Investigation of the possible role of Chlamydophila abortus in reproductive failures in nrazilian herds of domestic ruminants

Chlamydophila abortus (C. abortus) infection is related to reproductive failure in domestic ruminants. Although it has not been well characterized worldwide, this pathogen has already been identified in some European countries and in the USA. In Brazil, preliminary studies have shown serological evidence of C. abortus infection in herds with low antibody prevalence. Until now, the identification of C. abortus in biological samples from females presenting reproductive failures has not been described in Brazilian herds of domestic ruminants. The aim of this study was to evaluate the presence of the C. abortus in a collection of abortions from cattle (n=85), sheep (n=12), and goats (n=8), in samples of vaginal mucus from cows (n=13), sheep (n=90), and goats (n­=20), and in semen from sheep (n=10) and goats (n=5). The specimens (n=243) were evaluated using a PCR assay developed to amplify the 16S-23S rRNA intergenic space of C. abortus. A PCR assay with an internal control, which amplifies a fragment from the ND5 gene of bovine mitochondrial DNA, was used in order to evaluate the efficiency of the DNA extraction and of the PCR reaction. All biological samples (n=243) included in this study were negative for C. abortus in the PCR assay. The internal control enabled the amplification of a product from the bovine mitochondrial ND5 gene in all cattle abortion samples (n=85). Given the serological evidence indicating the presence of C. abortus infection in Brazilian herds of domestic ruminants, and considering the wide sampling evaluated, the failure to identify C. abortus in this survey suggests that the frequency of clinical signs in infected animals may be low or even absent.A infecção pela Chlamydophila abortus (C. abortus) em ruminantes domésticos está relacionada com distúrbios reprodutivos. Apesar de ainda pouco estudada em todo o mundo, a infecção já foi identificada em alguns países europeus e também nos EUA. No Brasil, estudos preliminares demonstraram evidências sorológicas da infecção em alguns rebanhos com baixa prevalência de anticorpos. Até o momento ainda não foi possível a identificação de C. abortus a partir de material biológico proveniente de fêmeas com problemas reprodutivos em rebanhos brasileiros. O objetivo deste trabalho foi avaliar a presença da C. abortus em uma coleção de abortos bovinos (n=85), ovinos (n=12) e caprinos (n=8), em amostras de muco vaginal bovino (n=13), ovino (n=90) e caprino (n=20), e em sêmen ovino (n=10) e caprino (n=5). As amostras biológicas (n=243) foram avaliadas por meio de técnica de PCR desenvolvida para a amplificação do espaço intergênico 16S-23S RNAr da C. abortus. Um controle interno da reação, que amplifica um fragmento do gene ND5 do DNA mitocondrial de bovino, foi utilizado para a avaliação da eficiência da extração e da amplificação do DNA nas amostras provenientes de abortamento bovino. Todas as amostras biológicas (n=243) incluídas nesse estudo resultaram negativas para a C. abortus na PCR. O controle interno da reação possibilitou a amplificação de um produto do gene ND5 mitocondrial bovino em todas as amostras de aborto bovino (n=85). Apesar de evidências,,sorológicas indicarem a presença da infecção por C. abortus em rebanhos de ruminantes no Brasil, e considerando o número de amostras biológicas avaliadas, a não identificação de C. abortus nesse estudo sugere que a frequência de sinais clínicos nos animais infectados pode ser baixa ou mesmo ausente.FINEPSETIFundação AraucáriaCNP

A bovine teat papilloma specimen harboring Deltapapillomavirus (BPV-1) and Xipapillomavirus (BPV-6) representatives

The common occurrence of multiple papillomavirus infections has been shown in several studies involving the human host. However, investigations with the aim of identifying mixed papillomavirus infections in cattle have been conducted only recently. In the current work we describe a co-infection with two different bovine papillomavirus (BPV) types that was identified in a bovine teat papilloma. The skin wart was obtained from a cow belonging to a Brazilian beef herd. A PCR assay was carried out with the FAP primer pair, which amplifies a partial segment of the L1 gene (approximately 478 bp), and the amplicon was submitted to direct sequencing. Because nucleotide sequences with satisfactory quality scores were not obtained, the amplicon was cloned and further sequencing, involving ten selected clones, was performed. The sequence analysis of the cloned inserts revealed the presence of two different BPV types. BPV-1 (Deltapapillomavirus genus) was detected in six clones, while BPV-6 (Xipapillomavirus genus) was detected in four clones. This finding confirms the presence of BPV co-infection associated with cutaneous papillomatosis in cattle

