Estandarización de un protocolo de regeneración de cebolla chalote (Allium cepa var. aggregatum) a partir de meristemas apicales

Shallots (Allium cepa var. aggregatum) are a type of onion which form several bulbs from a single basal disc. They are characterized by a high total solids content which improves their gastronomic and neutraceutical properties. Shallots (Allium cepa var. aggregatum) are a culinary staple with high commercial value in European, North American and South American markets. Their commercial production via vegetative propagation, however, is time-consuming and strongly affected by viral diseases. The aim of this study was to establish an in vitro apical meristem culture protocol for the regeneration of shallot plants. The efficiency of different regeneration and bulb-formation media were evaluated in this investigation. The best results for plant regeneration (68 % efficiency) were obtained with MS + 30g. L-1 sucrose + 1.5g. L-1 benomyl + 1.1uM NAA + 8.9uM BAP and for bulb formation (77% efficiency) with MS + 10uM ancymidol and 50g. L-1 sucrose. Moreover, 50% of all plants regenerated from apical meristems were effectively acclimatized. The protocol developed and standardized in this investigation can be used to increase the efficiency of shallot bulb-seed production for commercial applications.La cebolla chalote (Allium cepa var. aggregatum) forma varios bulbos a partir de un solo disco basal y tiene mayor contenido de sólidos totales que aumentan su valor gastronómico y nutracéutico. Es un producto altamente valorado en el mercado europeo, estadounidense y sudamericano. En el Ecuador no se la registra como una variedad diferente a la cebolla roja. Sin embargo, la cebolla chalote es apetecida y utilizada dentro del sector gastronómico y aumenta el interés de su producción. El objetivo de este estudio fue estandarizar un protocolo de regeneración in vitro de plantas de chalote a partir de meristemas apicales. Se aisló meristemas apicales a partir de bulbos de chalote, se probó varios medios para la regeneración de plantas y la formación de bulbos. El porcentaje de regeneración de plantas más alto (68%) se obtuvo con el medio: MS + 30g. L-1 sacarosa, 1.5g. L-1 benomyl + 1.1uM NAA + 8.9uM BAP, y de embulbamiento (77%) con el medio: Ms + 10uM ancymidol + 50g. L-1 sacarosa. Finalmente, el 50% de plantas regeneradas a partir de meristemas fueron aclimatadas eficientemente. El protocolo establecido en esta investigación puede ser utilizado para mejorar la producción de bulbo-semilla y así promover el cultivo de cebolla chalote en el país

Estandarización de un protocolo para detección de OGMs: evaluación de la presencia de OGMs en granos de soya colectados en diferentes centros de acopio de Ecuador

