Ultrastructural differences between Leydig cells of horses: asses and hinnies

The ultrastructure of Leydig cells of horses, asses and hinnies was compared to show the morphological differences among them. These cells have a well developed smooth endoplasmic reticulum, indicating a normal steroidogenic activity, but in the horse, this organelle seems to be a litle more abundant. The mitochondria was round, small and numerous. In asses and hinnies a great amount of microfilaments appear mainly near the nucclei. The function of these filaments is unknown, because there is no aparent reason for these cells to have a well developed cytoskeletal since they are imobile and don't have a supporting function, except, by, the steroids precursors and intracellular organelles transport.A ultra-estrutura das células de Leydig de cavalos, jumentos e burros foi comparada com o intuito de se estudar as diferenças morfológicas existentes. Todas as células estudadas apresentam um retículo endoplasmático liso bem desenvolvido, característico das células produtoras de hormônios esteróides. No cavalo, no entanto, esta organela aparentemente se apresenta mais abundante. As mitocondrias encontradas são pequenas, redondas e numerosas. Nos jumentos e burros uma grande quantidade de microfilamentos aparece próximo ao núcleo. A função destes filamentos é ainda desconhecida pois parece não existir razão para a presença de um citoesqueleto tão desenvolvido em células intersticiais, imóveis e sem função de sustentação, exceto, talvez, a relação com o transporte de substâncias precursoras de esteróides e/ou organelas intracelulares

Células madre embrionarias: alternativa terapéutica en Medicina Veterinaria

Existe un gran interés en cuanto a la posibilidad de emplear célular madre embrionarias para el tratamiento de enfermedades. Diversas investigaciones en modelos animales han demostrado que las células madre embrionarias constituyen una herramienta potencial para el establecimiento de terapias regenerativas en tejidos lesionados. Sin embargo, estas células deben ser inducidas a diferenciación en tejidos específicos antes de ser aplicadas, para evitar la possible formación de teratomas. Este documento pretende dar a conocer algunos estudios realizados con células madre embrionarias como alternativa terapéutica en la regeneración de órganos y tejidos lesionados

Principais mecanismos envolvidos na maturação oocitária em bovinos: da oogenese a maturação in vitro

Despite the efforts made to improve the production of bovine embryos in vitro, their efficiency is still low, since only 30-40% of developed blastocysts are obtained from oocytes after in vitro maturation (IVM), fertilization and cultured embryos. Assisted reproductive technologies have a limiting impact due a lack of oocytes capable to fertilization.The comprehension of mechanism involved in oocyte maturation are crucial to establish a culture system that allows a larger number production of good quality embryos. The study of the early stages of oocyte and follicle development in vivo is important for a better understanding of the molecular pathways that regulate oogenesis, folliculogenesis and oocyte maturation. Thus the physiological biochemical and molecular mechanisms involved in maturation may contribute to the increased efficiency of in vitro embryo production. Therefore, the aim of this literature review is to understand the basic mechanisms that underlie oocyte maturation in cattle, since oocyte and follicle cells in vivo formation to its use in the in vitro environment.Apesar dos esforços realizados visando melhorar a produção de embriões bovinos in vitro, sua eficiência ainda é baixa, uma vez que apenas 30 a 40% dos blastocistos desenvolvidos são obtidos de oócitos após a maturação in vitro (MIV), fertilização e cultivo dos embriões. As tecnologias reprodutivas assistidas têm um impacto limitante devido à falta de oócitos aptos à fertilização. A compreensão dos mecanismos envolvidos na maturação oocitária é crucial para o estabelecimento de um sistema de cultivo que possibilite a produção de um maior número de embriões de boa qualidade. O estudo dos estágios iniciais do desenvolvimento oocitário e folicular in vivo é importante para um melhor entendimento das vias moleculares que regulam a oogênese, a foliculogênese e a maturação oocitária. Desta forma, os mecanismos fisiológicos, bioquímicos e moleculares envolvidos na maturação poderão contribuir com o aumento na eficiência da produção de embriões in vitro. Portanto, o objetivo desta revisão de literatura é entender os principais mecanismos que permeiam a maturação oocitária em bovinos, desde o processo de formação do oócito e das células foliculares in vivo, até a sua utilização no ambiente in vitro

