Standard methods for fungal brood disease research

Chalkbrood and stonebrood are two fungal diseases associated with honey bee brood. Chalkbrood, caused by Ascosphaera apis, is a common and widespread disease that can result in severe reduction of emerging worker bees and thus overall colony productivity. Stonebrood is caused by Aspergillus spp. that are rarely observed, so the impact on colony health is not very well understood. A major concern with the presence of Aspergillus in honey bees is the production of airborne conidia, which can lead to allergic bronchopulmonary aspergillosis, pulmonary aspergilloma, or even invasive aspergillosis in lung tissues upon inhalation by humans. In the current chapter we describe the honey bee disease symptoms of these fungal pathogens. In addition, we provide research methodologies and protocols for isolating and culturing, in vivo and in vitro assays that are commonly used to study these host pathogen interactions. We give guidelines on the preferred methods used in current research and the application of molecular techniques. We have added photographs, drawings and illustrations to assist bee-extension personnel and bee scientists in the control of these two diseases.La ascosferiosis (o cría yesificada) y cría de piedra son dos enfermedades fúngicas asociadas con la cría de la abeja melífera. La ascosferiosis, causada por el hongo Ascosphaera apis, es una enfermedad comú;n de amplia distribución que puede resultar en una severa disminución en el número de obreras emergentes y por lo tanto afecta la productividad de la colonia. La cría de piedra es causada por Aspergillus spp. los cuales son raramente observados y su impacto en la salud de la colonia no está esclarecido. El mayor problema con la presencia de Aspergillus en abejas es la producción de conidios aéreos, que pueden llevar a aspergillosis broncopulmonares alérgicas, aspergilomas pulmonares o aun aspergilosis invasivas en tejidos pulmonares en humanos luego de inhalarlos. En este capítulo describimos los síntomas de las enfermedades producidas por estos patógenos fú;ngicos. Además proveemos metodologías de investigación y protocolos para su aislamiento y cultivo, ensayos in vivo e in vitro que son comú;nmente usados para estudiar las interacciones de estos patógenos con su hospedero. Damos una guía sobre los métodos preferidos utilizados en la investigación actual y la aplicación de técnicas de moleculares. Hemos añadido fotografías, dibujos e ilustraciones para ayudar al personal.EEA BalcarceFil: Jensen, Annette Bruun. University of Copenhagen. Department of Plant and Environmental Sciences; DinamarcaFil: Aronstein, Kathrine. USDA-ARS. Honey Bee Research Unit; Estados UnidosFil: Flores, José Manuel. University of Córdoba. Department of Zoology; EspañaFil: Vojvodic, Svjetlana. University of Arizona. Center for Insect Science; Estados UnidosFil: Palacio, Marí­a Alejandra. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Estación Experimental Agropecuaria Balcarce; Argentina. Universidad Nacional de Mar del Plata. Facultad de Ciencias Agrarias; ArgentinaFil: Spivak, Marla. University of Minnesota. Department of Entomology; Estados Unido