Soybean is a crop with a national production in Ecuador which is insufficient to meet its demand. Therefore, soybean seeds and soya beans are imported from countries where the use of transgenic soybean has been approved. As a consequence, there is a probability of finding this type of soybean in Ecuadorian territory. In this research, a detection and quantification SYBR Green-based method of genetically modified soybean was standardized. Primers used for the amplification corresponded to specific sequences of the two most representative recombinant elements in GM (genetically modified) crops, the 35S promoter from the Cauliflower Mosaic Virus (P35S) and NOS terminator from Ti plasmid in Agrobacterium tumefaciens (TNOS). These elements generated 200bp and 69bp amplicons respectively. The quantitative analysis was performed generating a standard curve based on the amplification of certified reference materials with 0.01%, 0.1%, 1% y 10% of GM soybean event GTS 40-3-2, using the above mentioned primers. The detection limit was set at 0.01% while the quantification limit was set at 0.1%. In 2 of the 26 soybean samples analyzed, more than 0.1% of GMOs was found (sample 22 with 0.2% and sample 23 with 14%). Additionally, adventitious GMO presence was detected in 8 of the tested samples. Due to Ecuadorian GMO regulations, this kind of analysis is important in order to determine the presence of GMOs in Ecuador, and is clear evidence for the need of trained personnel and specialized institutions for the detection and analysis of GMOs.La soya es un cultivo cuya producción nacional en el Ecuador no es suficiente para suplir la demanda interna. Por esta razón, se recurre a la importación de semilla de soya para siembra y soya en grano para consumo, desde países donde el uso de soya transgénica ha sido aprobado. Como consecuencia, existe la probabilidad del ingreso de este cultivo a territorio ecuatoriano. En esta investigación, se estandarizó una metodología para la detección y cuantificación de soya genéticamente modificada con tecnología SYBR Green. Los primers utilizados para la amplificación corresponden a secuencias específicas de los dos elementos recombinantes más representativos en soya genéticamente modificada, el promotor 35S del Virus del Mosaico de la Coliflor (P35S) y el terminador NOS del plásmido Ti de Agrobacterium tumefaciens (TNOS), generando amplicones de 200pb y de 69pb respectivamente. El análisis cuantitativo se realizó a partir de la generación de una curva estándar en base a la amplificación usando los primers mencionados en material de referencia certificado con concentraciones de 0.01%, 0.1%, 1% y 10% de soya transgénica del evento GTS 40-3-2. El límite de detección se estableció en 0.01%, mientras que el límite de cuantificación fue establecido en 0.1%. En 2 de las 26 muestras de soya analizadas se encontró más del 0.1% de OGM (organismo genéticamente modificado) (muestra 22 con 0.2% y la muestra 23 con 14%). Además se detectó presencia adventicia de soya transgénica en 8 de las muestras estudiadas. Debido a las regulaciones de OGMs que existen en el Ecuador, este tipo de análisis es importante para confirmar la presencia de OGMs en el territorio ecuatoriano y evidencia la necesidad de contar con personal capacitado e instituciones especializadas en la detección y análisis de organismos genéticamente modificados

Cultivo in vitro del mortiño (Vaccinium floribundum Kunth)

Due to the economic and agronomic potencial that mortiño (Vaccinium floribundum Kunth) has in Ecuador, the objective of this research was to establish in vitro propagation methods for this species by seed germination and by shoot growth from axillary buds. Modified Woody Plant Medium [1] (mWPM) was used, in which up to 60.7% of seeds germinated. A strong cytokine, trans-zeatin riboside, TZR (1 mg/l), combined with a-napthaleneacetic acid, NAA (0.05 mg/l), was used to subculture the in vitro germinated plantlets. The use of basal medium without hormones or with 2iP, 6-(gamma,gamma-dimethylalylamino) pu­rine, allowed elongation and rooting of plantletss. The acclimatization of mortiño plants has not yet been standardized, and further research is needed to find the conditions that are suitable for this process. To establish in vitro cultures by axillary buds, apical segments of the stem were disinfected and introduced in medium mWPM containing TZR, (7 mg/l) combined with NAA (0.1 mg/l). Growing buds were transferred to media with 2iP (3 or 5 mg/l) for propagation and elongation. This investigation is a preliminary study for the in vitro culture of mortiño, setting the basis for future research with this species.Debido al potencial agrícola y económico que tiene el mortiño (Vaccinium floribundum Kunth) para el Ecuador, esta investigación tuvo como objetivo establecer métodos de pro­pagación in vitro de esta especie como germinación de semillas y brotación de yemas axilares. Se utilizó un medio basal sin hormonas, Woody Plant Medium [1] modificado (mWPM), en el que las semillas germinaron con hasta un 60.7% de eficiencia. Para el subcultivo de plántulas germinadas in vitro , se usó una citoquinina fuerte, la trans zeatina ribóside, TZR (1 mg/l) en combinación con ácido a-naftalenacético, NAA (0.05 mg/l). El medio basal sin hormonas o con 2iP, 6-(gamma,gamma-dimetilalilamino) purina, permitió la elongación de las plántulas germinadas in vitro y su enraizamiento. La aclimatación de las plantas de mortiño cultivadas in vitro aún no está estandarizada y se requiere mayor investigación para encontrar los factores necesarios para completar satisfactoriamente este proceso. Para la introducción in vitro de yemas axilares se desinfectaron los extremos apicales de tallos de mortiño, y se los introdujo en medio mWPM suplementado con TZR (7 mg/l) en combinación conNAA, (0.1 mg/l). Las yemas brotadas se subcultivaron en me­dios que contenían 2iP (3 ó 5 mg/l) para su propagación y elongación. Esta investigación representa un estudio piloto para el cultivo in vitro del mortiño, sentando las bases para futuras investigaciones con esta especie

