reproduction biotechnologies.El objetivo de este trabajo fue obtener espermatozoides móviles, libres de diluyente y con integridad funcional de la membrana plasmática a partir de eyaculados refrigerados de llama. Se refrigeraron un total de 21 eyaculados de 7 machos mediante la siguiente metodología: cada muestra se incubó en una solución de colagenasa al 0,1 % y se dividió dos alícuotas: R: se la diluyó 1:2 con un diluyente en base a lactosa-yema de huevo (L-Y) y Rc: se centrifugó a 800g y el pellet obtenido se resuspendió en 2 ml de L-Y. Ambas muestras se refrigeraron durante 24 hs a 5° C. En 7 eyaculados se probaron las siguientes metodologías: Androcoll-E-Large, Percoll® (45%, 45%-70%, 45%-80%, 45%-90% y 60%-90%) y swim up. Solamente los gradientes de Percoll® 45%-70% y 45%-80% permitieron obtener una fracción de espermatozoides móviles con una menor cantidad de yema, consecuentemente en los restantes 14 eyaculados se realizó el siguiente experimento: refrigerado con plasma seminal (R): Percoll® 45/70 (R70) y 45/80 (R80) y refrigerado sin PS (Rc): Percoll® 45/70 (Rc70) y 45/80 (Rc80). En las variables espermáticas en las que se logró normalidad se utilizó un diseño factorial y en el resto se utilizó el test de Friedman. El gradiente de Percoll® 45/80 realizado en muestras de espermatozoides refrigerados sin plasma seminal (Rc80) fue el que permitió obtener una muestra con un número suficiente de espermatozoides refrigerados móviles, libre de diluyente y con mayor porcentaje de espermatozoides vivos respecto al resto de los gradientes. Por lo tanto, es posible utilizar esta metodología en la preparación de espermatozoides refrigerados de llama para utilizar en protocolos de fertilización asistida.Fil: Giuliano, Susana María. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigacion y Tecnología en Reproducción Animal; ArgentinaFil: Santa Cruz, R.. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Area de Teriogenología; ArgentinaFil: Arraztoa, Claudia Cecilia. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigacion y Tecnología en Reproducción Animal; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Area de Teriogenología; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Fumuso, Fernanda Gabriela. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigacion y Tecnología en Reproducción Animal; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Area de Teriogenología; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Bertuzzi, Mariana Lucía. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigacion y Tecnología en Reproducción Animal; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Area de Teriogenología; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Carretero, Maria Ignacia. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigacion y Tecnología en Reproducción Animal; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Area de Teriogenología; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentin

Efecto del agregado de yema de huevo al diluyente Androstar ® Plus para refrigerar semen de llama

El congelamiento profundo de semen se ha convertido en la biotecnología más difundida para preservar material genético y crear un banco de gametos. Sin embargo, en los camélidos sudamericanos (CSA) no existe hasta el momento, un protocolo que permita su uso comercial, siendo muy bajos los porcentajes de preñez cuando se aplica esta biotecnología (1, 4, 8, 13) . Como una alternativa, la refrigeración de semen presenta muchas ventajas, evitando el traslado de los reproductores y la transmisión de enfermedades venéreas sin requerir tanto equipamiento y con un menor costo de mantenimiento de las muestras. En alpacas, la refrigeración de semen se ha realizado tanto con diluyentes comerciales como no comerciales, obteniendo mejores resultados al utilizar los primeros (2, 5, 12) . Existen muy pocos reportes de semen refrigerado en llamas. En el año 2012, Giuliano y col. (11) probaron diferentes diluyentes caseros para refrigerar semen a 5 °C, observando mayor movilidad, integridad y funcionalidad de la membrana espermática en las muestras refrigeradas con lactosa-yema de huevo (YH) con respecto al resto de los diluyentes. Sin embargo, la tendencia en este campo de investigación apunta a desarrollar protocolos con diluyentes comerciales, ya que son de fácil preparación, poseen menor variabilidad en su composición y permiten obtener resultados más repetibles, requiriendo de menor equipamiento e insumos. Recientemente, Condori-Cruz y col. (6) evaluaron el efecto de dos diluyentes comerciales (Triladyl ® y AndroMed®) sobre la viabilidad espermática luego de la refrigeración a 5 °C durante 24 hs de semen de llama, obteniendo resultados alentadores...Fil: Bertuzzi, Mariana Lucía. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigacion y Tecnología en Reproducción Animal; ArgentinaFil: Di Fonzo, A.. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigacion y Tecnología en Reproducción Animal; ArgentinaFil: Carretero, Maria Ignacia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigacion y Tecnología en Reproducción Animal; Argentin

Efecto del agregado de yema de huevo a un diluyente comercial para la refrigeración de semen de llama

