Izdvajanje goveđeg herpesvirusa 1 iz bičjeg sjemena i primjena lančane reakcije polimerazom u stvarnom vremenu za dijagnosticiranje zaraznog rinotraheitisa/pustularnoga vulvovaginitisa pretragom kliničkoga materijala

Abstract

Five hundred and twenty three semen samples were collected from fi fteen different semen collection centres located across four states of South India. These samples were screened for infectious bovine rhinotracheitis virus by virus isolation studies at the Institute of Animal Health and Veterinary Biologicals, Bangalore, India. Bovine turbinate (BT) and Madin Darby Bovine Kidney (MDBK) cell lines were used for virus isolation. Out of the total samples, four semen samples showed cytopathic changes in cells and were further confi rmed by regular PCR targeting amplifi cation of the gC region of bovine herpesvirus-1. Real time PCR was applied for these virus isolates using primers and probes amplifying the gB region of bovine herpesvirus-1. Further, this real time PCR protocol was adapted for diagnosis of IBR/IPV directly on the clinical samples.Ukupno su bila prikupljena 523 uzorka sjemena bikova iz 15 različitih središta za prikupljanje sjemena smještenih na području četiriju država u Južnoj Indiji. Uzorci su bili pretraženi na prisutnost virusa zaraznoga rinotraheitisa goveda (ZRG) u Institutu za zdravlje životinja i veterinarske pripravke u Bangaloreu u Indiji. Za izdvajanje virusa rabljena je stanična linija podrijetlom od stanica goveđih turbinata (engl. bovine turbinate - BT) i stanična linija podrijetlom od goveđega bubrega (engl. Madin Darby Bovine Kidney –MDBK). Od svih pretraženih, četiri uzorka pokazivala su citopatski učinak u rabljenim staničnim kulturama što je bilo potvrđeno uobičajenom lančanom reakcijom polimerazom uz uporabu sekvence u području glikoproteina gC goveđega herpesvirusa 1. PCR u stvarnom vremenu primijenjen je za identifi kaciju tih izolata uporabom početnica specifi čnih za glikoprotein gB virusa ZRG. Protokol lančane reakcije polimerazom u stvarnom vremenu razvijen je za dijagnosticiranje ZRG izravno u kliničkim uzorcima