A novel neutralization sensitive and subdominant RAP-1-related antigen (RRA) is expressed by Babesia bovis merozoites

Objective. The Babesia bovis genome encodes a rap-1 related gene denominated RAP-1 related antigen (RRA). In this study, we analysed the pattern of expression, immunogenicity and functional relevance of RRA. Methods. Phylogenetic analysis was performed using the program Phylip. Expression of rra was analysed by Northern blots, RT-PCR, immunoprecipitation, Western blots and immunofluorescence. RRA antigenicity was tested by T-cell proliferation and Western blot analysis, and functional relevance was determined in an in vitro neutralization assay. Results. RRA is more closely related to RAP-1b of Babesia bigemina than to B. bovis RAP-1, and it is highly conserved among distinct strains. Transcriptional analysis suggests lower numbers of rra transcripts compared to rap-1. Immunoprecipitation of metabolically labelled B. bovis proteins with antibodies against synthetic peptides representing predicted antigenic regions of RRA confirmed the expression of a ∼43 kDa RRA in cultured merozoites. Antibodies present in B. bovis hyperimmune sera, but not in field-infected cattle sera, reacted weakly with recombinant RRA, and no significant stimulation was obtained using recombinant RRA as antigen in T-cell proliferation assays, indicating that RRA is a subdominant antigen. Antibodies against RRA synthetic peptides reacted with merozoites using immunofluorescence, and were able to significantly inhibit erythrocyte invasion in in vitro neutralization tests, suggesting functional relevance for parasite survival. Conclusion. B. bovis express a novel subdominant RAP-1-like molecule that may contribute to erythrocyte invasion and/or egression by the parasite.Fil: Suarez, Carlos E.. United States Department of Agriculture. Agriculture Research Service; Estados Unidos. Washington State University; Estados UnidosFil: Laughery, Jacob M.. Washington State University; Estados UnidosFil: Bastos, Reginaldo G.. Washington State University; Estados UnidosFil: Johnson, Wendell C.. United States Department of Agriculture. Agriculture Research Service; Estados UnidosFil: Norimine, Junzo. Washington State University; Estados UnidosFil: Asenzo, Gustavo Daniel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas; ArgentinaFil: Brown, Wendy C.. Washington State University; Estados UnidosFil: Jacobsen, Monica Ofelia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas; ArgentinaFil: Goff, Will L.. United States Department of Agriculture. Agriculture Research Service; Estados Unido

ROTADIAL: The first nanobody-based immunoassay to detect Group A Rotavirus

ROTADIAL is a rapid nanobody (Nb)-based ELISA assay able to identify Rotavirus group A (RVA) in feces from pediatric patients. The assay is based on a sandwich of two patented llama-derived Nbs directed to the inner capsid viral protein VP6 from RVA. Nbs are directed to conformational epitopes of VP6 and recognized all human RVA strains tested, representing ideal reagents for their use in immunodiagnostic tests for RVA detection. All the steps are carried out at room temperature, bringing results in less than two hours. This assay, named ROTADIAL, was validated with a reference panel of feces from pediatric patients from Argentina. The overall sensitivity and specificity of the ROTADIAL test, when compared to a commercial test, was 100 % (100/100) and 99 % (99/100) respectively. ROTADIAL presented optimal analytical performance, being capable of detecting RVA regardless of the presence of other common human enteric infectious agents and is the first RVA-diagnostic assay developed using Nbs, worldwide.Fil: Vega, Celina Guadalupe. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Virología e Innovaciones Tecnológicas. - Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Virología e Innovaciones Tecnológicas; ArgentinaFil: Garaicoechea, Lorena Laura. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria; ArgentinaFil: Degiuseppe, Juan Ignacio. Dirección Nacional de Instituto de Investigación.Administración Nacional de Laboratorios e Institutos de Salud "Dr. Carlos G. Malbrán"; ArgentinaFil: Bok, Marina. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Virología e Innovaciones Tecnológicas. - Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Virología e Innovaciones Tecnológicas; ArgentinaFil: Rivolta, A. A.. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria; ArgentinaFil: Piantanida, Ana Paula. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria; ArgentinaFil: Asenzo, Gustavo Daniel. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Virología e Innovaciones Tecnológicas. - Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Virología e Innovaciones Tecnológicas; ArgentinaFil: Adúriz Guerrero, Matías. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Virología e Innovaciones Tecnológicas. - Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Virología e Innovaciones Tecnológicas; ArgentinaFil: Wigdorovitz, Andrés. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Virología e Innovaciones Tecnológicas. - Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Virología e Innovaciones Tecnológicas; ArgentinaFil: Stupka, Juan Andrés. Dirección Nacional de Instituto de Investigación.Administración Nacional de Laboratorios e Institutos de Salud "Dr. Carlos G. Malbrán"; ArgentinaFil: Parreño, Gladys Viviana. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Virología e Innovaciones Tecnológicas. - Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Virología e Innovaciones Tecnológicas; Argentin