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O papel de HmuY de Porphyromonas gingivalis na produção de HSP60 por células mononucleares do sangue periférico de portadores de periodontite crônica
A periodontite crĂ´nica apresenta etiologia multifatorial, tendo como um dos principais
agentes etiolĂłgicos Porphyromonas gingivalis, um microrganismo que possui uma ampla
gama de fatores de virulĂŞncia, com potencial antigĂŞnico, tais como a proteĂna HmuY. O
objetivo deste estudo piloto foi avaliar os nĂveis da proteĂna de choque tĂ©rmico (HSP)
60 autóloga em células mononucleares de sangue periférico (CMSP) de pacientes com
periodontite crĂ´nica sob estĂmulo da proteĂna recombinante HmuY de Porphyromonas
gingivalis. As células de 27 voluntários (16 sem periodontite (SP) e 11 com periodontite
crĂ´nica (PC)) foram cultivadas sob estĂmulos de mitĂłgeno Pokeweed e proteĂna rHmuY e sem
estĂmulo por 48 horas. ApĂłs este perĂodo foi realizado o ensaio imunoenzimático ELISA no
sobrenadante das culturas para avaliar os nĂveis de HSP60 em CMSP. NĂŁo foram
observadas diferenças estatisticamente significantes entre os grupos PC e SP, submetidos
aos diferentes estĂmulos ou nĂŁo, embora as cĂ©lulas de indivĂduos SP cultivadas sem
estĂmulo tenham apresentado nĂveis mais elevados que as cĂ©lulas dos portadores de
periodontite. No entanto, quando foram agrupadas as amostras de todos os participantes do
estudo para avaliar as diferenças entre as três formas de cultivo, as células cultivadas em
presença do mitĂłgeno Pokeweed apresentaram nĂveis superiores de HSP60 quando
comparadas aos nĂveis daquelas cultivadas em presença de rHmuY (p=0,03). NĂŁo foram
observadas diferenças nos nĂveis de HSP60 entre as cĂ©lulas cultivadas com o
mitĂłgeno Pokeweed e as cĂ©lulas cultivadas sem estĂmulo, nem entre estas Ăşltimas e as cĂ©lulas
cultivadas com rHmuY. Os achados preliminares sugerem que o HmuY de Porphyromonas
gingivalis nĂŁo altera os nĂveis de HSP60 em CMSP humanas, porĂ©m Ă© possĂvel que a
expressão de HSP60 na célula humana exerça um papel protetor contra a periodontite
In silico analysis as a strategy to identify candidate epitopes with human IgG reactivity to study Porphyromonas gingivalis virulence factors
Abstract Porphyromonas gingivalis (Pg) is one of the main pathogens in chronic periodontitis (CP). Studies on the immunogenicity of its virulence factors may contribute to understanding the host response to infection. The present study aimed to use in silico analysis as a tool to identify epitopes from Lys-gingipain (Kgp) and neuraminidase virulence factors of the Pg ATCC 33277 strain. Protein sequences were obtained from the NCBI Protein Database and they were scanned for amino acid patterns indicative of MHC II binding using the MHC-II Binding Predictions tool from the Immune Epitope Database (IEDB). Peptides from different regions of the proteins were chemically synthesized and tested by the indirect ELISA method to verify IgG immunoreactivity in serum of subjects with CP and without periodontitis (WP). T cell epitope prediction resulted in 16 peptide sequences from Kgp and 18 peptide sequences from neuraminidase. All tested Kgp peptides exhibited IgG immunoreactivity whereas tested neuraminidase peptides presented low IgG immunoreactivity. Thus, the IgG reactivity to Kgp protein could be reaffirmed and the low IgG reactivity to Pg neuraminidase could be suggested. The novel peptide epitopes from Pg were useful to evaluate its immunoreactivity based on the IgG-mediated host response. In silico analysis was useful for preselecting epitopes for immune response studies in CP