Izdvajanje goveđeg herpesvirusa 1 iz bičjeg sjemena i primjena lančane reakcije polimerazom u stvarnom vremenu za dijagnosticiranje zaraznog rinotraheitisa/pustularnoga vulvovaginitisa pretragom kliničkoga materijala

Five hundred and twenty three semen samples were collected from fi fteen different semen collection centres located across four states of South India. These samples were screened for infectious bovine rhinotracheitis virus by virus isolation studies at the Institute of Animal Health and Veterinary Biologicals, Bangalore, India. Bovine turbinate (BT) and Madin Darby Bovine Kidney (MDBK) cell lines were used for virus isolation. Out of the total samples, four semen samples showed cytopathic changes in cells and were further confi rmed by regular PCR targeting amplifi cation of the gC region of bovine herpesvirus-1. Real time PCR was applied for these virus isolates using primers and probes amplifying the gB region of bovine herpesvirus-1. Further, this real time PCR protocol was adapted for diagnosis of IBR/IPV directly on the clinical samples.Ukupno su bila prikupljena 523 uzorka sjemena bikova iz 15 različitih središta za prikupljanje sjemena smještenih na području četiriju država u Južnoj Indiji. Uzorci su bili pretraženi na prisutnost virusa zaraznoga rinotraheitisa goveda (ZRG) u Institutu za zdravlje životinja i veterinarske pripravke u Bangaloreu u Indiji. Za izdvajanje virusa rabljena je stanična linija podrijetlom od stanica goveđih turbinata (engl. bovine turbinate - BT) i stanična linija podrijetlom od goveđega bubrega (engl. Madin Darby Bovine Kidney –MDBK). Od svih pretraženih, četiri uzorka pokazivala su citopatski učinak u rabljenim staničnim kulturama što je bilo potvrđeno uobičajenom lančanom reakcijom polimerazom uz uporabu sekvence u području glikoproteina gC goveđega herpesvirusa 1. PCR u stvarnom vremenu primijenjen je za identifi kaciju tih izolata uporabom početnica specifi čnih za glikoprotein gB virusa ZRG. Protokol lančane reakcije polimerazom u stvarnom vremenu razvijen je za dijagnosticiranje ZRG izravno u kliničkim uzorcima

Bacillus cereus nositelj plazmida pXO1 s genom pag uzrokuje u goveda s oslabljenim imunosnim sustavom smrtonosnu septikemiju sličnu bedrenici - kratko priopćenje.

Bacillus cereus is ubiquitous in nature and while most isolates appear to be harmless, some are associated with food-borne illnesses, wound infections, endocarditis, osteomyelitis, endophthalmitis and urinary tract infections in humans. Recently, a few isolates have been identified as the causative agents of anthrax-like severe pneumonia in humans, and these isolates were found to harbor most of the B. anthracis virulence plasmid pXO1. Here we report the characterization of three clinical B. cereus isolates recovered from heart blood and spleen samples of cattle which had died with ‘anthrax like’ symptoms. Apart from the cultural characterizations, primers targeting the 16S rRNA gene of B. cereus were designed and used on these isolates. The isolates were found to harbor the pXO1 plasmid and lacked pXO2 plasmid. Further characterization of the pXO1 plasmid revealed that the isolates contained pag, lef and cya genes, which code for protective antigen, lethal factor and edema factor toxins responsible for eliciting an ‘anthrax like disease’ in cattle. The sequencing and phylogenetic analysis of partial pag gene sequences of B. cereus isolates were identical to pag gene sequences on the pXO1 of B. anthracis. In a pathogenicity test on mice, B. cereus isolates, when inoculated by the intra peritoneal route, caused mortality of the mice within 6 hours post inoculation.Bacillus cereus je posvudašnja bakterija. Većina izolata te bakterije je neškodljiva, a neki mogu uzrokovati bolesti koje se prenose hranom, infekcije rana, endokarditis, osteomijelitis, endoftalmitis i infekcije mokraćnog sustava u ljudi. Nedavno je identificirano nekoliko izolata koji uzrokuju tešku upalu pluća u čovjeka sličnu onoj kod bedrenice. Ti izolati većinom nose virulentni plazmid pXO1 vrste B. anthracis. U ovom radu određena su obilježja triju kliničkih izolata vrste B. cereus izdvojenih iz krvi sadržane u srcu i uzoraka slezene goveda uginulih pod znakovima sličnima bedrenici. Osim određivanja kulturalnih obilježja, pripremljene su i početnice za gen 16S rRNA vrste B. cereus koje su bile rabljene za identifikaciju izolata. Ustanovljeno je da izolati nose plazmid pXO1, a nedostaje im plazmid pXO2. Daljnja karakterizacija plazmida pXO1 pokazala je da izolati sadrže gene pag, lef i cya koji kodiraju za zaštitni antigen, letalni čimbenik i edemski čimbenik, toksine koji su odgovorni za pojavu bolesti u goveda slične bedrenici. Određivanje slijeda i filogenetska analiza dijela sekvencija gena pag izolata B. cereus pokazala je da su oni istovjetni sekvencijama gena pag na pXO1 bakterije B. anthracis. U testu patogenosti na miševima, izolati B. cereus prouzročili su njihovo uginuće šest sati nakon intraperitonejske inokulacije