Evaluación de la variabilidad genética del tomate de árbol

El presente trabajo determinó el nivel de diversidad genética existente en varios cultivos de tomate de árbol (Solanum betaceum) de las provincias de Imbabura, Tungurahua y Pichincha, mediante el uso de marcadores microsatélites. Además, se evaluó el nivel de transferibilidad al tomate de árbol, de 53 pares de primers microsatélites desarrollados originalmente para papa (Solanum tuberosum). Se usó 50 accesiones, que abarcaron las seis variedades de tomate de árbol posibles, de acuerdo al tamaño/forma y color del mucílago del fruto. El porcentaje de pares de primers que amplificaron con éxito fue de 28.3 %. Los loci amplificados mostraron mayoritariamente un patrón monomórfico. El porcentaje de primers polimórficos fue de 7.5%. El valor PIC para cada par de primers varió entre 0.077 y 0.514. En solo 5 de los 11 loci utilizados para el análisis, se observaron individuos heterocigotos. El porcentaje de individuos heterocigotos para estos loci varió entre 4 y 98 %. El acervo genético de las accesiones analizadas parece ser estrecho y homogéneo. Se detectaron valores altos de similitud genética entre las accesiones (80 - 100%), usando el coeficiente de Jaccard. El método de agrupamiento UPGMA demostró que las accesiones no se asociaban ni por lugar de origen, ni por variedad. Estos resultados son congruentes con los obtenidos en estudios anteriores. El bajo porcentaje de transferencia de primers (28.3%) indica que las secuencias que flanquean a los microsatélites no se han conservado en el proceso de especiación de la papa y el tomate de árbol. La reducida diversidad genética en los cultivos de tomate de árbol podría explicarse por un proceso relativamente reciente de domesticación de la especie, y por una conjunción de factores geográficos/ecológicos, y fenológicos, que fomentan la homogenización genética entre y dentro de los cultivos

Identificación de alelos S asociados con autoincompatibilidad en individuos de capulí (Prunus serótina subsp. capulí) mediante la amplificación del Intrón I del gen de la S-RNasa