La refrigeración de semen es una biotecnología útil para la que pueden utilizarse diluyentes caseros o comerciales, presentando estos últimos ciertas ventajas sobre los primeros. Si bien no existen diluyentes comerciales diseñados específicamente para los camélidos sudamericanos (CSA), existen reportes del uso de algunos de ellos tanto en alpacas como en llamas. Aunque formulado para rumiantes, el diluyente Andromed® (AM) ha sido utilizado para refrigerar espermatozoides de CSA con resultados variables. De acuerdo al fabricante, este diluyente no requiere la adición de yema de huevo (YH), sin embargo, se conoce que la adición de la misma a algunos diluyentes mejora la criopreservación de los espermatozoides. El objetivo de este estudio fue evaluar el efecto del agregado de YH al diluyente AM en la refrigeración de semen de llama. La experiencia se realizó en la FCV-UBA. Se colectaron 16 eyaculados de 4 llamas que se evaluaron, dividieron en 2 alícuotas y se diluyeron con AM y AM con 20% de YH (AMYH) (0 hs), alcanzando una concentración final de 50 x 106 espermatozoides/ml. Las muestras fueron refrigeradas a 5°C en Equitainer® y se evaluaron las siguientes características seminales luego de 24 y 48 hs de conservación: movilidad, funcionalidad de membrana, viabilidad, integridad acrosomal y morfologías espermáticas. Los resultados fueron analizados utilizando un diseño factorial y un test de Kruskall-Wallis. Al diluir las muestras con AMYH (0 h) se observó una modificación en los patrones de movilidad, aumentando la movilidad progresiva y disminuyendo la movilidad oscilatoria (p˂0.05), sin observarse diferencias en la movilidad total (MT) respecto al semen fresco ni a las muestras diluidas con AM (p>0.05). Se observó una disminución de la MT en las muestras refrigeradas con AM, tanto a las 24 como a las 48 hs, con respecto al semen fresco (SF) (SF 58,6 ± 11,5%; AM24 25,1 ± 25,0% y AM48 21,0 ± 21,4%; p˂0.05). Aunque la MT disminuyó en las muestras refrigeradas con AMYH a las 48 hs de conservación respecto al SF, no se observaron diferencias a las 24 hs respecto al SF ni a las muestras diluidas (0 hs), ni tampoco entre las 0 hs y las 48 hs de refrigeración (AMYH0 53,0 ± 13,1%; AMYH24 39,8 ± 12,8% y AMYH48 30,8 ± 17,6%). El porcentaje de espermatozoides vivos intactos disminuyó en las muestras refrigeradas con AM y con AMYH a las 24 y 48 hs con respecto al SF (SF 64,0 ± 13,2%; AM24 37,0 ± 23,4%; AMYH24 42,4 ± 18,0%; AM48 30,1 ± 23,2% y AMYH48 41,6 ± 16,3%; p˂0.05). Se observó un aumento del porcentaje de espermatozoides muertos reaccionados en las muestras refrigeradas con AM a las 24 y 48 hs con respecto al SF (SF 15,9 ± 8,1%; AM24 30,4 ± 14,0% y AM48 37,0 ± 22,0%, p˂0.05). Aunque la funcionalidad de membrana y el porcentaje de espermatozoides con morfología normal se conservó en las muestras refrigeradas, se observó una disminución del porcentaje de espermatozoides con gota citoplasmática en las muestras refrigeradas con AMYH (24 y 48 hs) con respecto al SF (p˂0.05). El agregado de YH al diluyente AM posee un impacto positivo en la refrigeración de espermatozoides de llama.Fil: Bertuzzi, Mariana Lucía. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Area de Teriogenología; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Fumuso, Fernanda Gabriela. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Area de Teriogenología; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Velásquez González, Nicolás. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Area de Teriogenología; ArgentinaFil: Carretero, Maria Ignacia. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Area de Teriogenología; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaVI Jornadas Internacionales: Instituto de Investigación y Tecnología en Reproducción AnimalCiudad Autónoma de Buenos AiresArgentinaUniversidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigación y Tecnología en Reproducción Anima

Cryopreservation of llama semen using a combination of permeable cryoprotectants

Semen cryopreservation is not available for massive use in South American Camelids (SACs) due to the lack of an efficient protocol and the low pregnancy rates obtained with artificial insemination (AI). The use of a single cryoprotectant (CP) is commonly used in SACs frozen semen. The objective of the study was to evaluate the combined cryoprotective capacity of two permeable CPs at different stages of the cryopreservation protocol in llama semen. Sixteen ejaculates from 4 llama males were analysed, and sperm quality was assayed in raw semen, at 5°C, after equilibration of samples with the CPs and when samples were thawed. The following CPs and combination were used: 6% glycerol (GL), 6% dimethylformamide (DMF) and the combination of both CPs: 3% GL and 3% DMF. A Kruskal–Wallis test and an experimental factorial design, considering one factor with four levels (raw semen, 6% GL, 6% DMF and GL/DMF), were used. Total sperm motility and live sperm with intact acrosomes remained unchanged after equilibration of samples (p >.05). A significant decrease in the percentage of functional membrane, motile and live sperm with intact acrosomes was observed when samples were thawed (GL, DMF and GL/DMF). Nevertheless, the cryopreservation protocols used preserved sperm DNA quality; thus, sperm chromatin condensation and DNA fragmentation were unaffected (p >.05) when GL, DMF and GL/DMF were used. To conclude, no superiority was found between the use of a single or a combination of permeable cryoprotectants to freeze llama semen.Fil: Fumuso, Fernanda Gabriela. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigación y Tecnología en Reproducción Animal; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Área de Teriogenología; ArgentinaFil: Bertuzzi, Mariana Lucía. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigación y Tecnología en Reproducción Animal; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Área de Teriogenología; ArgentinaFil: Velásquez González, Nicolás. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigación y Tecnología en Reproducción Animal; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Área de Teriogenología; ArgentinaFil: Miragaya, Marcelo. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigación y Tecnología en Reproducción Animal; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Área de Teriogenología; ArgentinaFil: Carretero, Maria Ignacia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigación y Tecnología en Reproducción Animal; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Área de Teriogenología; Argentin

