Coxsackievirus infections in pregnant women with a parallel experimental model infection showing possible effects on course of pregnancy

Aim of our work was firstly to determine the prevalence of anti-coxsackievirus antibodies during pregnancy. 217 serum samples were tested for antibodies by virus neutralization test against coxsackieviruses (CV) B1–B6, A7 and A9. The second aim was to investigate experimental transmission of virus to the fetus during pregnancy. Methods. Virus Neutralization Test, RT-PCR. Results. In the serological study, paired blood serum samples from 217 pregnant women were studied for antibodies against coxsackievirus serotypes (CVB1–CVB6, CVA7 and CVA9) in sera of pregnant women from selected areas of the Slovak Republic. Coxsackievirus B4 (CVB4) infection was most prevalent, followed by CVB3, CVA7, CVA9, CVB5, CVB2, CVB1 while coxsackievirus B6 (CVB6) was scarce. In 30 out of 217 cases (13.82 %) current infection was recorded. In the experimental murine study, in the second week of gravidity we observed presence of enteroviral RNA in the placenta and the intestine of the dead fetuses of the mice. Conclusions. Anti-CV antibodies were prevalent in the pregnant mothers indicating circulation of these viruses in the population. Current infection was shown in 13.82 % of studied cases. Presence of virus RNA in the organs of the unborn fetuses in the experimental infection indicates the possibility of transfer of the coxsackievirus B4-E2 infection from mother to child during antenatal development. Keywords: coxsackieviruses, pregnancy.Мета нашої роботи полягала, по-перше, у визначенні розповсюдженості антитіл проти вірусу Коксакі протягом вагітності (217 зразків сироватки крові перевіряли на наявність антитіл проти вирусу Коксакі (ВК) В1–В6, А7 и А9) і, по-друге, у дослідженні передачі вірусу плоду під час вагітності на модельній системі. Методи. Віруснейтралізувальний тест, ОТ-ПЛР. Результати. Проведено серологічне вивчення парних (мати–плід) зразків сироватки крові 217 вагітних жінок з різних районів Словацької Республіки на наявність антитіл проти вірусів Коксакі серотипів (ВКB1–ВКB6, CVA7 и ВКA9). Найпоширенішою інфекцією виявився вірус Коксакі B4 (ВКB4), далі відмічені ВКB3, ВКA7, ВКA9, ВКB5, ВКB2, ВКB1, а інфікування B6 (ВКB6) було найменшим. Інфекцію зареєстровано у 30 з 217 випадків (13,82 %). В експериментах на мишах протягом другого тижня вагітності ми спостерігали присутність ентеровірусної РНК у плаценті і кишечнику мертвих плодів. Висновки. Антитіла проти вирусів Коксакі, знайдені у вагітних жінок, свідчать про розповсюдженість цих вірусів у популяції. Перебіг інфекції показано для 13,82% проаналізованих випадків. Наявність вірусної РНК в органах плодів, які не народилися, за експериментальної інфекції у мишей вказує на можливість передачі вирусів Коксакі B4–E2 інфекції від матері плоду у період дородового розвитку. Ключові слова: віруси Коксакі, вагітність.Цель нашей работы состояла, во-первых, в определении распространенности антител против вируса Коксаки во время беременности (217 образцов сыворотки крови проверяли на наличие антител против вируса Коксаки (ВК) В1–В6, А7 и А9) и, во-вторых, в исследовании передачи вируса плоду во время беременности на модельной системе. Методы. Вируснейтрализующий тест, ОТ-ПЦР. Результаты. Проведены серологическое изучение парных (мать–плод) образцов сыворотки крови 217 беременных женщин из различных районов Словацкой Республики на наличие антител против вирусов Коксаки серотипов (ВКB1–ВКB6, CVA7 и ВКA9). Наиболее распространенной инфекцией оказался вирус Коксаки B4 (ВКB4), далее отмечены ВКB3, ВКA7, ВКA9, ВКB5, ВКB2, ВКB1, а инфицирование B6 (ВКB6) было наименьшим. Инфекция зарегистрирована в 30 из 217 случаев (13,82 %). В экспериментах на мышах в течение второй недели беременности мы наблюдали присутствие энтеровирусной РНК в плаценте и кишечнике мертвых плодов. Выводы. Антитела против вирусов Коксаки, обнаруженные у беременных женщин, свидетельствуют о распространенности этих вирусов в популяции. Протекание инфекции показано для 13,82% проанализированных случаев. Наличие вирусной РНК в органах нерожденных плодов при экспериментальной инфекции у мышей указывает на возможность передачи вирусов Коксаки B4–E2 инфекции от матери плоду в период дородового развития. Ключевые слова: вирусы Коксаки, беременность

International round-robin study on the Ames fluctuation test

An international round-robin study on the Ames fluctuation test [ISO 11350, 2012], a microplate version of the classic plate-incorporation method for the detection of mutagenicity in water, wastewater and chemicals was performed by 18 laboratories from seven countries. Such a round-robin study is a precondition for both the finalization of the ISO standardization process and a possible regulatory implementation in water legislation. The laboratories tested four water samples (spiked/nonspiked) and two chemical mixtures with and without supplementation of a S9-mix. Validity criteria (acceptable spontaneous and positive control-induced mutation counts) were fulfilled by 92-100%, depending on the test conditions. A two-step method for statistical evaluation of the test results is proposed and assessed in terms of specificity and sensitivity. The data were first subjected to powerful analysis of variance (ANOVA) after an arcsine-square-root transformation to detect significant differences between the test samples and the negative control (NC). A threshold (TH) value based on a pooled NC was then calculated to exclude false positive test results. Statistically, positive effects observed by the William's test were considered negative, if the mean of all replicates of a sample did not exceed the calculated TH. By making use of this approach, the overall test sensitivity was 100%, and the test specificity ranged from 80 to 100%