Effect of antibiotic ceftriaxone on elimination of ABI and GV3101 strains of Agrobacterium tumefaciens

Aim. To find out, at which concentration the antibiotic ceftriaxone of β-lactam group causes the elimination of ABI and GV3101 strains of Agrobacterium tumefaciens. Methods. The disc diffusion method. Results. Antibiotic ceftriaxone was used for the cell elimination of the Agrobacterium tumefaciens ABI strain for the first time. The same zones of inhibition were observed when using the 400 mg/l ceftriaxone and 500 mg/l cefotaxime solutions for both Agrobacterium strains (ABI and GV3101) studied. Conclusions. Ceftriaxone inhibits the Agrobacterium growth more effectively than cefotaxime. The ceftriaxone concentration for elimination of ABI and GV3101 Agrobacterium tumefaciens strains is 400 mg/l.Мета. З’ясувати за якої концентрації антибіотик цефтриаксон з групи β-лактамів викликає елімінацію штамів ABI та GV3101 Agrobacterium tumefaciens. Методи. Метод дифузії з дисків. Результати. Для елімінації клітин Agrobacterium tumefaciens штаму АВІ антибіотик цефтриаксон використано вперше. Для обох досліджуваних штамів агробактерії (АВІ та GV3101) спостерігалися однакові зони ігібування за використання розчину 400 мг/л цефтриаксону та 500 мг/л цефотаксиму. Висновки. Цефтриаксон пригнічує ріст агробактерій більш ефективно, ніж цефотаксим. Концентрація цефтриаксону для еліміннації штамів АВІ та GV3101 Agrobacterium tumefaciens – 400 мг/л.Цель. Выяснить при какой концентрации антибиотик цефтриаксон из группы β-лактамов вызывает элиминацию штаммов ABI и GV3101 Agrobacterium tumefaciens. Методы. Метод диффузии из дисков. Результаты. Для элиминации клеток Agrobacterium tumefaciens штамма ABI антибиотик цефтриаксон использован впервые. Для обоих изучаемых штаммов агробактерии (ABI и GV3101) наблюдались одинаковые зоны ингибирования при использовании раствора 400 мг/л цефтриаксона и 500 мг/л цефотаксима. Выводы. Цефтриаксон ингибирует рост агробактерий более эффективно чем цефотаксим. Концентрация цефтриаксона для элиминации штамов ABI и GV3101 Agrobacterium tumefaciens – 400 мг/л

Purification of recombinant GFP produced by Agrobacterum-mediated transient expression in Nicotiana excelsior

Green fluorescent protein (GFP) is commonly used as a reporter protein in a wide range of biological experiments. The efficient protocol of Agrobacterium mediated transient expression in Nicotiana excelsior was applied for quick preparative production of recombinant GFP. The protein purification scheme has been developed and included ammonium sulfate precipitation and Q sepharose anion exchange chromatography. It results in obtaining of a fraction with about 85 % GFP homogeneity and the protein yield of about 75 %.Зелений флуоресцентний білок (GFP) часто використовують як репортерний білок у різних галузях біологічних досліджень. Ефективний протокол Agrobacterium-опосередкованої транзієнтної експресії в Nicotiana excelsior було використано для швидкого одержання препаративної кількості рекомбінантного GFP. Розроблено схему очищення рекомбінантного білка, яка включає стадію осадження сульфатом амонію та іонообмінну хроматографію на сорбенті Q-sepharose. В результаті очищення було отримано фракцію білків з вмістом GFP близько 85 %. В ході очищення було отримано близько 75 % від початкової кількості рекомбінантного GFP.Зеленый флюоресцентный белок (GFP) часто используется в качестве маркерного белка в разных областях биологических исследований. Эффективный протокол Agrobacterium-опосредованной транзиентной экспрессии в Nicotiana excelsior был использован для быстрого получения препаративных количеств рекомбинантного GFP. Разработана схема очистки рекомбинантного белка, включающая стадию осаждения сульфатом аммония и ионообменную хроматографию на сорбенте Q-sepharose. В результате очистки была получена фракция белков с содержанием GFP около 85 %. В ходе очистки было выделено около 75 % от начального количества рекомбинантного GFP

Effect of antibiotic ceftriaxone on elimination of ABI and GV3101 strains of Agrobacterium tumefaciens

