Mutation screening of 3’UTR and exons 1-2 of vsx1 gene by PCR-SSCP/HA and sequencing in patients with Vernal Keratoconjuctivis (VKC) in Shahrekord

Background and Objective: Vernal Keratoconjuctivis is an immune response in relation to environmental antigens, leading to inflammation of the conjunctiva. One of the presumable genetic factors in VKC is VSX1 gene. In this study, mutations in exon 1, exon 2 and 3'UTR of VSX1 gene in patients with VKC in Shahrekord were investigated by PCR-SSCP and PCR-HA. Materials and Methods: In this cross- sectional study, peripheral blood samples of 100 patients with VKC and 100 individuals with no confirmed eye disease as control group were investigated. Genomic DNA was extracted by phenol-chloroform method and then PCR was carried out. Then, SSCP and HA were performed and the samples with shifted bands were sequenced for the type of nucleotide change. Afterwards, to investigate the observed nucleotide change, RFLP method was used. Results: Our SSCP findings revealed six patients with shifted band in exons 1 and 2 and 13 patients in 3'UTR, which were sequenced for nucleotide change. Analysis of sequencing data showed a frameshift change (g. 25057561delG) in 3'UTR. There was no change in other sequences. Conclusion: The findings of this study showed that, VSX1 gene most probably has no effective role in VKC pathogenesis in the studied population. Therefore, the role of VSX1 genes in VKC pathogens needs further investigation

Genetic linkage analysis of DFNB93 locus in a group of families with autosomal recessive non-syndromic hearing loss in Chahar Mahal & Bakhtiari and Kohkiluyeh & Boyer Ahmad provinces of Iran

زمینه و هدف: ناشنوایی یک اختلال حسی، عصبی است و بیشترین اختلال موجود در هنگام تولد است. بیش از 60 موارد ناشنوایی ارثی است. انواع ژنتیکی آن به دو نوع سندرومی و غیر سندرومی تقسیم می شود که نا شنوایی غیر سندرومی مغلوب اتوزومی (ARNSHL) با بیشترین درصد (70) رخ می دهد. این مطالعه با هدف تعیین پیوستگی ژنتیکی به لوکوس DFNB93 در خانواده های مبتلا به ARNSHL انجام شد. روش بررسی: این مطالعه توصیفی آزمایشگاهی بر روی 40 شجره بزرگ مبتلا به ARNSHL دارای حداقل دو بیمار، والدین سالم و عمدتاً دارای ازدواج خویشاوندی و منفی از نظر جهش های ژن GJB2، از استان های چهارمحال و بختیاری و کهگیلویه و بویراحمد انجام گردید. سپس خانواده ها برای پیوستگی ژنتیکی به لوکوس DFNB93 با استفاده از نشانگرهای STR و روش PCR و سپس ژل پلی اکریل آمید بررسی شدند. یافته ها: از تعداد 40 خانواده، 1 خانواده (5/2) به لوکوس DFNB93 پیوستگی نشان داد. ارزش SLINK این خانواده 67/2 و LOD بیشینه دو نقطه ای 05/2 و LOD بیشینه چند نقطه ای 05/2 محاسبه شد. نتیجه گیری: بر اساس نتیجه پژوهش حاضر، این لوکوس احتمالاً نقش کمی در ایجاد ناشنوایی در جمعیت مورد مطالعه (دو استان) دارد ولی برای تعیین نقش دقیق تر این لوکوس در ایجاد ناشنوایی در جمعیت ایرانی، مطالعات بیشتری ضروری می باشد

The assessment of lentiviral vectors application for gene transformation in human dermal fibroblasts (HDFs)

چکیده: زمینه و هدف: سلول های بنیادی پرتوان القایی Induced pluripotent stem cells= iPSc))، سلول های اولیه و تمایز نیافته ای هستند که قادر به ایجاد تقریباً هر نوع سلولی در بدن می باشند. هدف از پژوهش حاضر تولید و استفاده مؤثر از وکتور لنتی ویروسی TetO-FUW-OSKM جهت انتقال ژن ها به سلول های فیبروبلاست انسانی ((HDFs= Human fibroblast cells و در نهایت ارزیابی عملکرد این وکتور بود. روش بررسی: در این مطالعه تجربی پس از جداسازی و کشت سلول های HDF، وکتور لنتی ویروسی TetO-FUW-OSKM (به عنوان پلاسمید انتقال دهنده) حاوی ژن های برنامه ریزی مجدد همراه با پلاسمیدهای PsPAX2 و PMDG2 (به عنوان پلاسمیدهای کمکی لازم برای بسته بندی ویروس) به لاین سلولی HEK-293T جهت تولید ویروس ها ترانسفکت شدند. محیط رویی سلول های HEK-293T حاوی ویروس های تولید شده پس از 48 و 72 ساعت برداشت شد و این ویروس ها جهت برنامه ریزی مجدد سلول های HDF به این سلول ها ترانس داکت گردیدند. یافته ها: نتایج این مطالعه نشان دهنده تولید موفقیت آمیز وکتور لنتی ویروسی TetO-FUW-OSKM، کارایی مؤثر روش انتقال ژن با استفاده از وکتورهای لنتی ویروسی و بیان مناسب فاکتورهای رونویسی در سلول های HDF پس از ترانس داکشن بود. نتیجه گیری: با توجه به این یافته ها می توان از وکتورهای لنتی ویروسی جهت انتقال ژن و برنامه ریزی مجدد سلول های بالغ از قبیل HDF در مطالعات بعدی و تولید سلول های iPS استفاده کرد