Amplificação cruzada de marcadores microssatélites heterólogos em Rhamdia quelen e Leporinus elongatus

Native fish species in Brazil are an asset in fish farming, but their natural stocks have been significantly reduced in recent years. To mitigate this negative impact, studies on fish conservation are being conducted and genetic tools for the discrimination of population parameters are increasingly achieving great importance. Current analysis evaluates a set of microsatellite heterologous primers in the jundiá (Rhamdia quelen) and in the piapara (Leporinus elongatus). Samples from the caudal fin of 15 broodstock from each species were analyzed. DNA extraction was performed with NaCl protocol and the integrity of the extracted DNA was checked with agarose gel 1%. Twenty primers developed for Piaractus mesopotamicus, Colossoma macropomum, Prochilodus lineatus, Brycon opalinus and Oreochromis niloticus were evaluated. Cross amplification of four primers of the B. opalinus and P. lineatus species (BoM12, Pli43 and Pli60 in R. quelen and BoM2, Pli43 and Pli60 in L. elongatus) was assessed. Primers of P. mesopotamicus, C. macropomum and O. niloticus showed no cross amplification in the two species analyzed. Results revealed the possibility of using the four amplified heterologous primers in genetic studies for R. quelen and L. elongatus.As espécies nativas de peixes no Brasil tem alto potencial para utilização dentro da piscicultura, porém, seus estoques naturais vêm sofrendo redução nos últimos anos. Para diminuir esse impacto negativo, estudos voltados à conservação estão sendo realizados e cada vez mais, a obtenção de ferramentas genéticas que permitam a discriminação de parâmetros populacionais toma maior importância. Objetivou-se através do presente estudo avaliar um conjunto de primers microssatélites heterólogos em jundiá (Rhamdia quelen) e piapara (Leporinus elongatus). Foram analisadas amostras de nadadeira caudal de 15 reprodutores de cada espécie. A extração de DNA foi realizada utilizando o protocolo com NaCl. A integridade do DNA extraído foi checada em gel de agarose 1%. Foram avaliados 20 primers desenvolvidos para as espécies: Piaractus mesopotamicus, Colossoma macropomum, Prochilodus lineatus, Brycon opalinus e Oreochromis niloticus. Foi observada amplificação cruzada de quatro primers das espécies B. opalinus e P. lineatus (BoM12, Pli43 e Pli60 em R. quelen e BoM2, Pli43 e Pli60 em L. elongatus). Os primers de P. mesopotamicus, C. macropomum e O. niloticus não mostraram amplificação cruzada nas duas espécies analisadas. Os resultados indicaram a possibilidade de uso dos três primers heterólogos amplificados em estudos genéticos em R. quelen e L. elongatus

Genetic diversity of pacu and piapara broodstocks in restocking programs in the rivers Paraná and Paranapanema (Brazil)

O objetivo da pesquisa foi analisar a diversidade genética de estoques de Pacu (Piaractus mesopotamicus) e Piapara (Leporinus elongatus) utilizados em programas de repovoamento dos rios Paraná e Paranapanema. Foram analisados 120 exemplares (dois estoques de cada espécie) de pisciculturas das cidades de Palotina (Paraná) e da cidade de Salto Grande (São Paulo). Os 10 iniciadores produziram 96 fragmentos, dos quais 68 (70,83%) e 94 (97,92%) foram polimórficos para os estoques de P. mesopotamicus e L. elongatus, respectivamente. Foram observadas diferenças (P < 0,05) na frequência de 15 e 27 fragmentos para cada espécie, sem a presença de fragmentos exclusivos. Os valores do índice de Shannon (0,347 a 0,572) e da porcentagem de fragmentos polimórficos (57,3% a 94,8%) mostraram uma alta variabilidade genética intra-populacional para todos os estoques. Os resultados das análises de variância molecular (AMOVA) mostraram que a maior parte da variação está dentro de cada estoque (89%) e não entre os estoques. Os valores da distância (0,088 e 0,142) e identidade (0,916 e 0,868) genética demonstraram que existe similaridade entre os estoques de cada espécie, sendo corroborado pelos valores de Fst (0,1023 e 010,27) e Nm (4,18 e 4,33) que mostraram uma moderada diferenciação genética com presença de fluxo gênico. Foi observada alta variabilidade genética intra-populacional e similaridade entre os estoques de cada espécie demonstrando uma origem em comum.The genetic diversity of Piaractus mesopotamicus (pacu) and Leporinus elongatus (piapara) broodstocks used in restocking programs in the rivers Paraná and Paranapanema is analyzed. One hundred and twenty specimens (two broodstocks of each species) from fish ponds in Palotina PR Brazil and in Salto Grande SP Brazil were assessed. Ten primers produced 96 fragments, comprising 68 (70.83%) and 94 (97.92%) polymorphic fragments for P. mesopotamicus and L. elongatus broodstocks, respectively. Differences (p < 0.05) in the frequency of 15 and 27 fragments were detected for each species, without exclusive fragments. Shannon Index (0.347 - 0.572) and the percentage of polymorphic fragments (57.3% - 94.8%) revealed high intra-population genetic variability for all broodstocks. Results of molecular variance analyses (AMOVA) showed that most variations do not lie between the broodstocks but within each broodstock (89%). Genetic (0.088 and 0.142) and identity (0.916 and 0.868) distance rates demonstrated similarity between the broodstocks of each species, corroborated by Fst (0.1023 and 010.27) and Nm (4.18 and 4.33) rates, with a slight genetic difference due to genic flux. High intrapopulation genetic variability and similarity between the broodstocks of each species was also detected, proving a common ancestry