Considerações a respeito do pós-parto em bovinos

The postpartum period is known as the period that begins after birth and persists until the recovery of the condition of an animal that is not pregnant. They include the release of placental membranes, the uterine involution and mechanisms such as uterine contraction and enzymatic digestion contribute to the proper execution of these processes. Its duration is variable and dependent on several factors such as body condition score (BCS), milk production, nutrition, uterine condition, among others. It has also for the establishment of new pregnancy, it is necessary the return to cyclicity through growth, maturation and ovulation of a healthy follicle and oocyte. This can be affected by the presence of the calf, breast - feeding and BCS in beef cattle and energy balance, body condition score, parity, season and disease in dairy cattle. Additionally, it is extremely important the characteristic of the uterus for restoration, reproductive physiology. Uterine diseases can affect the release of substances that may be responsible for shortening or lengthening of ovarian cycles, which can cause economic losses because of not achieving is desirable to produce a calf / cow / year.El puerperio es conocido como el periodo que se inicia después del parto y persiste hasta el restablecimiento de la condición de un animal no gestante. Comprende desde la liberación de los restos placentarios, involución uterina y mecanismos tales como contracción uterina y digestión enzimática, que contribuyen para la correcta ejecución de estos procesos. Su duración es variable y depende de varios factores, como condición corporal (CC), producción lechera, nutrición, estado del útero, entre otros. Para el restablecimiento de una nueva preñez, es necesario que ocurra el retorno del ciclo estral por medio del crecimiento, maduración y ovulación de un folículo y oocito sanos. Esto puede ser afectado por la presencia del ternero, amamantamiento y condición corporal en bovinos de corte y balance energético, condición corporal, parto, estación del año y enfermedades en bovinos de leche. Adicionalmente, es de extrema importancia la característica del útero para el restablecimiento del estado reproductivo fisiológico. Enfermedades uterinas pueden afectar la liberación de sustancias que pueden ser responsables del acortamiento o prolongación de los ciclos ovarianos, lo que puede ocasionar perdidas económicas por el hecho de no alcanzar lo deseado de producción de 1 ternero/vaca/año.O puerpério é conhecido como o período que se inicia após o parto e persiste até o restabelecimento da condição de um animal não gestante. Compreendem na liberação dos restos placentários, involução uterina e mecanismos tais como contração uterina e digestão enzimática contribuem para a correta execução desses processos. Sua duração é variável e dependente de vários fatores tais como escore de condição corporal (ECC), produção leiteira, nutrição, condição uterina, entre outros. Tem-se também que para o estabelecimento de nova prenhez, é necessário que ocorra o retorno à ciclicidade por meio do crescimento, maturação e ovulação de um folículo e oócito sadios. Tal fato pode ser afetado pela presença do bezerro, amamentação e ECC em bovinos de corte e balanço energético, escore corporal, parição, estação do ano e doenças em bovinos de leite. Adicionalmente, é de extrema importância a característica do útero para o restabelecimento do estado reprodutivo fisiológico. Doenças uterinas podem afetar na liberação de substâncias que podem ser responsáveis pelo encurtamento ou prolongamento dos ciclos ovarianos, o que pode ocasionar perdas econômicas pelo fato de não atingir-se o desejável de produção de um bezerro/vaca/ano

Considerações sobre células tronco embrionárias

The embryonic stem cells are pluripotent lines derived from inner cell mass of developing blastocysts. Because of its great plasticity, many studies have been done to evaluate the therapeutic potencial of the stem cells, and have shown very promising results. The present study has the focus to do a literature review about the isolation, cultive, characterization and therapeutic application of mammals embryonic stem cells.Las células madre embrionarias son células pluripotenciales derivadas de la masa celular interna del blastocito. Debido a su gran plasticidad, muchos estudios se han realizado para evaluar el potencial terapéutico de este tipo de células y los resultados son prometedores. En este sentido, el propósito de esta revisión es para tratar temas relacionados con el aislamiento, cultivo, caracterización y aplicación terapéutica de las células madre embrionarias de los mamíferos.As células-tronco embrionárias são células pluripotentes obtidas da massa celular interna do blastocisto. Em razão de sua grande plasticidade, muitos estudos vêm sendo realizados com o objetivo de avaliar o potencial terapêutico deste tipo celular e os resultados têm sido bastante promissores. Neste sentido, o objetivo desta revisão é abordar aspectos relacionados ao isolamento, cultivo, caracterização e aplicação terapêutica das células-tronco embrionárias de mamíferos

