GOLPH2 expression may serve as diagnostic marker in seminomas

ABSTRACT: BACKGROUND: GOLPH2 (Golgi phosphoprotein 2) is a novel Golgi membrane protein. Despite its unknown physiologic function, however, it has been proposed as a biomarker for hepatocellular and prostate carcinoma due to its upregulation in those cancer entities. Whether the overexpression of GOLPH2 is tumour specific or a generic parameter of malignancy and whether this finding is true for additional carcinomas has not been determined. In this study, we aimed to evaluate the expression pattern of GOLPH2 in testicular seminomas, the most common histologic subtype of testicular neoplasm. METHODS: GOLPH2 protein expression was assessed by immunohistochemistry in 69 testicular seminomas and compared to the expression rates in matching normal testicular tissue and intratubular germ cell neoplasia of unclassified type (IGCNU). In addition, a subset of Leydig cell tumours was analyzed accordingly. RESULTS: GOLPH2 was consistently overexpressed (89.9%) in seminomas. Matching non-neoplastic tissue showed weak or negative staining. The observed differences between non-neoplastic and neoplastic tissue were statistically highly significant (p < 0.001). There were no significant associations with tumour status. Interestingly, GOLPH2 was also highly expressed in the intertubular Leydig cells as well as in Leydig cell tumours. CONCLUSIONS: GOLPH2 protein is highly expressed in seminomas and in Leydig cell tumours. This study fosters the association of GOLPH2 with malignant neoplastic processes. The staining pattern is easily assessable and consistent which is a favourable property especially in clinical settings. GOLPH2 could be a novel immunohistochemical marker for the assessment of testicular neoplasms, especially against the background that in analogy to hepatocellular carcinomas complementary GOLPH2 serum levels might be helpful in detecting metastases or recurrent tumour. Therefore serum studies and analyses of GOLPH2 expression in non-seminomatous germ cell tumours are strongly warranted

The FUSE binding proteins FBP1 and FBP3 are potential c-myc regulators in renal, but not in prostate and bladder cancer

BACKGROUND: The three far-upstream element (FUSE) binding proteins (FBP1, FBP2, and FBP3) belong to an ancient family of single-stranded DNA binding proteins which are required for proper regulation of the c-myc proto-oncogene. Whereas it is known that c-myc alterations play a completely different role in various carcinomas of the urogenital tract, the relevance of FBPs is unclear. Methods: FBP1, FBP3 and c-myc expression was studied in 105 renal cell, 95 prostate and 112 urinary bladder carcinomas by immunohistochemistry using tissue microarrays. High rates of FBP1 and FBP3 expression were observed in all cancer types. RESULTS: There was a concomitant up-regulation of FBP1 and FBP3 in renal cell and prostate carcinomas (p<0.001 both). C-myc expression was detectable in 21% of prostate, 30% of renal and 34% of urothelial carcinomas. Interestingly, strong FBP1 and FBP3 expression was associated with c-myc up-regulation in clear cell renal cell carcinomas (p<0.001 and 0.05 resp.), but not in bladder or prostate cancer. CONCLUSIONS: The correlation between FBP1/FBP3, c-myc and high proliferation rate in renal cell carcinoma provides strong in vivo support for the suggested role of FBP1 and FBP3 as activators of c-myc. The frequent up-regulation of FBP1 and FBP3 in urothelial and prostate carcinoma suggests that FBPs also have an important function in gene regulation of these tumors

A novel method for measuring the transepithelial water transport in MDCK cells expressing the tight junction protein claudin-2

Im Rahmen dieser Doktorarbeit wurde untersucht, ob die Expression von Claudin-2, einem TJ-Protein, das in vivo bevorzugt in lecken Epithelien exprimiert wird und einen parazellulären Kanal für kleine Kationen bildet, einen Einfluss auf den Wassertransport an einer Nierenzelllinie (MDCK-Zellen) hat. Dazu wurde Claudin-2 stabil in MDCK-C7- Zellen transfiziert, die ein Modell für ein dichtes Epithel darstellen und endogen kein Claudin-2 exprimieren. Der Wassertransport an diesen Zellen wurde mit Vektorkontrollen (C7-vec), die nur den leeren Vektor enthielten, mit den Wildtypzellen (C7-wt) und mit MDCK-C11-Zellen (C11-wt), die ein leckes Epithel repräsentieren und endogen stark Claudin-2 exprimieren, verglichen. Für diese Untersuchungen wurde ein Messaufbau entwickelt und etabliert, um den Wassertransport quantitativ zu erfassen. Die vorliegende Arbeit zeigt folgende Ergebnisse: 1\. Der Messaufbau besteht aus einer modifizierten Ussing-Kammer und einem digitalen optisch-elektrischen Kombinationssystem, welches sowohl den transepithelialen Widerstand der Zellen als auch den Wassertransport anhand der Position des Flüssigkeitsmeniskus erfasst. Es ermöglicht somit eine quantitative Messung des Wassertransports an vitalen Epithelien unter physiologischen Bedingungen. 2\. Der Wassertransport in lecken Epithelien bzw. MDCK-C11-wt ist höher als in dichten Epithelien, repräsentiert durch die MDCK-C7-Zellen. 3\. Die Expression von Claudin-2 in hochohmigen C7-Zellen bewirkt eine deutliche Senkung des transepithelialen Widerstandes. Dabei war der Einfluss von humanem Claudin-2 deutlich stärker als der von murinem Claudin-2. 4\. Der Wassertransport kann durch einen osmotischen Gradienten induziert werden und durch einen Gradienten für Natrium zusätzlich verstärkt werden. Der Wassertransport in den mit humanem Claudin-2 transfizierten Zellen ist deutlich höher als in den Vektorkontrollen oder Wildtyp-Zellen. Furuse et al. demonstrierten an MDCK-Zellen, dass durch die Einführung von Claudin-2 ein dichtes Epithel in ein leckes Epithel umgewandelt wird [66]. Amasheh et al. belegten durch Fluxversuche, dass Claudin-2 einen parazellulären Kationen- selektiven Kanal induziert. Dieser Kanal könnte auch den parazellulären Transport von Wasser ermöglichen. Der durch Claudin-2 vermittelte parazelluläre Na+-Transport ist in der Lage, den osmotisch induzierten Wassertransport zusätzlich zu steigern. Folglich kann vermutet werden, dass Claudin-2 am epithelialen Wassertransport beteiligt ist und der Kationen- selektive parazelluläre Kanal auch einen Durchtritt von Wasser ermöglicht. Die Ergebnisse der vorliegenden Arbeit zeigen, dass durch die Expression von Claudin-2 der transepitheliale Wassertransport gesteigert wird. Diese Steigerung ist vermutlich auf eine Erhöhung der parazellulären Permeabilität für Wasser zurückzuführen.Tight junction proteins, the claudins, determine the properties of the paracellular pathway in epithelial barriers. Claudin-2 is known to enhance the paracellular permeability for cations. To investigate whether the cation permeability was associated with water permeability a novel method was developed and established to measure the transepithelial water transport in a cell culture model. Stable transfected MDCK cell clone expressing the tight junction protein claudin-2 were grown on cell supports and the transepithelial water transport was compared to cells lacking claudin-2. There was a dramatic decrease in transepithelial resistance in claudin-2 expressing cells. The transepithelial water transport in cell clones with claudin-2 was found to be significantly higher than the controls. The expression of other claudins was not altered in the transfected cell clones. In conclusion, the findings indicate that the claudin-2 induces a paracellular pore which is also enhances water transport