Genetic diversity of pacu and piapara broodstocks in restocking programs in the rivers Paraná and Paranapanema (Brazil) Diversidade genética de estoques de Pacu e Piapara em programas de repovoamento nos rios Paraná e Paranapanema (Brasil)

Abstract The genetic diversity of Piaractus mesopotamicus (pacu) and Leporinus elongatus (piapara) broodstocks used in restocking programs in the rivers Paraná and Paranapanema is analyzed. One hundred and twenty specimens (two broodstocks of each species) from fish ponds in Palotina PR Brazil and in Salto Grande SP Brazil were assessed. Ten primers produced 96 fragments, comprising 68 (70.83%) and 94 (97.92%) polymorphic fragments for P. mesopotamicus and L. elongatus broodstocks, respectively. Differences (p &lt;0.05) in the frequency of 15 and 27 fragments were detected for each species, without exclusive fragments. Shannon Index (0.347 -0.572) and the percentage of polymorphic fragments (57.3% -94.8%) revealed high intra-population genetic variability for all broodstocks. Results of molecular variance analyses (AMOVA) showed that most variations do not lie between the broodstocks but within each broodstock (89%). Genetic (0.088 and 0.142) and identity (0.916 and 0.868) distance rates demonstrated similarity between the broodstocks of each species, corroborated by Fst (0.1023 and 010.27) and Nm (4.18 and 4.33) rates, with a slight genetic difference due to genic flux. High intrapopulation genetic variability and similarity between the broodstocks of each species was also detected, proving a common ancestry. Resumo O objetivo da pesquisa foi analisar a diversidade genética de estoques de Pacu (Piaractus mesopotamicus) e Piapara (Leporinus elongatus) utilizados em programas de repovoamento dos rios Paraná e Paranapanema. Foram analisados 120 exemplares (dois estoques de cada espécie) de pisciculturas das cidades de Palotina (Paraná) e da cidade de Salto Grande (São Paulo). Os 10 iniciadores produziram 96 fragmentos, dos quais 68 (70,83%) e 94 (97,92%) foram polimórficos para os estoques de P. mesopotamicus e L. elongatus, respectivamente. Foram observadas diferenças (P &lt;0,05) na frequência de 15 e 27 fragmentos para cada espécie, sem a presença de fragmentos exclusivos. Os valores do índice de Shannon (0,347 a 0,572) e da porcentagem de fragmentos polimórficos (57,3% a 94,8%) mostraram uma alta variabilidade genética intra-populacional para todos os estoques. Os resultados das análises de variância molecular (AMOVA) mostraram que a maior parte da variação está dentro de cada estoque (89%) e não entre os estoques. Os valores da distância (0,088 e 0,142) e identidade (0,916 e 0,868) genética demonstraram que existe similaridade entre os estoques de cada espécie, sendo corroborado pelos valores de Fst (0,1023 e 010,27) e Nm (4,18 e 4,33) que mostraram uma moderada diferenciação genética com presença de fluxo gênico. Foi observada alta variabilidade genética intra-populacional e similaridade entre os estoques de cada espécie demonstrando uma origem em comum

Hepatitis E virus in liver and bile samples from slaughtered pigs of Brazil

The objective of this study was to detect and identify hepatitis E virus (HEV) strains in liver and bile samples from slaughtered pigs in the state of Paraná, Brazil. Liver and bile samples were collected from 118 asymptomatic adult pigs at a slaughterhouse in a major Brazilian pork production area. The samples were assayed using a nested reverse transcription-polymerase chain reaction protocol with primer sets targeting open reading frames (ORF)1 and 2 of the HEV genome. HEV RNA was detected in two (1.7%) liver samples and one (0.84%) bile sample using both primers sets. The HEV strains were classified as genotype 3b on the basis of their nucleotide sequences. These data suggest that healthy pigs may be a source of HEV infection for consumers of pig liver and slaughterhouse workers in Brazil

Multiple bovine papillomavirus infections associated with cutaneous papillomatosis in brazilian cattle herds

Cutaneous papillomatosis is a pathological condition commonly found in cattle and is characterized by the presence of benign proliferative tumors caused by bovine papillomavirus (BPV) infection. While multiple infections with human papillomavirus (HPV) are common in healthy and immunodeficient humans, studies with the aim of identifying mixed infections are still sporadic in veterinary medicine. The aim of this study is to describe the occurrence of multiple BPV infections in cattle affected by cutaneous papillomatosis. Fifteen skin warts were collected from at least two diverse anatomical regions of six bovines with papillomatosis belonging to three cattle herds from the Paraná state in Brazil. The BPV types present in the skin wart samples were determined by a PCR assay performed with the FAP primer pair for partial L1 gene amplification followed by direct sequencing or by cloning and sequencing of the inserts. Sequence analysis of the obtained amplicons allowed the identification of four characterized BPV types (BPV-1, -2, -6, and -8) and three previously described putative new BPV types (BPV/BR-UEL3, BPV/BR-UEL4, and BPV/BR-UEL5). Double infections were identified in four (A, B, D, and E) of the six animals included in this study. In this work, the strategy adopted to evaluate skin warts from diverse anatomical sites of the same animal allowed the identification of multiple infections with two or three different BPV types. The analysis of four animals belonging to a single cattle herd also showed the presence of six different viral types. These results clearly suggest that both multiple papillomaviral infection and a high viral diversity can be as frequent in cattle as in human beings.<br>A papilomatose cutânea é comumente observada nos rebanhos bovinos e caracterizada pela presença de tumores proliferativos benignos causados pela infecção pelo papilomavírus bovino (BPV). Enquanto a infecção múltipla pelo papilomavírus humano (HPV) é um achado comum tanto em seres humanos saudáveis quanto em pacientes com imunodeficiência, na medicina veterinária esses relatos ainda são escassos. O objetivo desse estudo foi descrever a ocorrência de infecções múltiplas pelo BPV em rebanhos afetados pela papilomatose cutânea. Quinze papilomas foram obtidos, de pelo menos duas regiões anatômicas diferentes, de seis bovinos com papilomatose e provenientes de três rebanhos de corte localizados no estado do Paraná, Brasil. Os tipos virais presentes nas lesões foram identificados por PCR, utilizando o par de oligonucleotídeos iniciadores FAP, seguidos de sequenciamento direto ou clonagem e novo sequenciamento dos insertos. A análise das sequências obtidas permitiu a identificação do BPV-1, -2, -6 e -8, além de supostos novos tipos (BPV/BR-UEL3, BPV/BR-UEL4, e BPV/BR-UEL5), descritos anteriormente. Infecções por dois tipos diferentes de BPV foram identificadas em quatro animais (A, B, D e E) dos seis incluídos nesse estudo. A estratégia adotada neste estudo permitiu a identificação de infecção múltipla por dois ou três diferentes tipos virais do BPV no mesmo animal. Além disso, a avaliação de quatro animais de um mesmo rebanho demonstrou a presença de seis tipos virais circulantes. Esses resultados sugerem que tanto as infecções múltiplas quanto a grande diversidade viral podem ser frequentes nos bovinos, assim como o observado nos humanos. O reconhecimento da multiplicidade e complexidade das infecções pelo BPV pode colaborar para o entendimento dos aspectos epidemiológicos, clínicos e imunológicos da papilomatose cutânea nos rebanhos bovinos