Aspectos bioquímicos e ultraestruturais da maturação oocitária

The oocyte maturation is a crucial and limiting step for the in vitro embryo production, since the development potential of oocytes and embryos is directly related to proper nuclear and cytoplasmic maturation. The arrest, resumption and progression of meiotic divisions as well as molecular and structural changes are fundamental for the oocyte to complete the processes of maturation and fertilization, and sustain the early stages of embryonic development. These events involve a complex interaction between second messengers, protein kinases and phosphatases, which have not yet been fully clarified. The oocyte maturation in vitro, however, differs in certain aspects from that observed in vivo. So, the elucidation of the action mechanisms of several molecules involved in regulating oocyte maturation process is essential to scientific and biotechnological progress.La maduración de los ovocitos es un paso crucial y limitante para la producción de embriones in vitro, siendo que el potencial de desarrollo de los ovocitos y embriones está directamente relacionada con la adecuada maduración nuclear y citoplasmática. El bloqueo, el reinicio y la progresión de las divisiones meióticas así como los cambios moleculares y estructurales son fundamentales para el ovocito completar el proceso de maduración, sufrir la fertilización, y mantener las primeras etapas del desarrollo embrionário. Estos eventos implican una compleja interacción entre los segundos mensajeros, las proteínas quinasas y fosfatasas, que aún no han sido totalmente aclarado. La maduración de los ovocitos in vitro, sin embargo, difiere en ciertos aspectos de lo observado in vivo. Por lo tanto, la elucidación de los mecanismos de acción de varias moléculas que participan en la regulación del proceso de maduración de los ovocitos es esencial para el progreso de la ciência y de la biotecnologia.A maturação oocitária consiste numa etapa crucial e limitante para a produção de embriões in vitro, uma vez que o potencial de desenvolvimento oocitário e embrionário está diretamente relacionado à adequada maturação citoplasmática e nuclear. O bloqueio, reinício e progressão das divisões meióticas assim como as modificações moleculares e estruturais são fundamentais para que o oócito possa finalizar o processo de maturação, sofrer a fertilização, e sustentar os estádios iniciais do desenvolvimento embrionário. Estes eventos envolvem uma complexa interação entre segundo mensageiros, proteínas quinases e fosfatases, que ainda não está totalmente esclarecida. A maturação oocitária in vitro, no entanto, difere em determinados aspectos do observado in vivo. Deste modo, o esclarecimento dos mecanismos de ação das diversas moléculas envolvidas na regulação do processo de maturação oocitária é fundamental para o progresso científico e biotecnológico

Peculiaridades da coleta de oócitos para produção in vitro de embriões ovinos

The expansion of Brazilian sheep rearing promoted the development of new biotechnologies of assisted reproduction in order to increase the production indices concomitantly with accelerated genetic progress. In this context, the in vitro production (IVP) of sheep embryos has intensified due to the possibility of optimization of the female oocytes donor and increase the number of embryos produced. Among the various factors involved in the success of this biotechnology, the cumulus-oophorus complexes (COCs) quality, characterized, mainly, by the presence of cumulus cells, is considered crucial. Thus, it is essential to increase the knowledge on the different methods of collection of COCs and their peculiarities, aiming for future biotechnological improvements.A expansão da ovinocultura brasileira impulsionou o desenvolvimento de novas biotécnicas de reprodução assistida visando ao aumento dos índices produtivos em concomitância com o acelerado progresso genético. Neste contexto, a produção in vitro de embriões (PIV) ovinos se intensificou, devido à possibilidade de otimização das fêmeas doadoras de oócitos e de incremento da quantidade de embriões produzidos. Entre os vários fatores implicados no sucesso dessa biotecnologia, a qualidade dos complexos cumulus-oophorus (COCs), caracterizada, principalmente, pela presença das células do cumulus, é considerada crucial. Deste modo, é imprescindível a ampliação do conhecimento referente aos diferentes métodos de coleta dos COCs e suas peculiaridades, visando a futuros aperfeiçoamentos biotecnológicos