In plants, gametophytic self-incompatibility is a genetic mechanism regulated by the S locus, which has evolved to prevent self-fertilization. In fruit crops, information regarding the allelic composition of the S locus is essential for the establishment of productive orchards, as this allelic composition defines compatible combinations between individuals. The identification and cloning of S-RNase genes in Prunus species has allowed the development of molecular techniques for the characterization of S genotypes in wild and less-studied species of the genus. In this study we evaluated 80 individuals of capulí (Prunus serotina subsp. capulí) collected from 8 provinces of the Ecuadorian highlands to determinate the degree of allelic diversity of the S locus in this species. The molecular characterization of S loci was performed using degenerate primers designed from conserved regions of the S-RNase gene of several Prunus species. PCR products were separated on agarose gels, classified based on band size and sequenced. Our results reveal the presence of 11 alleles across sampled individuals. Generally, identified alleles showed a high percentage of identity with S-locus sequences reported for other species of the genus and it can be speculated that these derive from a common ancestor. By contrast, sequences with a lower percentage of identity may have originated independently following the diversification of Prunus species. The results obtained in this study should be complemented with field tests to confirm the phenotypic behavior of the capuli individuals analyzed.La autoincompatibilidad gametofítica es un mecanismo genético que ha evolucionado para prevenir la autofecundación en varias familias de plantas; su funcionamiento está regulado por el locus S y ha sido identificado en varias especies del género Prunus. El conocimiento de la composición alélica S de individuos y cultivares de especies frutales es esencial para el establecimiento de huertos productivos, mediante la definición de combinaciones entre cultivares compatibles. La identificación y clonación de genes de S-RNasas en especies del género Prunus ha permitido el desarrollo de técnicas moleculares para la caracterización de genotipos S en varias especies silvestres y especies poco estudiadas del género. El presente estudio evaluó 80 individuos de capulí (Prunus serotina subsp. capuli) colectados en 8 provincias de la Sierra ecuatoriana para determinar la diversidad alélica del locus S, utilizando primers degenerados diseñados a partir de regiones conservadas del gen de la S-RNasa de varias especies del género Prunus. Los productos de PCR fueron separados en geles de agarosa de acuerdo a su tamaño y los amplicones polimórficos fueron secuenciados. El análisis de las secuencias reportó un total de 11 alelos presentes en la muestra estudiada y además mostró la existencia de similitud con secuencias de distintas especies del género Prunus. Se podría especular que las secuencias encontradas en P serotina que presentan un alto porcentaje de identidad con las secuencias reportadas en otras especies del género fueron heredadas a partir de un ancestro común que ya las poseía. Por otro lado, las secuencias con un menor porcentaje de identidad habrían tenido orígenes independientes en las distintas especies. El uso de primers consenso degenerados permitió realizar un screening rápido y eficiente de los individuos de capulí analizados, mediante la asignación de genotipos putativos. Los resultados obtenidos en este estudio deben ser complementados con pruebas en el campo para confirmar el comportamiento fenotípico de los individuos de capulí estudiados

Diferenciación molecular en variedades cultivadas de tomate de árbol

Esta investigación tuvo como objetivo determinar molecularmente el nivel de variabilidad genética intra e inter varietal existente en los cultivos de Solanum betaceum en tres provincias del Ecuador, Imbabura, Pichincha y Tungurahua y, basado en esto, identificar las seis variedades reconocidas desde el punto de vista morfológico (amarillo puntón, amarillo gigante, amarillo bola, morado gigante, morado bola y morado común). Se incluyó de cuatro a cinco individuos por variedad, para un total de 26 accesiones objeto del estudio. La técnica usada fue la amplificación al azar de fragmentos polimórficos de ADN, AFLP. Se seleccionó 8 combinaciones de primers que se consideraron como las más informativas por el número y definición de bandas en el gel y el nivel de polimorfismo develado. Se encontró variabilidad limitada entre accesiones, teniendo un máximo del 18% de distancia entre genotipos del tipo amarillo con respecto a los del tipo morado, pero no fue posible distinguirlas con respecto a la forma del fruto ni a la provincia de origen. Las combinaciones de primers usadas, detectaron un 60% de polimorfismo entre accesiones y permitieron establecer que los individuos muestreados no representaban genotipos completamente diferenciables debido quizá a su elevado nivel de cruzamiento intervarietal. En futuros estudios sería necesario incluir individuos de poblaciones silvestres que puedan aportar información sobre los orígenes de la variabilidad existente en el cultivo de tomate de árbol del Ecuador

