亜鉛ｲｵﾝ応答性ﾋﾟﾘｼﾞﾝ-ﾋﾟﾘﾄﾞﾝ型蛍光ﾌﾟﾛｰﾌﾞを用いた細胞内亜鉛分布解析への挑戦(その1)

ｶｲｺ(Bombyx mori)の幼虫体液中にはｶｲｺ由来培養細胞の増殖を抑制する活性があることを見出した｡また､ｶｲｺ体液によって増殖を阻害された細胞中には脂肪滴の形成が認められた｡本研究ではこれらの細胞増殖抑制および脂肪蓄積促進活性の実体となるｶｲｺ体液因子の解明を行った｡ｶｲｺ体液を出発材料として､細胞増殖抑制活性を指標にﾀﾝﾊﾟｸ質の精製を行った｡6段階の精製過程の後､SDS-ﾎﾟﾘｱｸﾘﾙｱﾐﾄﾞｹﾞﾙ電気泳動において単一ﾊﾞﾝﾄﾞを示す画分を得た｡ｱﾐﾉ酸配列解析の結果､このﾀﾝﾊﾟｸ質はｶｲｺ Niemann-Pick disease type C2(BmNPC2)ﾀﾝﾊﾟｸ質であると同定された｡ﾘｺﾝﾋﾞﾅﾝﾄ BmNPC2 ﾀﾝﾊﾟｸ質は細胞増殖抑制活性を示したことから BmNPC2 ﾀﾝﾊﾟｸ質がｶｲｺ体液中の細胞増殖抑制活性の実体であることが示唆された｡さらに､ﾘｺﾝﾋﾞﾅﾝﾄ BmNPC2 ﾀﾝﾊﾟｸ質をｶｲｺ培養細胞に添加することによって､細胞内ﾄﾘｸﾞﾘｾﾘﾄﾞ量の増大が認められた｡以上の結果は､BmNPC2 ﾀﾝﾊﾟｸ質がｶｲｺにおいて細胞増殖と脂質代謝を制御する体液性因子であることを示唆している｡To detect the subcellular localization of labile zinc ions, we applied Bpy-NH2, a novel zinc responsive fluorescent probe that contains a unique pyridine-pyridone structure. Because of a compact size and physicochemical characteristics of Bpy-NH2, it passes through a cellular membrane and reach to any intracellular compartments where labile zinc ions are concentrated. In HeLa cells, Bpy-NH2 localized to the late endosomes and lysosomes as Fluo-Zin3 AM, a known fluorescent zinc probe, did. In the presence of pyrithione, a zinc ionophore, the fluorescent signal of Fluo-Zin3 AM still retained in the late endosomes and lysosomes, suggesting that this probe only can detect zinc ions localized to the acidic compartments. Intriguingly, in the presence of pyrithione, Bpy-NH2 detected the distribution of labile zinc ions to both the cytoplasm and nucleus. We propose that Bpy-NH2 may have an unbiased subcellular localization property and thus, it can detect bona fide intracellular localization of zinc ions