Hépatite C chronique et marqueurs biologiques

Aujourd'hui la prise en charge de l'hépatite C chronique repose principalement sur la ponction biopsie hépatique. Récemment, le développement de scores biologiques de fibrose, notamment le FibroTest@ et le Fibromètre®, ainsi que la mise au point d'une technique d'élastographie impulsionnelle, le Fibroscan®, apportent de nouveaux moyens diagnostiques non invasifs. L'utilisation de scores biologiques rend nécessaire la standardisation des méthodes de dosage et la validation de leur transférabilité interlaboratoire. Parmi ces scores plusieurs utilisent le dosage de l'a2-macroglobuline. Nous avons pu observer que ce paramètre utilisé seul présente pour le diagnostic de la fibrose et de l'activité nécrotico-inflammatoire une bonne valeur diagnostique. La place de ces nouvelles méthodes est en cours d'évaluation.ROUEN-BU Médecine-Pharmacie (765402102) / SudocSudocFranceF

Le chondrex

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Stress osmotique et production de cytokines proinflammatoires dans une lignée cellulaire intestinale Caco-2/TC7

L'intestin est un organe clé dans les réponses immunitaire et inflammatoire. La réponse inflammatoire intestinale, qu'elle soit locale ou dans le cadre d'une réponse systémique, peut par la production importante et non contrôlée des médiateurs de l'inflammation avoir un effet délétère, entraînant des lésions intestinales. Dans ce travail, nous avons étudié l'effet d'un stress osmotique, qu'il soit hypo- ou hyper-osmolaire, sur la production de deux cytokines proinflammatoires, l'IL-6 et l'IL-8, par les cellules de la lignée cellulaire intestinale Caco-2/TC7. Nous avons ensuite comparé l'effet inducteur du stress osmotique à celui de stimuli proinflammatoires connus et également étudié les effets potentiels de synergie ou d'additivité de tels stimuli inflammatoires. Enfin, nous avons essayé de préciser la voie de signalisation impliquée dans l'effet du stress osmotique en se focalisant sur l'IL-8. Pour cela, nous avons étudié l'implication potentielle de différentes MAPK ainsi que celle de protéine tyrosine kinases. L'ensemble des résultats montre que les cellules Caco-2/TC7 produisent de façon constitutive la chimiokine IL-8 et que la production de celle-ci est minimale en condition isoosmolaire. A l'opposé, aucune production d'IL-6 n'est détectable dans ces conditions expérimentales. Le stress osmotique, qu'il soit hypo- ou hyper-osmolaire, entraîne une augmentation de la production d'IL-8 et induit celle d'IL-6. Les résultats montrent également que la variation de l'osmolarité du milieu induit un effet stimulateur sur les productions d'IL-6 et d'IL-8, effet qui est, au moins en partie, additif à celui de l'IL-1b. Concernant le stress hypoosmolaire, l'ensemble des résultats montrent qu'une protéine kinase de la famille JNK et que la déphosphorylation d'une protéine sur un résidu tyrosyle sont impliquées dans la voie de signalisation de ce type de stress. De plus, le stress hypoosmolaire agit, au moins en partie, par activation du facteur NF-kB. Concernant le stress hyperosmolaire, aucune des trois protéines MAP Kinases étudiées (p38MAPK, JNK et p42/44MAPK) n'est impliquée dans ce type de stress. De même, la phosphorylation d'une protéine sur un résidu tyrosyle n'est pas spécifiquement impliquée dans l'effet du stress hyperosmolaire. La voie de signalisation mise en jeu lors d'un stress hyperosmolaire reste donc à identifier. En conclusion, ces résultats démontrent que le stress osmotique per se est un signal de type proinflammatoire dans les cellules Caco-2/TC7 et suggèrent qu'un osmosensor pourrait exister dans les cellules épithéliales intestinalesThe intestine play a key role in the immune and inflammatory response. Local or systemic intestinal inflammatory response could be deleterious by the uncontrolled and massive production of inflammatory mediators leading to intestinal damages. In the present study, the effect of hyper- and hypoosmotic stresses on the production of two proinflammatory cytokines, IL-6 and IL-8 were investigated in the intestinal epithelial cell line Caco-2/TC7. We also studied the potential additivity of to that induced by proinflammatory cytokines and tried to specify the signalling pathway involved in the effect of osmotic stress focusing on IL-8 production. For this purpose, different MAPK and protein tyrosine kinases pathways have been investigated. The results obtained show that Caco-2 cells constitutively produce the chemokine IL-8. IL-8 production is minimal under isoosmolar condition whereas IL-6 production is undetectable under these experimental conditions. Hyper- and hypoosmotic stresses both (i) enhance the endogenous production of IL-8 and induce that of IL-6, and (ii) reinforce cytokine production induced by IL-1ß. Regarding the hypoosmotic stress, the results show the involvement of (i) the protein c-jun-NH2-terminal kinase (JNK) and (ii) the protein tyrosine kinase. This is not the case for hyperosmolarity. The signalling for hyperosmotic stress remains still unknown. Moreover, hypoosmotic stress acts partially through activation of the transcription factor. Taken together, these results demonstrate that osmotic stress is a proinflammatory signal in Caco-2 cells and suggest that an osmosensor might specifically exist in intestinal epithelial cells.ROUEN-BU Sciences (764512102) / SudocSudocFranceF

Evaluation du BNP et du NT-proBNP comme marqueur de la dysfonction myocardique au cours du choc septique

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Argininosuccinate synthetase from the urea cycle to the citrulline-NO cycle.

International audienceArgininosuccinate synthetase (ASS, EC 6.3.4.5) catalyses the condensation of citrulline and aspartate to form argininosuccinate, the immediate precursor of arginine. First identified in the liver as the limiting enzyme of the urea cycle, ASS is now recognized as a ubiquitous enzyme in mammalian tissues. Indeed, discovery of the citrulline-NO cycle has increased interest in this enzyme that was found to represent a potential limiting step in NO synthesis. Depending on arginine utilization, location and regulation of ASS are quite different. In the liver, where arginine is hydrolyzed to form urea and ornithine, the ASS gene is highly expressed, and hormones and nutrients constitute the major regulating factors: (a) glucocorticoids, glucagon and insulin, particularly, control the expression of this gene both during development and adult life; (b) dietary protein intake stimulates ASS gene expression, with a particular efficiency of specific amino acids like glutamine. In contrast, in NO-producing cells, where arginine is the direct substrate in the NO synthesis, ASS gene is expressed at a low level and in this way, proinflammatory signals constitute the main factors of regulation of the gene expression. In most cases, regulation of ASS gene expression is exerted at a transcriptional level, but molecular mechanisms are still poorly understood

Facteurs liés à la concordance des corrections d'une épreuve de lecture critique d’article

Contexte : Une épreuve de lecture critique d'article (LCA) sera introduite en 2008 dans l'examen classant national (ECN). Les rares travaux consacrés à cette épreuve suggèrent une concordance médiocre des corrections. But : Identifier certains facteurs liés à la concordance des corrections d’une épreuve de LCA. Sujets et méthodes : 59 étudiants volontaires de DCEM 2 et DCEM 3 ont été soumis à une épreuve de LCA dans les conditions prévues pour l'ECN. Trois correcteurs ayant préparé l’épreuve (choix d’article, questions et réponses attendues selon 16 questions, grilles de correction (s), pondérations), ont corrigé chaque copie de façon indépendante, sans grille puis avec une grille. L'accord entre les 3 couples de correcteurs, avec ou sans grille, pour les 16 questions, soit 96 couples, a été mesuré par les coefficients de corrélation intraclasse (CCI). La valeur médiane du CCI pour chaque facteur (questions, grille ou non, questions ou résumé, couples de correcteurs) a été comparée aux autres CCI par le test de Mann-Whitney ; les facteurs indépendants de variations du CCI ont été déterminés par une analyse de régression multiple. Résultats : 6 questions sur 16, l’usage de la grille, et l’un des couples de correcteurs étaient liés de façon indépendante aux CCI. Conclusion : La concordance des corrections d'une épreuve de LCA semble dépendre fortement de la qualité de l’épreuve et des correcteurs ; le recours à une grille de correction pourrait représenter un facteur d’amélioration d’impact modeste de cette concordance

Reproductibilité de la correction d'une épreuve de lecture critique d'article : évaluation par une étude pilote chez 59 étudiants en médecine

Contexte : L'introduction d'une épreuve de lecture critique d'articles dans l'examen classant national en 2008 implique de former les étudiants et de mettre au point une procédure reproductible de correction. Actuellement la formation est très variable entre les différentes facultés et la reproductibilité de ce type d'épreuve est inconnue. But : Evaluer la reproductibilité de la correction d'une épreuve de lecture critique d'articles dans des conditions proches de celles de l'examen national classant. Sujets et méthodes : 59 étudiants volontaires de 2e et 3e années du deuxième cycle des études médicales ont passé une épreuve surveillée de trois heures, sur un article original en français, comportant 10 questions validées et un résumé de 250 mots au plus. Trois enseignants ayant préparé le dossier de l'épreuve ont corrigé en aveugle les questions et le résumé selon 16 items, sans grille de correction. L'accord entre les trois paires de correcteurs a été apprécié par les coefficients de corrélation intra classe (CCI). Résultats : En moyenne, l'accord entre les correcteurs était modéré ou médiocre : CCI = 0,68 (intervalle de confiance à 95 % : 0,52 - 0,80), CCI = 0,71 (0,55 - 0,81) et CCI = 0,48 ( 0,26 - 0,65) selon la paire. Cette concordance était variable suivant les items (très mauvaise pour deux questions). Elle était meilleure pour les questions que pour le résumé pour 2 des 3 paires de correcteurs. Conclusion : Cette méthode de correction de l'épreuve de lecture critique d'articles est peu reproductible. L'impréparation actuelle des étudiants et des enseignants est probablement un facteur aggravant

Identification of a novel Ca2+-stimulated S6-kinase in rat liver

Extracellular calcium addition transiently stimulated two S6 peptide kinase activities in isolated rat hepatocytes. Mono Q chromatography revealed that the activities eluting at 0.15 M NaCl and 0.18 M NaCl were stimulated 4-fold and 2-fold, respectively. The kinase stimulated by calcium was a 40000-Mr S6 peptide kinase, as demonstrated by partial purification from whole liver. The protein kinase did not crossreact with antibodies directed against the N- or C-terminal part of p70 ribosomal S6 kinase (p70(S6K)) and the C-terminal part of p90 ribosomal S6 kinase (p90(rsk)). Following digestion of 40000-Mr S6 peptide kinase with trypsin, six peptides were sequenced. There was no similarity with the sequences of p70(S6K) and p90(rsk). Moreover, the obtained sequences could not be identified in the SwissProt or EMBL-genebank databases, suggesting that 40000-Mr S6 peptide kinase probably represents a novel protein kinase