Propagación de tomate de árbol (Solanum betaceum) vía embriogénesis somática

A reproducible micropropagation protocol for tamarillo (Solanum betaceum) via somatic embryogenesis was established in this study. Three types of explants were assayed: leaves, hypocotyls and zygotic embryos; all of them obtained from in vitro cultured seeds. Different concentrations of auxins 2, 4-D (2,4-dichlorophenoxyacetic acid) and NAA (a- napthaleneacetic acid) and sucrose were tested to find out an appropriate medium that sti­mulated the formation of embryogenic calli. MS medium supplemented with 5 mg/L of NAA and 90 g/L of sucrose (pH 5.8) induced somatic embryos formation from the upper thirds of hypocotyls and from zygotic embryos. One-hundred percent of the explants deri­ved from zygotic embryos and hypocotyls developed big whitish calli. However, only 40 % of the hypocotyl-derived calli and 70 % of the zygotic embryo-derived calli produced so­matic embryos. The results showed that somatic embryos were obtained after a four-week incubation period in MS medium supplemented with 5 mg/L of NAA and 90 g/L of sucrose. The somatic embryos grew rapidly and produced plantlets with normal phenotypes. These results suggest that this technique could be applied for large scale production of Tamarillo and other agronomically important Andean fruit crops.En esta investigación se estableció un método reproducible de micropropagación de tomate de árbol (Solanum betaceum), a partir de embriones somáticos. Se usaron tres tipos de explantes, hojas, hipocótilos y embriones cigóticos, los cuales fueron obtenidos a partir de semillas de tomate de árbol de la variedad anaranjada común cultivadas in vitro. Se probaron dos tipos de auxinas 2,4-D (ácido 2,4-dicloro fenoxiacético) y ANA (ácido a-naftalenacético), y sacarosa en distintas concentraciones a fin de encontrar un medio de cultivo que estimule la formación de callo embriogénico. Se encontró que el medio MS suplementado con 5 mg/L de ANA y 90 gr/L de sacarosa a pH 5,8 promovió la formación de embriones somáticos a partir del tercio superior de los hipocótilos y de embriones ci- góticos. El 100% de los explantes provenientes de embriones cigóticos y de hipocótilos formaron callos de buen tamaño y de una coloración blanco cremosa. Sin embargo, la for­mación de embriones somáticos en los callos obtenidos a partir de hipocótilos fue tan solo del 40 %, mientras que con los embriones cigóticos fue del 70 %. Los resultados mostraron que en medio MS suplementado con 5 mg/L de ANA y 90 gr/L de sacarosa se obtuvieron embriones somáticos a partir de la cuarta semana de cultivo, los cuales se desarrollaron rápidamente y produjeron plántulas sin anormalidades. Estos resultados evidencian la apli- cabilidad de esta técnica para la producción a gran escala de plantas de interés agrícola para el país

Análisis de la fidelidad de sitio entre machos y hembras de ballenas jorobadas que visitan las costas de Esmeraldas (Ecuador)