Aim. To find out, at which concentration the antibiotic ceftriaxone of β-lactam group causes the elimination of ABI and GV3101 strains of Agrobacterium tumefaciens. Methods. The disc diffusion method. Results. Antibiotic ceftriaxone was used for the cell elimination of the Agrobacterium tumefaciens ABI strain for the first time. The same zones of inhibition were observed when using the 400 mg/l ceftriaxone and 500 mg/l cefotaxime solutions for both Agrobacterium strains (ABI and GV3101) studied. Conclusions. Ceftriaxone inhibits the Agrobacterium growth more effectively than cefotaxime. The ceftriaxone concentration for elimination of ABI and GV3101 Agrobacterium tumefaciens strains is 400 mg/l.Мета. З’ясувати за якої концентрації антибіотик цефтриаксон з групи β-лактамів викликає елімінацію штамів ABI та GV3101 Agrobacterium tumefaciens. Методи. Метод дифузії з дисків. Результати. Для елімінації клітин Agrobacterium tumefaciens штаму АВІ антибіотик цефтриаксон використано вперше. Для обох досліджуваних штамів агробактерії (АВІ та GV3101) спостерігалися однакові зони ігібування за використання розчину 400 мг/л цефтриаксону та 500 мг/л цефотаксиму. Висновки. Цефтриаксон пригнічує ріст агробактерій більш ефективно, ніж цефотаксим. Концентрація цефтриаксону для еліміннації штамів АВІ та GV3101 Agrobacterium tumefaciens – 400 мг/л.Цель. Выяснить при какой концентрации антибиотик цефтриаксон из группы β-лактамов вызывает элиминацию штаммов ABI и GV3101 Agrobacterium tumefaciens. Методы. Метод диффузии из дисков. Результаты. Для элиминации клеток Agrobacterium tumefaciens штамма ABI антибиотик цефтриаксон использован впервые. Для обоих изучаемых штаммов агробактерии (ABI и GV3101) наблюдались одинаковые зоны ингибирования при использовании раствора 400 мг/л цефтриаксона и 500 мг/л цефотаксима. Выводы. Цефтриаксон ингибирует рост агробактерий более эффективно чем цефотаксим. Концентрация цефтриаксона для элиминации штамов ABI и GV3101 Agrobacterium tumefaciens – 400 мг/л

Effect of Ceftriaxone and Timentin antibiotics on morphogensis in the in vitro culture of bread wheat Triticum aestivum L.

Aim. To study the influence of antibiotics Ceftriaxone and Timentin on the morphogenic calli and roots formation, shoots regeneration in two bread wheat cultivars Triticum aestivum L., to study effect of Ceftriaxone on the growth dynamics of plants. Methods. In vitro plant tissue culture, analysis of Variance, correlation and regression analysis. Results. The influence of β-lactam antibiotics Ceftriaxone and Timentin on morphogenetic processes (morphogenic calli formation, shoots regeneration and rhizogenesis), was studied in apical 18-day-old wheat calli. Two wheat genotypes of different growth habits, winter and winter-spring, were used. Conclusions. Timentin and Ceftriaxone stimulate morphogenic calli formation in bread wheat apical calli. As compared to Timentin, Ceftriaxone has strong concentration-dependent and genotype-dependent influence on shoots regeneration. The roots formation depended primarily on the wheat genotype, independently from an antibiotic applied. The presence of Ceftriaxone in culture medium stimulates rooting and growth of regenerating plants as well as their biomass increment.Мета. Вивчити вплив антибіотиків тиментину та цефтріаксону на утворення морфогенного калюсу, регенерацію пагонів і ризогенез у двох сортів м’якої пшениці Triticum aestivum L., вивчити вплив цефтріаксону на динаміку росту рослин. Методи. Культура тканин рослин in vitro, дисперсійний та кореляційно-регресійний аналізи. Результати. Вивчено вплив антибіотиків бета-лактамів цефтриаксону і тиментину на утворення морфогенного калюсу, регенерацію пагонів і ризогенез, що відбуваються в 18-добовому калюсі м’якої пшениці апікального походження. Використані два генотипи пшениці різного типу розвитку – озима та озимо-яра. Висновки. Тиментин і цефтриаксон стимулюють утворення морфогенного калюсу апікального походження м’якої пшениці, а цефтриаксон також прискорює появу меристематичних зон в калюсі. Характер впливу на частоту регенерації пагонів залежить від антибіотика (тиментин або цефтріаксон). Вплив цефтриасона на регенерацію пагонів сильно залежить від генотипу рослини та від концентрації антибіотика. Частота ризогенезу залежить в першу чергу від генотипу м’якої пшениці незалежно від використаного антибіотика. Наявність антибіотика цефтриаксону в культуральному середовищі, на якому були отримані пагони, стимулює укорінення і ріст рослин-регенерантів, а також приріст їх біомаси.Цель. Изучить влияние антибиотиков тиментина и цефтриаксона на образование морфогенного каллуса, регенерацию побегов и ризогенез у двух сортов мягкой пшеницы Triticum aestivum L., изучить влияние цефтриаксона на динамику роста растений. Методы. Культура тканей растений in vitro, дисперсионный и корреляционно-регрессионный анализы. Результаты. Изучено влияние антибиотиков бета-лактамов цефтриаксона и тиментина на морфогенетические процессы (образование морфогенного каллуса, регенерацию побегов и ризогенез), происходящие в 18-суточном каллусе мягкой пшеницы апикального происхождения. Использованы два генотипа пшеницы разного типа развития разного направления – озимая и озимо-яровая. Выводы. Тиментин и цефтриаксон стимулируют образование морфогенного каллуса апикального происхождения мягкой пшеницы, а цефтриаксон также ускоряет появление меристематических зон в каллусе . Характер влияния на частоту регенерации побегов зависит от антибиотика (тиментин или цефтриаксон). Влияние цефтриаксона на регенерацию побегов зависит от генотипа растения и от концентрации антибиотика. Частота ризогенеза зависит в первую очередь от генотипа мягкой пшеницы независимо от использованного антибиотика. Наличие цефтриаксона в культуральной среде, на которой были получены побеги, стимулирует укоренение и рост растений-регенерантов, а также прирост их биомассы