Produção de embriões in vitro: estresse oxidativo e antioxidantes

The continuous and excessive production of reactive oxygen species (EROs) associated with the depletion of intracellular concentration of glutathione (GSH) are the main cause of low efficiency of in vitro embryo production (PIV) in several animal species. It is due the in vitro culture conditions and the absence of the maternal antioxidant defense system. Among the deleterious effects of oxidative stress, lipid peroxidation has been related to the development block and reduction of the oocyte and embryo viability. In this context, the supplementation of the in vitro culture media with thiol compound has been proposed in order to reduce losses resulting from oxidative stress. Thus, considering the topic relevance, this review aims to provide better understanding of the biochemical events involved in the EROs formation, lipid peroxidation and antioxidant defense system glutathione reductase/peroxidase, focusing on oocytes and embryos, and to discuss alternatives to improve the PIV efficiency.La producción continua y excesiva de especies reactivas de oxigeno (EROs) asociada con la depleción de glutatión (GSH) intracelular son las principales causas de la baja eficiencia en la producción de embriones in vitro (PIV) en varias especies animales. Esto es debido a las condiciones de cultivo in vitro y a la ausencia del sistema de defensa antioxidante materno. Entre los efectos nocivos del estrés oxidativo, la peroxidación lipídica se ha relacionado con el bloqueo del desarrollo y la reducción de la viabilidad de ovocitos y embriones. En este contexto, se ha propuesto la suplementación de los medios de cultivo in vitro con compuestos tiol con el fin de reducir las pérdidas resultantes del estrés oxidativo. Así, dada la relevancia del tema, esta revisión tiene como objetivo proporcionar una mejor compresión de los eventos bioquímicos que intervienen en la formación de las EROs, en la peroxidación lipídica y en el sistema de defensa antioxidante glutatión reductasa / peroxidasa, con enfoque en ovocitos y embriones, y discutir alternativas para mejorar la eficiencia de la PIV.A produção contínua e excessiva de espécies reativas de oxigênio (EROs) associada à depleção da concentração intracelular de glutationa (GSH) são as principais causas da baixa eficiência da produção in vitro de embriões (PIV) em diversas espécies animais. Isto se deve às condições de cultivo in vitro e à ausência do sistema de defesa antioxidante materno. Dentre os efeitos deletérios do estresse oxidativo, a peroxidação lipídica tem sido relacionada com o bloqueio do desenvolvimento e redução da viabilidade oocitária e embrionária. Neste contexto, a suplementação dos meios de cultivo in vitro com compostos tióis tem sido proposta com intuito de reduzir as perdas decorrentes do estresse oxidativo. Sendo assim, dada a relevância do tema, esta revisão visa proporcionar melhor compreensão dos eventos bioquímicos envolvidos na formação das EROs, na peroxidação lipídica e no sistema de defesa antioxidante glutationa redutase/peroxidase, com enfoque aos oócitos e embriões, e discutir alternativas para melhorar a eficiência da PIV

The effect of fetal calf serum concentrations upon the in vitro Bos taurus indicus X Bos taurus taurus crossbred embryo production and the cytoplasmic lipid accumulation