Humpback whales (Megaptera novaeangliae) migrate across the world’s oceans from feeding grounds in polar waters in high latitudes to breeding grounds in tropical waters. Although this species is predictable in its areas of occurrence, there are several poorly understood aspects of its migration patterns. This study aims to evaluate the differences between site fidelity of male and female humpback whales off the coast of Esmeraldas (Ecuador) for the years 2010, 2011 and 2012. A total of 57 whale skin samples were obtained using a biopsy system. For sex determination, primers SFY1204 and SFY0097 were used. A variable section of the mitochondrial DNA control region (D-loop) was amplified by PCR and sequenced to identify haplotypes. Of the humpback whale samples analyzed, it was found that 12 corresponded to females and 44 to males, and a total of 23 different haplotypes were identified. Molecular variance analysis (AMOVA) showed that males had higher site fidelity, although a significant difference was found in the haplotype frequency and nucleotide composition between males within the 2010 and 2011 seasons. These differences were not found within the seasons of 2010-2012 and 2011-2012, which can be attributed to the fact that samples of 2010 were collected in August, when males are in resident groups, while samples of 2011 were collected in July when most males can be in transit to breeding areas further north in Costa Rica and Panama. In addition, females showed no significant differences in haplotype frequency and nucleotide composition, although between female humpback whales of the 2010 and 2012 seasons, only one haplotype was shared. These results may be due to the relatively small number of female samples. These findings may suggest that although male humpback whales disperse in the tropical breeding ground from Southern Ecuador to Northern Costa Rica, they return each year to their native breeding ground. On the other hand, females probably remain in feeding sites during alternate years, to recover from the energy expenditure of gestation and lactation.La ballena jorobada (Megaptera novaeangliae) migra en todos los océanos del mundo desde sus zonas de alimentación en aguas polares a zonas de reproducción en aguas tropicales. Aunque esta especie es predecible en sus áreas de ocurrencia, son aún poco conocidos varios aspectos de la migración de la ballena jorobada. El presente trabajo tuvo como objetivo evaluar las diferencias de fidelidad de sitio entre machos y hembras de ballenas jorobadas que visitaron las costas de Esmeraldas (Ecuador) durante las temporadas 2010, 2011 y 2012. Un total de 57 muestras de piel de ballena se obtuvieron mediante un sistema de toma de biopsias. Para la determinación del sexo se utilizó los primers SFY1204 y SFY0097. Una sección variable de la región control del ADN mitocondrial (D-loop) se amplificó mediante PCR y secuenció para analizar los haplotipos presentes. De las muestras de ballenas jorobadas analizadas se determinó que 12 correspondieron a hembras y 44 a machos, y se identificó un total de 23 haplotipos diferentes. Al realizar un análisis de varianza molecular (AMOVA), se encontró que los machos presentaban una mayor fidelidad de sitio, a pesar de una diferencia notable en la frecuencia de haplotipos y composición de nucleótidos entre machos de las temporadas 2010 y 2011. Esta diferencia no se encontró entre las temporadas 2010-2012 ni 2011-2012, posiblemente porque las muestras del 2010 fueron recolectadas en Agosto, cuando los machos se quedan en grupos residentes, mientras que las muestras del 2011 fueron recolectados en Julio cuando la mayoría de machos están en tránsito hacia áreas de reproducción en el norte como Panamá y Costa Rica. Las hembras no mostraron diferencias significativas en la frecuencia de haplotipos y composición de nucleótidos, a pesar de que en las hembras de las temporadas 2010 y 2012 se compartió un solo haplotipo. Estos resultados, pueden deberse al limitado número de muestras de ballenas jorobadas hembras. Estos hallazgos pueden sugerir que a pesar de que las ballenas jorobadas machos se dispersan desde las zonas de reproducción al sur del Ecuador hasta el norte de Costa Rica, regresan cada año a su zona de reproducción originaria. Por otro lado, las hembras posiblemente permanecen en años alternos en los sitios de alimentación para recuperarse de los gastos energéticos de la gestación y lactancia

Efecto de la temperatura, medios de cultivo y reguladores de crecimiento en la germinación de embriones cigóticos de durazno (Prunus pérsica) var. Diamante

In this research, the effects of temperature, culture media and growth regulators on mature peach embryos (var. Diamante) were evaluated. Temperature had a significant influence on germination, as embryos cultured at 4°C for 40 days and then moved to a temperature of 18°C had a germination rate of 84%, compared to embryos cultured directly at 18°C, which had a germination rate of 50%. Regarding the culture media, the highest germination rate was achieved using MS media with half the concentration of salts. Despite not having significant differences when adding growth regulators in the culture media, the addition of high concentrations of cytokinins (>1 mg/L) and low concentrations of auxins (0.5 mg/L) generated plants with a higher number of leaves. The best root development was obtained by the subculture of plants in MS media with 3mg/L of IBA for 16 days. The acclimatization of plants was successful, with a survival rate of 80% in plants that germinated from embryos cultured at 4°C for 40 days. This standardized protocol was also tested in the germination of var. Diamante x var. Florida peach hybrids, with a germination rate of 61%, proving to be a potentially efficient method for peach propagation in crop improvement programs.En esta investigación se evaluó los efectos de la temperatura, medios de cultivo y reguladores de crecimiento sobre la germinación de embriones maduros de durazno var. Diamante. La temperatura tuvo una influencia significativa sobre la germinación. Embriones cultivados a 4°C durante 40 días y luego trasladados a temperatura de 18°C tuvieron un porcentaje de germinación del 84% en comparación con los cultivados directamente a 18°C cuyo porcentaje fue del 50%. En cuanto al medio de cultivo, la tasa de germinación más elevada se obtuvo con el medio MS a la mitad de concentración de sales. Pese a que no se obtuvo diferencias significativas respecto a la adición de reguladores de crecimiento en el medio de cultivo, la adición de concentraciones altas de citoquininas (>1 mg/L) y bajas de auxinas (0.5 mg/L) dió lugar a plantas con mayor número de hojas pero con poca iniciación radicular. Para obtener un óptimo desarrollo de raíces se realizó un subcultivo de las plantas a medio MS con 3mg/L de IBA durante 16 días. La aclimatación de las plantas fue exitosa, el porcentaje de supervivencia alcanzó el 80% en plantas provenientes de embriones cultivados a 4°C durante 40 días. Finalmente, el protocolo estandarizado pudo ser utilizado en la germinación de híbridos de durazno var. Diamante x var. Florida con un porcentaje de germinación del 61%, mostrando ser un método eficiente para la propagación de durazno en programas de mejoramiento