Izdvajanje goveđeg herpesvirusa 1 iz bičjeg sjemena i primjena lančane reakcije polimerazom u stvarnom vremenu za dijagnosticiranje zaraznog rinotraheitisa/pustularnoga vulvovaginitisa pretragom kliničkoga materijala

Five hundred and twenty three semen samples were collected from fi fteen different semen collection centres located across four states of South India. These samples were screened for infectious bovine rhinotracheitis virus by virus isolation studies at the Institute of Animal Health and Veterinary Biologicals, Bangalore, India. Bovine turbinate (BT) and Madin Darby Bovine Kidney (MDBK) cell lines were used for virus isolation. Out of the total samples, four semen samples showed cytopathic changes in cells and were further confi rmed by regular PCR targeting amplifi cation of the gC region of bovine herpesvirus-1. Real time PCR was applied for these virus isolates using primers and probes amplifying the gB region of bovine herpesvirus-1. Further, this real time PCR protocol was adapted for diagnosis of IBR/IPV directly on the clinical samples.Ukupno su bila prikupljena 523 uzorka sjemena bikova iz 15 različitih središta za prikupljanje sjemena smještenih na području četiriju država u Južnoj Indiji. Uzorci su bili pretraženi na prisutnost virusa zaraznoga rinotraheitisa goveda (ZRG) u Institutu za zdravlje životinja i veterinarske pripravke u Bangaloreu u Indiji. Za izdvajanje virusa rabljena je stanična linija podrijetlom od stanica goveđih turbinata (engl. bovine turbinate - BT) i stanična linija podrijetlom od goveđega bubrega (engl. Madin Darby Bovine Kidney –MDBK). Od svih pretraženih, četiri uzorka pokazivala su citopatski učinak u rabljenim staničnim kulturama što je bilo potvrđeno uobičajenom lančanom reakcijom polimerazom uz uporabu sekvence u području glikoproteina gC goveđega herpesvirusa 1. PCR u stvarnom vremenu primijenjen je za identifi kaciju tih izolata uporabom početnica specifi čnih za glikoprotein gB virusa ZRG. Protokol lančane reakcije polimerazom u stvarnom vremenu razvijen je za dijagnosticiranje ZRG izravno u kliničkim uzorcima

Bacillus cereus nositelj plazmida pXO1 s genom pag uzrokuje u goveda s oslabljenim imunosnim sustavom smrtonosnu septikemiju sličnu bedrenici - kratko priopćenje.

Bacillus cereus is ubiquitous in nature and while most isolates appear to be harmless, some are associated with food-borne illnesses, wound infections, endocarditis, osteomyelitis, endophthalmitis and urinary tract infections in humans. Recently, a few isolates have been identified as the causative agents of anthrax-like severe pneumonia in humans, and these isolates were found to harbor most of the B. anthracis virulence plasmid pXO1. Here we report the characterization of three clinical B. cereus isolates recovered from heart blood and spleen samples of cattle which had died with ‘anthrax like’ symptoms. Apart from the cultural characterizations, primers targeting the 16S rRNA gene of B. cereus were designed and used on these isolates. The isolates were found to harbor the pXO1 plasmid and lacked pXO2 plasmid. Further characterization of the pXO1 plasmid revealed that the isolates contained pag, lef and cya genes, which code for protective antigen, lethal factor and edema factor toxins responsible for eliciting an ‘anthrax like disease’ in cattle. The sequencing and phylogenetic analysis of partial pag gene sequences of B. cereus isolates were identical to pag gene sequences on the pXO1 of B. anthracis. In a pathogenicity test on mice, B. cereus isolates, when inoculated by the intra peritoneal route, caused mortality of the mice within 6 hours post inoculation.Bacillus cereus je posvudašnja bakterija. Većina izolata te bakterije je neškodljiva, a neki mogu uzrokovati bolesti koje se prenose hranom, infekcije rana, endokarditis, osteomijelitis, endoftalmitis i infekcije mokraćnog sustava u ljudi. Nedavno je identificirano nekoliko izolata koji uzrokuju tešku upalu pluća u čovjeka sličnu onoj kod bedrenice. Ti izolati većinom nose virulentni plazmid pXO1 vrste B. anthracis. U ovom radu određena su obilježja triju kliničkih izolata vrste B. cereus izdvojenih iz krvi sadržane u srcu i uzoraka slezene goveda uginulih pod znakovima sličnima bedrenici. Osim određivanja kulturalnih obilježja, pripremljene su i početnice za gen 16S rRNA vrste B. cereus koje su bile rabljene za identifikaciju izolata. Ustanovljeno je da izolati nose plazmid pXO1, a nedostaje im plazmid pXO2. Daljnja karakterizacija plazmida pXO1 pokazala je da izolati sadrže gene pag, lef i cya koji kodiraju za zaštitni antigen, letalni čimbenik i edemski čimbenik, toksine koji su odgovorni za pojavu bolesti u goveda slične bedrenici. Određivanje slijeda i filogenetska analiza dijela sekvencija gena pag izolata B. cereus pokazala je da su oni istovjetni sekvencijama gena pag na pXO1 bakterije B. anthracis. U testu patogenosti na miševima, izolati B. cereus prouzročili su njihovo uginuće šest sati nakon intraperitonejske inokulacije