Purification of a lectin from Cratylia mollis crude extract seed by a single step PEG/phosphate aqueous two-phase system

The partitioning and purification of lectins from the crude extract of Cratylia mollis seeds (Cramoll 1,4) was investigated in aqueous two-phase systems (ATPS). A factorial design model (24) was used to evaluate the influence of polyethylene glycol (PEG) molar mass (15008000g/mol), PEG concentration (12.517.5% w/w), phosphate (1015% w/w) concentration, and pH (68) on the differential partitioning, purification factor, and yield of the lectin. Polymer and salt concentration were the most important variables affecting partition of lectin and used to find optimum purification factor by experimental BoxBehnken design together with the response surface methodology (RSM). ATPS showed best conditions composed by 13.9% PEG1500, 15.3% phosphate buffer at pH 6, which ensured purification factor of 4.70. Sodium dodecyl sulfatepolyacrylamide gel electrophoresis showed a single band of protein with 26.1kDa. Furthermore, results demonstrated a thermostable lectin presenting activity until 60°C and lost hemagglutinating activity at 80°C. According to the obtained data it can be inferred that the ATPS optimization using RSM approach can be applied for recovery and purification of lectins.We are grateful to the following bodies for the grants awarded: CAPES (Coordination for the Improvement of Level Personnel Superior); FACEPE (Pernambuco Science and Technology Foundation): Researcher's scholarship grant: BFP-0017-5.05/18 CNPq (National Council for Scientific Development and Technological) process: 427153/2016-6 and we also thank the reviewers for their valuable comments and suggestions as these helped us to improve the manuscript.info:eu-repo/semantics/publishedVersio

Efeito de scaffolds de nanofibras incorporados com antibióticos sobre biofilmes formados por bactérias presentes nos canais radiculares

O presente trabalho teve como objetivos: analisar a ação antimicrobiana de scaffolds contendo ciprofloxacina (CIP) sobre biofilme de Enterococcus faecalis (E. faecalis) (Artigo 1); Sintetizar, caracterizar e analisar a ação antimicrobiana do TAP-scaffold (Polidioxanona [PDS] + CIP, metronidazol [MET] e minociclina [MINO] ) contra biofilme de Actinomyces naeslundii (A. naeslundii) (Artigo 2); Avaliar os efeitos do TAP-scaffold contra biofilme de Porphyromonas gingivalis (P. gingivalis) (Artigo 3). Material e Métodos: Utilizando a técnica de electrospinning scaffolds foram desenvolvidos a partir de soluções de PDS puro e associadas a antibióticos para produzir CIP-scaffold e TAP-scaffold. (Artigos 1, 2 e 3). Espécimes de dentina foram inoculados com E. faecalis para formação de biofilme e expostos ao PDS (controle); PDS + CIP 25wt.% e PDS + CIP 5wt.%. A ação antimicrobiana foi avaliada por contagem das unidades formadoras de colônia (UFC / mL) (n = 10) e microscopia eletrônica de varredura (MEV) (n = 2) (Artigo 1). TAP-scaffolds foram caracterizados quanto a morfologia das fibras, propriedades mecânicas, e mecanismo de liberação do fármaco. Espécimes de dentina foram inoculados com A. naeslundii para formação de biofilme e foram expostos à TAP-scaffold, solução de TAP, PDS puro e espécimes de dentina infectada com biofilme (7 dias) sem medicação. A viabilidade bacteriana foi determinada por microscópio de varredura a laser confocal (CLSM) (Artigo 2). Espécimes de dentina inoculados com P. gingivalis foram expostos ao PDS (controle negativo), PDS + TAP 25wt.%, solução de TAP e dentinas infectadas sem tratamento (7 dias de biofilme) (n = 12). A viabilidade do biofilme foi determinada quantitativamente por (UFC/mL) e qualitativamente por MEV (Artigo 3). Resultados: A contagem das UFC/mL demonstrou máxima eliminação bacteriana promovida pelo grupo PDS + CIP 25 wt.% diferindo estatisticamente dos grupos PDS e PDS+CIP 5 wt.% (p < 0,05). A análise por MEV foi compatível com os dados obtidos por UFC/mL (Artigo 1). A caracterização das fibras, evidenciou diâmetro médio das fibras de 689 ± 312nm (PDS puro) e 718±125nm (TAP-scaffold). O TAP-scaffold demonstrou propriedades mecânicas significativamente menores que o PDS (p≤0,04040). Grande liberação de drogas nas primeiras 24 horas foi observada, destacando-se a CIP e a MET que mantiveram uma liberação mais prolongada (4 semanas) quando comparada à MINO (7 dias). Análise por CLSM demonstrou completa eliminação de bactérias viáveis expostas à solução de TAP. Por outro lado, TAP-scaffold reduziu significativamente (p < 0,05) a porcentagem de bactérias viáveis quando comparado ao grupo controle e ao PDS (Artigo 2). Para o biofilme de P.gingivalis, tanto a TAP-scaffold quanto a TAP foram capazes de eliminar completamente as bactérias viáveis, diferindo estatisticamente (p<0,055) do PDS e controle negativo (Artigo 3). Conclusões: Os resultados deste trabalho sugerem que scaffolds desenvolvidos com sistema de liberação controlada de drogas apresentam grande potencial para eliminação de biofilmes compostos por espécies bacterianas que colonizam o sistema de canais radiculares, com potencial promissor para o sucesso da regeneração endodôntica.The present study aimed to: Evaluate the antimicrobial effects of scaffolds containing ciprofloxacin (CIP) into the fibers against Enterococcus faecalis (E. faecalis) biofilm (Article 1); Synthesize, characterize, and analyse the antimicrobial action TAP-scaffold containing CIP, metronidazole (MET) and minocycline (MINO) against Actinomyces naeslundii (A. naeslundii) biofilm (Article 2); Evaluate the effects of TAP-scaffold to combat Porphyromonas gingivalis (P. gingivalis) biofilm (Article 3). Material e Methods: Scaffolds were developed from pure polidioxanone (PDS) solution alone or incorporated with antibiotics: MET, CIP and MINO (TAPscaffold and CIP-scaffold by electrospinning technique (Articles 1, 2, 3). E. faecalis solution was inoculated in dentin to induce biofilm formation that were exposed to PDS (control); PDS + CIP 25wt.% and PDS + CIP 5wt.%. The antimicrobial action were analysed by counting the colony units formation (CFU/mL) and through Scanning Electron Microscopy (SEM) (Article 1). Fiber morphology, mechanical properties, and drug release of TAP-scaffolds were investigated. Dentin specimens were inoculated with A. naeslundii for biofilm formation. The dentin specimens were exposed to TAP-mimic scaffolds, TAP solution (positive control), and pure PDS. Infected dentin (7-days biofilm) specimens were used for comparison. CLSM was performed to determine bacteria viability (Article 2). Dentin specimens were inoculated with P. gingivalis to allow biofilm formation and were exposed to the following treatments: PDS (control), PDS+25wt.%TAP, and TAP solution. Infected dentin specimens were left untreated (bacteria only). To determine the antimicrobial efficacy a colony forming unit (CFU/mL) measurement 27 and SEM analysis were performed (Article 3). Results: PDS scaffold containing CIP at 25 wt.% showed maximum bactéria (E.faecalis) elimination, differing statistically from the control (PDS) and from PDS scaffold containing CIP at 5 wt.% (p < 0.05). SEM images showed similar results when compared to CFU/mL data (Article 1). Fibers characterization displayed scaffolds with submicron mean fiber diameter. Overall, TAP-mimic scaffolds showed significantly (p ≤ 0.040) lower mechanical properties than PDS. Within the first 24 hours, a burst release of all drugs was seen. A sustained maintenance of MET and CIP release was observed over 4 weeks, but not for MINO. CLSM demonstrated complete elimination of all viable bacteria exposed to the TAP solution. Meanwhile, TAP-mimic scaffolds led to a significant (p < 0.05) reduction in the percentage of viable bacteria compared to the negative control and PDS (Article 2). Regard P.gingivalis, TAP-mimic PDS-based electrospun scaffolds and the positive control (TAP solution) led to complete bacteria elimination, differing statistically (p<0.05) from the negative control (bacteria only). No statistical differences were observed for CFU/mL data between PDS and the negative control (Article 3). Conclusions: This study suggests that scaffolds containing drug-release system present a great clinical potential to combat biofilms composed by endodontic pathogens with promising sucess for endodontic regenerative standpoint.Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES

Ação de medicações intracanal sobre biofilme microbiano localizado em áreas de reabsorção apical de dentes humanos extraídos

O objetivo desse estudo foi avaliar a ação de medicações intracanal sobre biofilme microbiano localizado em áreas de reabsorção externa de dentes humanos extraídos. Para isto, 90 raízes de dentes humanos extraídos apresentando reabsorção apical externa foram submetidas à instrumentação padronizada. Em seguida foram divididas aleatoriamente em 6 grupos (n=15). As raízes foram expostas a cepa de E. faecalis (ATCC 29212) por 10 dias para induzir a formação de biofilme microbiano nas áreas de reabsorção externa apical. Após a formação do biofilme, foram inseridas medicações intracanal de acordo com os grupos. Grupo (HC): hidróxido de cálcio com solução fisiológica; Grupo (HC-CHX): hidróxido de cálcio com Clorexidina gel 2%; Grupo (HC-GEN) hidróxido de cálcio com extrato glicólico de gengibre 20%; Grupo (CHX): clorexidina gel 2%; Grupo (GEN): extrato glicólico de gengibre; Grupo controle (CC): solução salina fisiológica. Cada grupo permaneceu com medicação no interior dos canais radiculares por um período de 15 (quinze) dias. Ao final desse período as raízes foram avaliadas através do cálculo de unidades formadoras de colônias por superfície do espécime (UFC/ml) e através de análise em Microscópio Eletrônico de Varredura (MEV). Os resultados foram analisados pelos testes estatísticos de ANOVA e Tukey. Verificouse que nenhuma medicação intracanal eliminou completamente o biofilme, mas houve redução dos microrganismos pela contagem de UFC/mL no grupo CHX, seguido pelo grupo HC. Os demais grupos apresentaram resultados semelhantes ao grupo controle. As imagens por MEV confirmaram a permanência do biofilme nas áreas de reabsorção apical. Conclui-se que as medicações intracanal não foram capazes de eliminar completamente o biofilme apical de E. faecalis in vitro(AU)The aim of this study is to evaluate the effects of intracanal medication on microbial biofilm located in apical external root resorptions of extracted human teeth. 90 roots of extracted human teeth with apical external root surface were submitted to standardized instrumentation. The roots will be randomly divided into 6 groups of 15 roots each (n=15).The roots were exposed to E.faecalis strains (ATCC 29212) for 10 days to induce microbial biofilm formation in resorptions of apical external root surface. After biofilm formation, intracanal medications were inserted in each group. Group (HC): calcium hydroxide with sterile saline solution; Group (HC-CHX): calcium hydroxide with Chlorhexidine gel 2%; Group (HCGEN): calcium hydroxide with glycolic extract of ginger 20%; Group (CHX): chlorhexidine gel 2%; Group (GEN): extract of ginger 20%; Control group (CC): sterile saline solution. Each group remained with medication in the root canal for fifteen (15) days. After this period the roots were evaluated by calculating the colony-forming units per surface of the specimen (CFU / ml) and by analysis of Scanning Electron Microscope. The results will be analyzed using statistical tests of ANOVA and Tukey. It was found that no dressing completely eliminated biofilm, but it was a decrease in microorganisms number according to CFU / mL in the CHX group, followed by HC group. The other groups showed similar results to the control group. The SEM images confirmed the permanence of biofilm in areas of apical resorption. It is concluded that the dressing is not able to completely eliminate the biofilm apical E. faecalis in vitro(AU)Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP

Tooth- and patient-related conditions may influence root canal treatment indication

Aim. To investigate predisposing aspects related to the indication for root canal treatment (RCT) at Dental Schools of Brazil. Methods. Data of 207 patients referred to endodontic treatment at undergraduate Dental Schools of Brazil were collected over a period of 8 months. Patient-related data included age, gender, first dental visit, tooth brushing frequency, number of remaining teeth, and previous endodontic treatment, and tooth-related information regarding number, type, and location in the mouth of teeth that need RCT, waiting time for the endodontic treatment, endodontic diagnosis, pain report, and dental crown condition was collected for each participant. Bivariate analysis (Chi-square test; p < 0.05) associated gender and tooth/patient-related conditions. Poisson regression analysis compared multiple endodontic need and exposure variables. Results. Patients were mainly comprised of women (65.2%), aged 18–39 years (69.6%). Previous RCT was significantly more prevalent in women when compared to men (p = 0.005). First dental visit at later moment (after 20 years of age) demonstrated 400% greater prevalence of multiple RCT demand when compared to patients that attended the dental office at age below seven years (p = 0.032). Most of the patients presented only one tooth needing RCT (80.2%), mainly premolars (44.9%). Interestingly, women underwent more RCTin maxillary teeth (p = 0.016) and significantly contributed with their report to the diagnosis process when compared to men (p = 0.014). Regarding dental crown condition, 45.4% of all teeth registered unsatisfactory restorations, which were more pronounced in female patients (p = 0.018). Unsatisfactory restorations or dental caries had 75% and 82%, respectively, less prevalence of multiple RCT indication when compared to sound dental crown (p = 0.001). Conclusions. RCT was undertaken more frequently in young female adults’ premolars presenting unsatisfactory restorations. First dental visit, number of teeth with previous endodontic treatment, tooth group, and dental crown condition were significantly associated with the necessity of multiple endodontic treatments

Tratamento alternativo para dentes traumatizados com reabsorção radicular inflamatória: 4 anos de acompanhamento

Objetivo: Este relato descreve o tratamento de um incisivo central superior previamente traumatizado, afetado pela reabsorção radicular inflamatória interna / externa. Método: Trata-se do relato de caso de um paciente com 12 anos de idade que relatou um trauma de queda um ano antes da consulta, causando fratura da coroa e luxação intrusiva no incisivo central superior direito. Os exames clínicos verificaram sensibilidade à percussão e descoloração da coroa. Radiograficamente, as áreas radiolúcidas sugeriram reabsorção radicular inflamatória (no terço da raiz cervical) e lesão periapical. Resultados: O tratamento endodôntico foi realizado, com uma pasta de hidróxido de cálcio com paramonoclorofenol canforado inserida no canal radicular por 2 meses. Quando uma barreira calcificada na área apical foi observada radiograficamente, toda a raiz foi obturada com agregado de trióxido mineral (MTA). O dente foi acompanhado por 4 anos, mostrando regressão dos sintomas, cicatrização por reabsorção e também aumento no comprimento radicular. Conclusão: O presente caso mostrou que o tratamento endodôntico associado ao MTA promoveu a remodelação óssea da área periapical e paralisou a reabsorção.</p