Evaluación del nivel de estrés en leoncillos (Cebuella pygmaea) mediante la medición de cortisol en heces

The pygmy marmoset (Cebuella pygmaea) is the smallest platyrrhine primate. It lives in gallery forests in the Upper Amazon basin of Colombia, Ecuador, Peru, Bolivia and Brazil. Although all the Ecuadorian primate species are threatened by human activities, the pygmy marmoset is one of the most vulnerable due to its high specialization in diet and habitat. It is included in the list of vulnerable species in Ecuador. Anthropogenic alteration of the habitats is a stress factor for pygmy marmosets. In this context this study aimed to establish a protocol to measure cortisol concentration in feces (ng/g), as an indicator of the stress level of the individuals, and to make a preliminary comparison of the levels of cortisol and stress of three populations of pygmy marmosets in Amazonian Ecuador. Fifty two fecal samples from the wild populations of Tiputini and San Pablo, and one captive population from Puyo were analyzed. The samples analyzed had a dry weight between 0.05 and 0.07 g. The biological validation made with the fecal samples of an individual quarantined, showed that cortisol levels were higher in times closer to its death. The preliminary results suggest that the captive population from Puyo has higher levels of stress than the wild populations. These results have to be confirmed by analyzing a larger number of samples with information about the time of fecal deposition, the sex, age and previous activities of the individuals.El leoncillo (Cebuella pygmaea), es la especie más pequeña de primate platirrino. Habita en bosques de la Amazonía alta en Colombia, Ecuador, Perú, Bolivia y Brasil. Aunque todas las especies de primates en el Ecuador están amenazadas por las actividades humanas, ésta es una de las más vulnerables, debido a la especificidad de su alimentación y hábitat. C. pygmaea actualmente ha sido incluida en la lista de especies vulnerables en el Ecuador. La alteración antropogénica de los hábitats es un factor de estrés para los leoncillos. En este contexto, los objetivos de esta investigación fueron establecer un protocolo para medir el cortisol en heces, como un indicador del nivel de estrés de los individuos, y realizar una comparación preliminar de los niveles de cortisol y estrés de tres poblaciones de leoncillos en la Amazonía ecuatoriana. Se analizaron 52 muestras provenientes de las poblaciones silvestres de Tiputini y San Pablo y de una población en cautiverio en Puyo. Las muestras analizadas tuvieron pesos secos entre 0.05 y 0.07 g. La validación biológica realizada con muestras de heces de un individuo en cuarentena, evidenció que los niveles de cortisol fueron más elevados en los días más próximos a su muerte. Los resultados preliminares sugieren que la población en cautiverio de Puyo tiene niveles de estrés significativamente más altos que los de las poblaciones silvestres. Estos resultados deben ser confirmados analizando un mayor número de muestras de las que se tenga información completa sobre la hora de deposición y sobre los individuos de los que se tomaron las muestras