COMPARAÇÃO DE CUSTO-BENEFÍCIO DE DOIS MÉTODOS DE EXTRAÇÃO DE AFLATOXINAS B1, G1, B2, G2 EM AMOSTRAS DE AÇÚCAR MASCAVO: Extração QuEChERS X Extração Líquido-Líquido

Alguns fungos, por serem elementos microbianos encontrados em todos os lugares, como água, ar e solo, produzem toxinas denominadas de micotoxinas, que podem ser encontradas em alimentos, algumas são capazes de gerar efeitos tóxicos quando consumidas por pessoas e animais. Existem diversas variedades de micotoxinas, as mais estudadas são as aflatoxinas B1, G1, B2, G2. Para a determinação das mesmas, são indispensáveis alguns processos no preparo da amostra que antecedem os métodos quantitativos e qualitativos, como a cromatografia em camada delgada (CCD). Antes da amostra ser submetida a CCD é fundamental a etapa de extração, porém, é utilizada uma grande quantidade de solventes e demanda elevada de tempo para o desenvolvimento de técnica como a do método líquido-líquido. No entanto, atualmente vem sendo aplicado um método, denominado QuEChERS que se caracteriza pela extração rápida, confiável, fácil, econômica, robusta e segura de analitos a partir de matrizes complexas, com menor uso de solventes. Nesse estudo duas distintas metodologias de extração foram comparadas em relação aos custos, tempo de desenvolvimento e quantidade de uso de solventes/reagentes para implantação de um novo método com etapa de extração mais favorável para a determinação de aflatoxinas em açúcar mascavo. Os resultados obtidos através desse estudo certificaram a eficiência e os benefícios da metodologia QuEChERS nas extrações, pois foi possível detectar melhor custo-benefício considerando a rapidez e o investimento necessário para a realização da técnica quando comparado com a extração Líquido-Líquido

P-MAPA, a Fungi-Derived Immunomodulatory Compound, Induces a Proinflammatory Response in a Human Whole Blood Model

P-MAPA is a complex compound, derived from Aspergillus oryzae cultures, that has shown immunomodulatory properties in infection and cancer animal models. Despite promising results in these models, the mechanisms of cellular activation by P-MAPA, suggested to be Toll-like receptor- (TLR-) dependent, and its effect on human immune cells, remain unclear. Using an ex vivo model of human whole blood, the effects of P-MAPA on complement system activation, production of cytokines, and the expression of complement receptors (CD11b, C5aR, and C3aR), TLR2, TLR4, and the coreceptor CD14 were analyzed in neutrophils and monocytes. P-MAPA induced complement activation in human blood, detected by increased levels of C3a, C5a, and SC5b-9 in plasma. As a consequence, CD11b expression increased and C5aR decreased upon activation, while C3aR expression remained unchanged in leukocytes. TLR2 and TLR4 expressions were not modulated by P-MAPA treatment on neutrophils, but TLR4 expression was reduced in monocytes, while CD14 expression increased in both cell types. P-MAPA also induced the production of TNF-α, IL-8, and IL-12 and oxidative burst, measured by peroxynitrite levels, in human leukocytes. Complement inhibition with compstatin showed that P-MAPA-induced complement activation drives modulation of C5aR, but not of CD11b, suggesting that P-MAPA acts through both complement-dependent and complement-independent mechanisms. Compstatin also significantly reduced the peroxynitrite generation. Altogether, our results show that P-MAPA induced proinflammatory response in human leukocytes, which is partially mediated by complement activation. Our data contribute to elucidate the complement-dependent and complement-independent mechanisms of P-MAPA, which ultimately result in immune cell activation and in its immunomodulatory properties in infection and cancer animal models