Effect of Ceftriaxone and Timentin antibiotics on morphogensis in the in vitro culture of bread wheat Triticum aestivum L.

Aim. To study the influence of antibiotics Ceftriaxone and Timentin on the morphogenic calli and roots formation, shoots regeneration in two bread wheat cultivars Triticum aestivum L., to study effect of Ceftriaxone on the growth dynamics of plants. Methods. In vitro plant tissue culture, analysis of Variance, correlation and regression analysis. Results. The influence of β-lactam antibiotics Ceftriaxone and Timentin on morphogenetic processes (morphogenic calli formation, shoots regeneration and rhizogenesis), was studied in apical 18-day-old wheat calli. Two wheat genotypes of different growth habits, winter and winter-spring, were used. Conclusions. Timentin and Ceftriaxone stimulate morphogenic calli formation in bread wheat apical calli. As compared to Timentin, Ceftriaxone has strong concentration-dependent and genotype-dependent influence on shoots regeneration. The roots formation depended primarily on the wheat genotype, independently from an antibiotic applied. The presence of Ceftriaxone in culture medium stimulates rooting and growth of regenerating plants as well as their biomass increment.Мета. Вивчити вплив антибіотиків тиментину та цефтріаксону на утворення морфогенного калюсу, регенерацію пагонів і ризогенез у двох сортів м’якої пшениці Triticum aestivum L., вивчити вплив цефтріаксону на динаміку росту рослин. Методи. Культура тканин рослин in vitro, дисперсійний та кореляційно-регресійний аналізи. Результати. Вивчено вплив антибіотиків бета-лактамів цефтриаксону і тиментину на утворення морфогенного калюсу, регенерацію пагонів і ризогенез, що відбуваються в 18-добовому калюсі м’якої пшениці апікального походження. Використані два генотипи пшениці різного типу розвитку – озима та озимо-яра. Висновки. Тиментин і цефтриаксон стимулюють утворення морфогенного калюсу апікального походження м’якої пшениці, а цефтриаксон також прискорює появу меристематичних зон в калюсі. Характер впливу на частоту регенерації пагонів залежить від антибіотика (тиментин або цефтріаксон). Вплив цефтриасона на регенерацію пагонів сильно залежить від генотипу рослини та від концентрації антибіотика. Частота ризогенезу залежить в першу чергу від генотипу м’якої пшениці незалежно від використаного антибіотика. Наявність антибіотика цефтриаксону в культуральному середовищі, на якому були отримані пагони, стимулює укорінення і ріст рослин-регенерантів, а також приріст їх біомаси.Цель. Изучить влияние антибиотиков тиментина и цефтриаксона на образование морфогенного каллуса, регенерацию побегов и ризогенез у двух сортов мягкой пшеницы Triticum aestivum L., изучить влияние цефтриаксона на динамику роста растений. Методы. Культура тканей растений in vitro, дисперсионный и корреляционно-регрессионный анализы. Результаты. Изучено влияние антибиотиков бета-лактамов цефтриаксона и тиментина на морфогенетические процессы (образование морфогенного каллуса, регенерацию побегов и ризогенез), происходящие в 18-суточном каллусе мягкой пшеницы апикального происхождения. Использованы два генотипа пшеницы разного типа развития разного направления – озимая и озимо-яровая. Выводы. Тиментин и цефтриаксон стимулируют образование морфогенного каллуса апикального происхождения мягкой пшеницы, а цефтриаксон также ускоряет появление меристематических зон в каллусе . Характер влияния на частоту регенерации побегов зависит от антибиотика (тиментин или цефтриаксон). Влияние цефтриаксона на регенерацию побегов зависит от генотипа растения и от концентрации антибиотика. Частота ризогенеза зависит в первую очередь от генотипа мягкой пшеницы независимо от использованного антибиотика. Наличие цефтриаксона в культуральной среде, на которой были получены побеги, стимулирует укоренение и рост растений-регенерантов, а также прирост их биомассы

Transgenic plants regenerated from hairy roots of Nicotiana benthamiana: a promising host for transient expression of foreign proteins

Hairy root cultures of Nicotiana benthamiana have been obtained by co-cultivation of leaf explants with Agrobacterium rhizogenes strain A4 harboring a binary vector plasmid, and transgenic nature of the obtained cultures was confirmed by PCR analysis. Transgenic plants were regenerated from hairy roots. The biomass yield of transgenic plants grown in vitro was almost two-fold higher than those of wild-type N. benthamiana plants. They differed from untransformed plants by short internodes, reinforced stem, thick and wrinkled leaves and more developed root system. The level of Agrobacterium-mediated transient expression of green fluorescent protein (GFP) in the regenerated plants was similar to that of untransformed plants.Культуры корней «hairy roots» Nicotiana benthamiana были получены кокультивированием листовых эксплантов со штаммом Agrobacterium rhizogenes А4, содержащим бинарную векторную систему, и трансгенная природа полученных линий корней была доказана методом ПЦР. Из трансгенных корней были регенерированы растения. Биомасса регенерированных растений, культивировавшихся in vitro, превышала биомассу нетрансформированных растений N. benthamiana приблизительно в два раза. Они отличались от интактных растений укороченными междоузлиями, утолщенным стеблем, толстыми искривленными листьями и более развитой корневой системой. Уровень Agrobacterium-опосредованной транзиентной экспрессии репортерного белка GFP в регенерованных растениях не отличался от такового у нетрансформированных растений

Comparison of different systems for purification of recombinant proteins produced by transient expression in plants

Three different approaches for purification of transiently expressed recombinant proteins from plants using GFP as a reporter have been successfully applied. The purification scheme including ammonium sulfate precipitation and anion-exchange chromatography was compared with two tag-based protocols applying metal affinity chromatography with a 6xHis tag and intein mediated purification with a chitin-binding affinity tag.Три різних підходи для очищення рекомбінантних білків, отриманих методом транзієнтної експресії в рослинах, було успішно застосовано з використанням GFP як репортера. Схему очищення, яка включала преципітацію сульфатом амонію і аніонообмінну хроматографію, порівнювали з протоколами тегового очищення з використанням 6xHis-тега та хітин-інтеін-опосередкованого очищення.Три различных подхода для очистки рекомбинантных белков, полученных методом транзиентной экспрессии в растениях, были успешно применены с использованием GFP как репортера. Схему очистки, включающую преципитацию сульфатом аммония и анионообменную хроматографию, сравнивали с протоколами теговой очистки с использованием 6xHis-тега и хитин-интеин-опосредованной очистки

Obtaining and analysis of товассо, lettuce and rape plants transformed with human interferon alfa 2b gene

Plasmid constructs for Agrobacterium-mediated transformation of plant nuclear genome with human interferon alpha2b gene were built up and used to obtain transgenic plants of tobacco, lettuce and rape. Presence of the target gene was confirmed by PCR analysis and interferon activity in lettuce plants was shown by the vesicular stomatitis virus cytopathic effect assay.Сконструйовані вектори для Agrobacterium-опосередкованої трансформації ядерного геному рослин геном інтерферону альфа 2b людини були використані для отримання трансгенних рослин тютюну, салату та ріпаку. Присутність цільового гену було показано за допомогою ПЛР аналізу. Трансформовані рослини салату демонстрували антивірусну активність інтерферону.Сконструированные вектора для Agrobacterium-опосредованной трансформации ядерного генома растений геном интерферона альфа 2b человека были использованы для получения трансгенных растений табака, салата и рапса. Присутствие целевого гена было показано с помощью ПЦР анализа. Трансформированные растения салата демонстрировали антивирусную активность интерферона