The aim was to test the supplementation of five different concentrations of fetal calf serum (FCS) upon the in vitro production (IVP) and cytoplasmic lipid accumulation in Nelore and Simmental crossbred bovine embryos. The addition of serum started on D3 of embryo culture. Nelore oocytes were submitted to in vitro maturation, in vitro fertilization with Simmental semen, and in vitro cultured. From D1 to D3 it was used the SOFaa media + 0.5% BSA without serum (Base Media). From D4 to D7 the embryos were divided into four experimental groups according to the concentration of serum that was added to the Base media: Group 0-0%: without serum; Group 0 – 2.5%: 2.5% of serum; Group 0-5%: 5% of serum; and Group 0-10%: 10% of serum. As for the Control group it was used Base Media + 2.5% of serum from D1 to D7. Statistical analysis was done with ANOVA followed by the Tukey test (P0.05) when assessing cleavage (72.74±3.18%, 84.18±0.74%, 68.46±2.35%, 75.72±1.77%, 81.07±3.38%), blastocyst formation (32.62±0.59%, 27.27±0.93%, 27.04±2.25%, 30.31±1.31%, 37.13±1.50%), development stage (5.16±1.12, 5.01±1.10, 5.06±1.02, 4.98±0.99, 5.21±1.04) and embryo quality (2.80±1.39, 2.89±1.36, 2.99±1.33, 2.78±1.42, 2.65±1.39), for the groups Control, 0-0%, 0-2.5%, 0-5% e 0-10%, respectively. However, the increase of serum concentration in the embryo culture media showed an increase of medium and large, lipid droplets. Nevertheless, for the groups with lower concentrations of serum (0-0% e 0-2.5%) the number of small lipid droplets was similar to the ones with higher concentrations (0-5% e 0-10%). We can conclude that it is possible to perform the IVP with no supplementation of serum in culture media, without producing any negative effect upon the production, development, and embryo quality.El objetivo fue estudiar la suplementación de cinco diferentes concentraciones de suero fetal bovino (SFB) en la producción in vitro (PIV) y la acumulación de lípidos citoplasmáticos en embriones bovinos obtenidos desde el cruce de Nellore con el Simmental. Ovário de matadero de vacas fueron utilizados para obtener los ovocitos y fueron madurados in vitro. Después de la fecundación in vitro con semen de un toro Simmental, los cigotos posibles se talaron y se transferirán a las placas de cultivo. De D1 a D3 fue utilizado el SOFaa + 5% de BSA con 0% de SFB. De D4 a D7 los embriones fueron divididos en cuatro grupos de acuerdo con la concentración de SFB en el medio de cultura: Grupo 0-0%: SOFaa + 5% de BSA (medio base); Grupo de 0-2,5%: medio base + 2,5% de SFB, 0-5% Grupo: medio base + 5% de SFB y Grupo 0-10%: medio base + 10% de SFB. Como control se utilizó un sistema de cultivo que contiene 2,5% de suero fetal bovino de D1 a D7. Para análisis estadística fue usado ANOVA seguido del Test de Tukey (P 0,05) y la escisión (72,74 ± 3,18%, 84,18 ± 0,74%, 68,46 ± 2,35%, 75,72 ± 1,77%, 81,07 ± 3,38%), la formación de blastocistos (32,62 ± 0,59%, 27,27 ± 0,93%, 27,04 ± 2,25%, 30,31 ± 1,31%, 37,13 ± 1,50%), la etapa de desarrollo (5,16 ± 1,12, 5,01 ± 1,10, 5,06 ± 1,02, 4,98 ± 0,99, 5,21 ± 1,04) y el grado de calidad de embriones (2,80 ± 1,39, 2,89 ± 1,36, 2,99 ± 1,33, 2,78 ± 1,42, 2,65 ± 1,39), respectivamente para el grupo de control, 0-0%, 0-2.5%, 0-5% y 0-10%. Sin embargo, al aumentar la concentración de SFB en el centro de desarrollo del embrión, se observó un aumento en la acumulación de gotitas de lípidos medianas y grandes. Sin embargo, en aquellos con menores concentraciones de suero (0-0% y 0-2,5%) el número de pequeñas gotitas de lípidos fue similar a los grupos con mayores concentraciones (0-5% y 0-10%). Se concluye que la PIV es posible sin la suplementación del medio de cultivo con suero fetal bovino, sin afectar la producción, el desarrollo y la calidad del embrión.O objetivo deste trabalho foi estudar a suplementação de cinco diferentes concentrações de soro fetal bovino (SFB), a partir do terceiro dia do cultivo embrionário, sobre a produção in vitro (PIV) e o acúmulo lipídico citoplasmático de embriões bovinos oriundos do cruzamento da raça Nelore com a raça Simental. Ovários de abatedouro de vacas Nelore foram utilizados para a obtenção dos oócitos que foram maturados in vitro. Decorrida a fertilização in vitro com o sêmen de um touro Simental, os possíveis zigotos foram desnudos e transferidos para as placas de cultivo. Do D1 ao D3 utilizou-se o meio SOFaa + 5% BSA com 0% de SFB. Do D4 ao D7 os embriões foram distribuídos em quatro grupos experimentais de acordo com a concentração de SFB adicionada ao meio de cultivo: Grupo 0-0%: SOFaa + 5% BSA (meio base), Grupo 0 – 2,5%: Meio base + 2,5% de SFB, Grupo 0-5%: Meio base + 5% de SFB e Grupo 0-10%: Meio Base acrescido de 10% de SFB. Como grupo controle foi utilizado um sistema de cultivo contendo 2,5% de SFB do D1 ao D7. Para análise estatística utilizou-se ANOVA seguido do Teste de Tukey (P0,05) quanto a clivagem (72,74±3,18%, 84,18±0,74%, 68,46±2,35%, 75,72±1,77%, 81,07±3,38%), a formação de blastocistos (32,62±0,59%, 27,27±0,93%, 27,04±2,25%, 30,31±1,31%, 37,13±1,50%), o estágio de desenvolvimento (5,16±1,12, 5,01±1,10, 5,06±1,02, 4,98±0,99, 5,21±1,04) e grau de qualidade embrionária (2,80±1,39, 2,89±1,36, 2,99±1,33, 2,78±1,42, 2,65±1,39), respectivamente para os grupos controle, 0-0%, 0-2,5%, 0-5% e 0-10%. Apesar disso, com o aumento da concentração do SFB no meio de cultivo embrionário, foi observada uma elevação no acúmulo de gotas lipídicas médias e grandes. No entanto, nos grupos com menores concentrações de soro (0-0% e 0-2.5%) o número de gotas lipídicas pequenas foi similar ao dos grupos com maiores concentrações (0-5% e 0-10%). Conclui-se que é possível a PIV sem a suplementação do meio de cultivo com SFB, não afetando a produção, o desenvolvimento e a qualidade embrionária.Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP