O papel de HmuY de Porphyromonas gingivalis na produção de HSP60 por células mononucleares do sangue periférico de portadores de periodontite crônica

A periodontite crônica apresenta etiologia multifatorial, tendo como um dos principais agentes etiológicos Porphyromonas gingivalis, um microrganismo que possui uma ampla gama de fatores de virulência, com potencial antigênico, tais como a proteína HmuY. O objetivo deste estudo piloto foi avaliar os níveis da proteína de choque térmico (HSP) 60 autóloga em células mononucleares de sangue periférico (CMSP) de pacientes com periodontite crônica sob estímulo da proteína recombinante HmuY de Porphyromonas gingivalis. As células de 27 voluntários (16 sem periodontite (SP) e 11 com periodontite crônica (PC)) foram cultivadas sob estímulos de mitógeno Pokeweed e proteína rHmuY e sem estímulo por 48 horas. Após este período foi realizado o ensaio imunoenzimático ELISA no sobrenadante das culturas para avaliar os níveis de HSP60 em CMSP. Não foram observadas diferenças estatisticamente significantes entre os grupos PC e SP, submetidos aos diferentes estímulos ou não, embora as células de indivíduos SP cultivadas sem estímulo tenham apresentado níveis mais elevados que as células dos portadores de periodontite. No entanto, quando foram agrupadas as amostras de todos os participantes do estudo para avaliar as diferenças entre as três formas de cultivo, as células cultivadas em presença do mitógeno Pokeweed apresentaram níveis superiores de HSP60 quando comparadas aos níveis daquelas cultivadas em presença de rHmuY (p=0,03). Não foram observadas diferenças nos níveis de HSP60 entre as células cultivadas com o mitógeno Pokeweed e as células cultivadas sem estímulo, nem entre estas últimas e as células cultivadas com rHmuY. Os achados preliminares sugerem que o HmuY de Porphyromonas gingivalis não altera os níveis de HSP60 em CMSP humanas, porém é possível que a expressão de HSP60 na célula humana exerça um papel protetor contra a periodontite

In silico analysis as a strategy to identify candidate epitopes with human IgG reactivity to study Porphyromonas gingivalis virulence factors

Abstract Porphyromonas gingivalis (Pg) is one of the main pathogens in chronic periodontitis (CP). Studies on the immunogenicity of its virulence factors may contribute to understanding the host response to infection. The present study aimed to use in silico analysis as a tool to identify epitopes from Lys-gingipain (Kgp) and neuraminidase virulence factors of the Pg ATCC 33277 strain. Protein sequences were obtained from the NCBI Protein Database and they were scanned for amino acid patterns indicative of MHC II binding using the MHC-II Binding Predictions tool from the Immune Epitope Database (IEDB). Peptides from different regions of the proteins were chemically synthesized and tested by the indirect ELISA method to verify IgG immunoreactivity in serum of subjects with CP and without periodontitis (WP). T cell epitope prediction resulted in 16 peptide sequences from Kgp and 18 peptide sequences from neuraminidase. All tested Kgp peptides exhibited IgG immunoreactivity whereas tested neuraminidase peptides presented low IgG immunoreactivity. Thus, the IgG reactivity to Kgp protein could be reaffirmed and the low IgG reactivity to Pg neuraminidase could be suggested. The novel peptide epitopes from Pg were useful to evaluate its immunoreactivity based on the IgG-mediated host response. In silico analysis was useful for preselecting epitopes for immune response studies in CP