Use of commercial extenders, with and without the addition of egg yolk, for cooling llama semen

The objective of this study was to evaluate the effect of two commercial extenders, AndroMed® (AM) and Androstar® Plus (AS) both with and without the addition of egg-yolk (EY), for cooling llama semen. A total of sixteen ejaculates were collected from four males. Each ejaculate was divided into four aliquots and diluted with: AM, AM with 20 % EY (AM-EY), AS and AS with 20 % EY (AS-EY) and then cooled to 5 °C in an Equitainer®. Evaluations were carried out in raw semen, after dilution (0 h) and after 24 and 48 h of cooling. Data were analysed using either Friedman or ANOVA. Although total motility decreased in all cooled samples compared to the corresponding 0 h (P < 0.05), the highest percentages were observed in AM-EY being significantly higher than all other cooled samples after 24 h and higher than AS and AS-EY after 48 h. No significant differences were observed in the percentages of live acrosome-intact sperm between extenders at all times tested. A significant decrease in the percentage of sperm membrane osmotic function was observed in samples cooled with AS and AS-EY after 24 and 48 h vs. raw semen and in AM 48 h vs. raw semen. Finally, a significant increase in the percentage of sperm with abnormal tails was observed in the samples cooled with AS and AS-EY. Of all the extenders used, AndroMed® could be considered an option for cooling llama semen and the addition of EY to this extender improves its effectiveness. Data Availability: The data that support the findings of this study are available from the corresponding author upon reasonable request.Fil: Bertuzzi, Mariana Lucía. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigación y Tecnología en Reproducción Animal; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Fumuso, Fernanda Gabriela. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigación y Tecnología en Reproducción Animal; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Neild, Debora Margarita. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigación y Tecnología en Reproducción Animal; ArgentinaFil: Udaquiola, Martín. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigación y Tecnología en Reproducción Animal; ArgentinaFil: Carretero, Maria Ignacia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigación y Tecnología en Reproducción Animal; Argentin

Uso de la ecografía doppler color para la evaluación de los órganos reproductores de machos de llama (Lama Glama) y su relación con parámetros seminales

Los Camélidos Sudamericanos (CSA) son especies autóctonas del altiplano. Se encuentran entre los animales con mayor capacidad de adaptación a los ambientes adversos y constituyen una fuente importante de recursos, principalmente fibra, carne y piel para muchas familias que viven en dicha región. En Argentina, la llama es el CSA doméstico más numeroso. En los últimos años, se incrementó el interés en estos animales, principalmente desde la industria farmacéutica, debido a un tipo de anticuerpos que producen, llamados “nanoanticuerpos”, por lo que su demanda está en aumento y extendiéndose a la zona de llanuras. En dicha zona, la reproducción de la especie no presenta estacionalidad, ya que la oferta de alimento es constante durante todo el año. Sin embargo, en el altiplano, presentan una estacionalidad reproductiva, que acompaña a las épocas de mayor oferta forrajera. Cuando los servicios se realizan en épocas con alta humedad y altas temperaturas ambientales, se puede generar un estrés por calor e infertilidad en los machos, posiblemente debido a diferencias anatómicas escrotales en estas especies en comparación con otros mamíferos. En los camélidos, el escroto está ubicado en la zona del periné, cerca del cuerpo y presenta una piel gruesa, probablemente para evitar lesiones durante las peleas entre los machos. Como ocurre con la mayoría de las especies domésticas, los criadores de camélidos se esfuerzan por mejorar la salud, la producción y las características reproductivas de sus animales a través de programas de reproducción cuidadosamente monitoreados. Desafortunadamente, hay varios aspectos de la fisiología reproductiva de los camélidos que hacen que su cría sea especialmente difícil. En comparación con otras especies domésticas, los camélidos tienen bajas tasas de fertilidad y preñez. Por ejemplo, sólo entre el 40% y el 60% delos apareamientos naturales dan como resultado descendencia. La evaluación de los órganos reproductivos del macho es esencial para poder detectar alteraciones que podrían afectar negativamente el desempeño de estos, durante el servicio.Fil: Amusquibar, M. V.. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigación y Tecnología en Reproducción Animal; ArgentinaFil: Carretero, Maria Ignacia. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Area de Teriogenología; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Fumuso, Fernanda Gabriela. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigación y Tecnología en Reproducción Animal; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Bertuzzi, Mariana Lucía. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Area de Teriogenología; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Arraztoa, Claudia Cecilia. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Area de Teriogenología; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentin