Synthesis of carbamates from amines and N-tosylhydrazones under atmospheric pressure of carbon dioxide without external base

학위논문 (석사)-- 서울대학교 대학원 : 화학부 무기화학전공, 2016. 2. 정영근.Methodology for the synthesis of carbamates via the base-promoted coupling of carbon dioxide, amines, and N-tosylhydrazones using K2CO3 as the base and the pressure of 4 MPa of carbon dioxide has published by Jiang et al. (2015). We demonstrated that this method provides the desired carbamates under just 1 atm of carbon dioxide without the addition of the base promoter. Thus, carbamates were successfully synthesized under mild reaction conditions in moderate to high yields.Introduction 3 Results and Discussion 3 Conclusion 12 Experimental Section 13 References 26 국문초록 28Maste

The role of EphA2 signaling in lipopolysaccharide-induced lung injury

의과대학/박사Purpose: Eph-Ephrin signaling mediates various cellular processes including vasculogenesis, angiogenesis, cell migration, axon guidance, fluid homeostasis and repair after injury. Although previous studies demonstrate that stimulation of EphA receptor induces increased vascular permeability and inflammatory response in lung injury, the detailed mechanisms of EphA2 signaling are unknown. The aim of this study is to evaluate the role and related signal pathways of EphA2 signaling in the lipopolysaccharide (LPS)-induced lung injury model. Materials and Methods: We studied three experimental mice groups. These were PBS + IgG (IgG instillation after PBS exposure), LPS + IgG group (IgG instillation after LPS exposure) and LPS+ EphA2 mAb group (EphA2 monoclonal antibody instillation postreatment after LPS exposure). The cell numbers and protein concentration in the bronchoalveolar lavage fluid (BALF), changes in histopathology and the expression of several signal pathway proteins including PI3K-Akt-NFkB,Src, Erk, E-cadherin and mTOR signaling were compared among three groups. Results: We report that acute LPS exposure significantly upregulated Epha2 and EphrinA1 expression. Inhibiting EphA2 receptor by intranasal EphA2 mAb instillation attenuated lung injury and reduced cell counts and protein concentration of BALF (all, P < 0.05). EphA2 mAb posttreatment downregulated the expression of PI3K 110γ, phospho-Akt, phosphor-NFkB, Erk1/Erk2, phospho-Src and phospho-S6K. In addition, inhibiting EphA2 receptor augmented the expression of E- cadherin protein related to cell-cell adhesions. Conclusion: The present data suggest that EphA2 receptor may be an unrecognized contributor modulating several signal pathways including PI3K-Akt-NFkB, Src-NFkB, E-cadherin in cell-cell adhesions and mTOR in LPS- induced lung injury. Further studies are needed to verify the potential of EphA2 receptor inhibitor as a novel therapeutic agent in LPS-induced lung injury.ope

Efficacy of inducible protein 10 as a biomarker for the diagnosis of tuberculosis.

OBJECTIVE: This study evaluated inducible protein 10 (IP-10) as a diagnostic biomarker for specific tuberculosis (TB) infection and evaluated the ability of IP-10 to distinguish between active TB and latent TB infection (LTBI). METHODS: Forty-six patients with active pulmonary TB, 22 participants with LTBI, and 32 non-TB controls were enrolled separately. We measured IP-10 in serum and in supernatants from whole blood stimulated with TB-specific antigens. RESULTS: TB antigen-dependent IP-10 secretion was significantly increased in the active TB patients and LTBI subjects compared with controls, but did not differ significantly between the active TB patients and LTBI subjects. Serum IP-10 levels were higher in active TB than in LTBI (174.9 vs. 102.7pg/ml, p=0.002). The respective rates of positive responders of TB antigen-dependent IP-10 were 97.8%, 90.9%, and 12.5% in active TB, LTBI, and non-TB controls, respectively. For serum IP-10, 87.5%, 45.5%, and 9.5% of responders were positive in the respective groups. CONCLUSIONS: The IP-10 response to TB antigen may constitute a specific biomarker for TB infection, but does not by itself distinguish between active TB and LTBI. Serum IP-10 may enhance the diagnostic performance when used in combination with another marker.ope

Prevalence and Clinical Characteristics of Pulmonary Arterial Hypertension in Human Immunodeficiency Virus-Infected Patients

Background/Aims: Human immunodeficiency virus-associated pulmonary arterial hypertension (HIV-PAH) is a complication of HIV infection. Due to improvements in HIV survival rates following the introduction of highly active antiretroviral therapy, HIV-PAH has become an important cause of HIV-related morbidity. Thus, the objective of this study was to explore the prevalence and characteristics of HIV-PAH. Methods: Ninety-two patients were enrolled in the study from March to August 2010. We investigated clinical characteristics and performed echocardiography. HIV-PAH was defined as having a mean pulmonary arterial pressure (mPAP)≥25 mmHg based on Mahan`s equation, without lung disease or heart disease. The HIV-PAH-possible group was defined as having a tricuspid regurgitation velocity (TRV) of 2.9-3.4 m/s and a pulmonary arterial systolic pressure (PASP) of 37-50 mmHg. Results: Fifteen patients (16.3%) met the criteria of HIV-PAH based on mPAP. With respect to TRV, six patients met the criteria of the HIV-PAH-possible group. Based on the criteria of mPAP, the duration of HIV infection was not different with or without HIV-PAH. HIV RNA titers and CD4 T cell counts tended to be higher in HIV-PAH patients (8,607±11 vs. 1,067±64 copies/mL, p=0.371; 471±148 vs. 499±252 cells/mm3, p=0.680, respectively). Echocardiographic indices of the right ventricle were significantly deteriorated in the HIV-PAH group as compared with the non-HIV-PAH group (TASPE: 20.52 vs. 23.2, p=0.001; Tei index: 0.42 vs. 0.39, p=0.037). In a multivariate regression analysis, HIV activity factors (HIV duration, HIV RNA titer, and CD4 cell count) were not associated with echocardiographic indices of PAH (mPAP, PASP, and pulmonary vascular resistance). Conclusions: In this study, the prevalence of HIV-PAH was comparable to that of previous studies.ope

Utility of Routine Culture for Tuberculosis from Endobronchial Ultrasound-Guided Transbronchial Needle Aspiration in a Tuberculosis Endemic Country

BACKGROUND: Endobronchial ultrasound-guided transbronchial needle aspiration (EBUS-TBNA) is a technique developed to allow mediastinal staging of lung cancer and also to evaluate intrathoracic lymphadenopathy. In a tuberculosis-endemic area, tuberculosis should be considered as an etiology of mediastinal lymphadenopathy. The aim of this study was to investigate the utility of the routine culture for tuberculosis from specimens of EBUS-TBNA. METHODS: We prospectively performed routine culture for tuberculosis from aspiration or core biopsy specimens got from 86 patients who had undergone EBUS-TBNA due to mediastinal lymphadenopathy between March 2010 and March 2011. RESULTS: A total of 135 lymph node aspiration and 118 core biopsy specimens were included in this analysis. We confirmed the malignancy in 62 (72.9%), tuberculosis in 7 (8.1%), sarcoidosis in 7 (8.1%), asperogillosis in 2 (2.3%) and pneumoconiosis in 2 (2.3%) patients. One lung cancer patient had pulmonary tuberculosis coincidentally and 5 patients had unknown lymphadenopathy. The number of positive culture for Mycobacterium tuberculsosis by EBUS-TBNA is 2 (1.5%) from 135 lymph node aspiration specimens and 2 (1.7%) from 118 core biopsy specimens. Out of eight patients confirmed with tuberculosis, only one patient had positive mycobacterial culture of aspiration specimen from EBUS-TBNA without histopathologic diagnosis. CONCLUSION: These results propose that routine culture for tuberculosis from EBUS-TBNA may not provide additional information for the diagnosis of coincident tuberculous lymphadenitis. However, if there is any possibility of tuberculous lymphadenopathy or pulmonary tuberculosis, it should be considered to perform EBUS-TBNA in patients who have negative sputum AFB smears or no sputum production.ope

인터넷 동화사이트의 현황과 멀티동화의 특성 분석

본 연구의 목적은 유아를 위한 인터넷 동화 사이트의 운영 현황을 조사하고, 사이트에 나타난 동화의 장르별 현황을 알아보며, 동화의 멀티미디어적 요소의 특성을 분석하는데 있다. 이와 같은 목적에 따라 다음과 같은 연구문제가 설정되었다. 1. 유아를 위한 인터넷 동화 사이트의 운영 현황은 어떠한가? 2. 유아를 위한 인터넷 동화 사이트에 나타난 동화의 장르별 현황은 어떠한가? 3. 유아를 위한 인터넷 동화 사이트에 나타난 동화의 멀티미디어 요소의 특성은 어떠한가? 본 연구에서는 국내에서 유아를 위해 개발된 인터넷 동화 사이트 80개를 대상으로 운영현황을 분석하였다. 인터넷 동화 사이트 상위순위 10개 사이트에 나타난 동화의 장르별 현황을 분석하기 위하여 심은희(1997)가 제시한 그림책 장르를 수정하여 사용하였다. 인터넷 동화 사이트 중에서 무작위로 4개의 동화를 추출하여 총 320권의 동화를 대상으로 멀티미디어 요소의 특성을 분석하였다. 분석을 위해 문헌조사를 통해 본 연구자가 제작한 연구도구를 사용하여 분석하였다. 자료분석은 모두 빈도와 백분율로 처리되었다. 본 연구의 결과를 요약하면 다음과 같다. 인터넷 동화 사이트는 개인, 기관, 회사로 운영되고 있었으며, 절반 이상이 회사(52.6%)에 의해 운영되었다. 또한 개설시기는 1997년부터 개설되기 시작하여 2000년까지 증가하다가 2001년부터는 그 수가 감소하기 시작하여 오늘에 이르고 있다. 사이트의 유ㆍ무료 현황은 기관과 개인이 운영하는 동화사이트는 100%가, 회사가 운영하는 동화 사이트는 22%가 무료로 운영되었고 63.4%는 유ㆍ무료, 14.6%는 유료로 운영되었다. 유료 사이트의 월 사용료는 모두 1만원 미만이었고, 유ㆍ무료 사이트의 월 사용료는 조사 대상의 반 이상이 2만원 미만이었다. 인터넷 동화사이트에 나타난 동화의 장르별 현황은 창작이 654권으로 가장 많았으며, 다음으로 전래, 우화, 종교의 순으로 나타났다. 인터넷 동화 사이트에 나타난 동화의 멀티미디어 요소의 특성을 분석한 결과는 다음과 같다. 첫째, 텍스트의 특성을 분석한 결과, 텍스트의 서체는 비교적 가독성이 높은 굴림, 바탕 등의 서체들이 많은 비율을 차지하고 있으나 서체 크기는 유아가 보기에 작은 9-14pt가 대부분이었다. 텍스트의 위치는 상단이나 하단에 가장 많이 위치하였으며, 텍스트의 분량은 스크롤바를 사용하지 않아도 되는 정도의 적당한 분량인 경우가 반 이상(64.4%)이었다. 둘째, 사운드의 특성을 본 결과, 사운드와 텍스트 사용여부에서 두 가지가 모두 사용된 경우(46.6%)가 가장 많았으나, 텍스트만 제시된 경우가 다수(40.9%)있었다. 사운드의 종류에서 음성, 음악, 음향이 모두 첨가된 경우는 24.5%이었으며, 음성이 나오는 속도에 맞추어 텍스트를 시각적으로 표현해 주는 경우가 적었다. 셋째, 이미지의 특성을 본 결과, 비트맵 방식보다는 벡터 방식이 더 많이 사용되었다. 또한 글과 그림의 관계는 글로만 이루어진 동화들(27.5%)이 가장 많았으며, 그림중심의 동화들(25.0%)이 다음으로 많이 발견되었다. 넷째, 애니메이션의 특성을 살펴본 결과 애니메이션이 사용되는 동화가 많았으며, 애니메이션의 실행방법은 선택실행이 가장 많았다. 다섯째, 아이콘의 유형은 문자 아이콘은 거의 사용되지 않았으며, 대부분 문자+이미지 아이콘(문자와 이미지가 함께 제시된 아이콘)이 사용되었다. 아이콘의 위치는 대부분 그림 하단에 위치하였으며, 피드백에 있어서는 시각적 피드백이 가장 많이 나타났다. ; This work investigated the general condition for the manegement of internet fairly tale site and analysed the character of the mutimedia elements in fairly tale. In solving the problem, several questions were presented as below. 1. How do internet tale sites are operated? 2. What s the general condition of internet tale sites in terms of ganre? 3. What s the characteristics of the multimedia elements in internet tale sites? As a result, internet tale sites, over the half, 52.6%, are controled by companies. Degree of increase for the opening of tale sites is firstly increased from 1997 to 2000, and then plunged after 2001. The sites maneged by people are 100% free and sites under companies are just 22% free. Montly fee is almost under 10,000 won. In terms of ganre, the portion of creation is biggest as 654 copy, and the next are ancestral story, fable, religious story …. The characteristics of multimedia elements in internet tale sites are as follow. . 1st, penmanships of text are mostly gulim and batang and the size of character is 9-14pt even though it s too small for children to see. 2nd, sound is presented as the percent of 46.6%. 3rd, in the image, vector method is much used than bitmap method. 4th, animation is very frequently used for the fairly tales. 5th, in the case of icon, mostly letter and image are used together. In the result of the work, several things could be suggested for the improvement of internet tale sites. 1st, the size of penmanship could be 15-22pt for the child s eye. 2nd, sound and text should be supplied as a whole. And it can make children concentrate on the contents more deeply. 3rd, bitmap image is better to children which makes watchers catch various passions. 4th, animation could be good method for children concentrating on the contents. 5th, if letter and image are integrated, it would contribute to the development of children. And that position should be located on the right and downward side for the convinient click. The purpose of this study is to investigate effectively strategy which can be applied with analyzing quantitative and qualitative characteristics of the pre-service teacher s interaction in web-based learning environment.논문개요 = iv I. 서론 = 1 A. 연구의 필요성 및 목적 = 1 B. 연구문제 = 5 II. 이론적 배경 = 6 A. 동화 = 6 1. 동화의 중요성 = 6 2. 동화의 장르 = 7 B. 인터넷 사이트에 나타나는 멀티동화 = 12 1. 멀티동화의 개념 = 12 2. 멀티동화의 장점 = 14 3. 멀티동화의 단점 = 17 C. 멀티미디어의 개념과 구성 요소 = 18 1. 멀티미디어의 개념 = 18 2. 멀티미디어 구성요소 = 19 D. 관련연구 = 35 III. 연구방법 = 38 A. 연구대상 = 38 B. 연구도구 = 39 1. 운영 현황 = 39 2. 인터넷 사이트에 제시된 동화의 장르별 분석기준 = 40 3. 인터넷 사이트에 나타난 동화의 멀티미디어 특성 분석 = 40 C. 연구절차 = 45 D. 자료분석 = 45 IV. 연구 결과 및 해석 = 46 A. 유아를 위한 인터넷 동화 사이트 현황 = 46 1. 운영자 형태 = 46 2. 개설시기 = 47 3. 유무료 현황 = 47 4. 연령 구분 현황 = 49 B. 인터넷 동화 사이트에 제시된 동화의 장르별 현황 = 50 C. 인터넷 동화 사이트에 나타난 동화의 멀티미디어 요소의 특성 = 50 1. 텍스트 = 51 2. 사운드 = 55 3. 이미지 = 57 4. 애니메이션 = 60 5. 아이콘 = 63 V. 논의 및 결론 = 67 A. 논의 = 67 B. 결론 및 제언 = 73 &amp;lt;참고문헌&amp;gt; = 78 &amp;lt;부록&amp;gt; = 84 &amp;lt;ABSTRACT&amp;gt; = 10

교회와 국가의 관계에 대한 역사적 고찰과 한국의 상황

논자는 교회와 국가의 관계에 대한 역사적 사건과 그 이론적 배경을 고찰하여 보고자 한다. 기독교 교회와 국가간의 관계는 고대 로마시대부터 어떻게 전개되어 오는가 중세에는 어떠한가 종교개혁기에는 어떠한 사상의 발전이 있는가 현대의 신학자는 양자관계에 대해 어떻게 생각하는지를 정리하여 보고자 한다. 한국교회는 그것을 예로 삼아 교회와 국가관계를 바람직한 형태로 발전시 켜야한다. 각장의 내용을 보면 Ⅰ 장에서는 연구의 목적 논문의 구조를 언급한다 Ⅱ장에서는 고대로마, 중세, 중세말기의 교회와 국가관계를 살펴본다. Ⅲ장에서는 종교개혁기의 루터, 칼빈의 견해를 기술한다. Ⅳ장에서는 교회와 국가관계에 대한 현대 신학자들의 견해를 언급한다. Ⅴ장애서는 한국에서의 관계를 살펴보는데 개신교가 들어와서 부터 세시기로 나누어서 그 관계를 고찰하여 본다. Ⅵ장은 교회의 교육적 책임에 대해 언급한다. Ⅶ장 종합적 고찰 및 결론으로 맺는다. 한국의 교회에서는 양자간의 네가지 형태가 모두 나타나지는 않는다. 한국 기독교 역사가운데 교회가 우위이었던 상황은 없었고 국가가 교회의 우위에 존재하던 상황은 일제시대에 어느정도 나타났다고 볼 수 있다. 서구에서는 교회와 국가의 관계가 여러 가지 형태로 나타나는데 한국에서는 어떠한 가를 조선말기, 일제시대, 해방이후의 세시기로 나누어서 살펴보았다. 논자가 얻을 수 있는 결론은 교회 와 국가는 대립의 관계, 우위권 쟁취의 관계가 아니어야 하고 서로의 영역에서 충실하게 임무를 다하면서 서로 영향을 끼치되 특히 교회는 국가에 대해서 존 베네트가 언급한 것처럼 사회의 정의를 위해 관심가지고 그의 간접적 영향끼침의 중요성을 인식하여 교회의 틀안에서 국가에 영향끼쳐야 한다는 것이다. 또 이런 것을 위해 교회는 교회 구성원에 대한 교육적인 책임을 가져야 한다.;Concerned about the relatioins between the church and the state, historical events and their theoretical backgrounds were inquired to. Contemplated and arranged were how the relation between the Christian church and the state has developed from the ancient Roman period, how about in the Middle .Ages, what kinds of ideological development were in the period of religious Reform, and how modern theologists think about the relation of the both. And it was thought that Korean Church has to have tier relationship with her state develope into a desirable form by making them some models of it. As for the content of each chapter, the first chapter contained the purpose arid structure of the study; the second chapter looked into the relations between the church and the state in the ancient Roman period and the Middle Ages; the third chapter described the view of Luther and Calvin in the period of Religious Reform; the fourth chapter dealt with the views of contemporary theologists upon the relationship between the church and the state; the fifth chapter inquired into the relatin between the both in Korea classified into three periods from the time of the introduction of the reformed church; the sixth chapter commented the educational responsibility of the church; and, lastly, in the seventh chapter, general survey and conclusion were conducted. In Korea church, all the four forms between the both do not appear. There was no such condition that the church was superior in power than the state in the history of Korea church; rather it may be seen that a condition the state was above the church appeared to some extent i n the period under the rule of Japanese imperialism. In the Western world, the relations between the church and the state appeared in variou forms. How about in Korea was looked into classifed by the three different periods of the last Chosen period, the period under the Japanese imperialistic rule and the period after the Emancipation. The conclusion the author could acquire is that the relation between the church and the state should riot be such one as that of autagonism or predominancy contest but, rather, the both have to play their duties faithfully with their own realms; especially, the church has to exercise her rights as John Benette mentioned, against the state within her fram of pure right with a strong interest in social righteousness, and, also, with a full recognition of her indirect influences upon it; and, also, that, for this, the church has to have an education attitude toward the members of her.목차 = ⅲ 논문개요 = ⅴ Ⅰ. 서론 = 1 A. 연구의 목적 = 1 B. 논문의 구조 = 3 Ⅱ. 교회와 국가관계에 대한 고대·중세의 견해 = 4 A. 로마제국과 교회 = 4 B. 중세봉건국가와 교회 = 5 C. 중세말기의 교회관 = 10 Ⅲ. 교회와 국가관계에 대한 종교개혁기의 견해 = 14 A. 루터의 견해 = 14 B. 칼빈의 견해 = 16 Ⅳ. 현대 신학자들의 견해 = 22 A. 존 베네트 = 22 1. 간접적 영향 = 23 2. 직접적 행동 = 24 3. 기독교인의 태도 = 25 B. 헬무트 틸리커 = 26 1. 시간을 초월한 교회 = 28 2. 시간속의 교회 = 29 Ⅴ. 한국의 교회와 국가의 관계 = 31 A. 조선 말기 = 31 B. 일제시대 = 33 C. 해방 이후 = 35 Ⅵ. 교회의 교육적 책임 = 53 Ⅶ. 종합적 고찰 및 결론 = 58 참고문헌 = 60 ABSTRACT = 6

Anticancer potential of daphnane-type diterpenes from Daphne genkwa

Natural products have played major roles in drug discovery including development of anticancer agents. In this study, daphnane-type diterpenoids were isolated from the flower of Daphne genkwa (Thymelaeaceae) by a bioassay-guided fractionation with a potential anti-proliferative activity against human lung cancer cells, and the anti-proliferative activity and the mechanisms of actions were elucidated with yuanhuadine, one of the most potent isolates from the plant extracts, in cultured human non-small lung cancer A549 cells. In chapter I, two new daphnane-type diterpene esters 5β-hydroxyresiniferonol-6α,7α-epoxy-12β-propanoxy-9,13,14-ortho-2E,4E-decadienoate (yuanhuahine) (1) and 5β-hydroxyresiniferonol-6α,7α-epoxy-12β-butanoxy-9,13,14-ortho-2E,4E-decadienoate (yuanhualine) (2) were isolated from the flowers of Daphne genkwa (Thymelaeaceae) along with three known diterpene esters, yuanhuacine (3), yuanhuadine (4), and yuanhuagine (5) by a bioassay-directed fractionation employing the cytotoxicity assay the A549 human lung cancer cells. These compounds exhibited potent anti-proliferative effects against A549 cells with the IC50 values of 0.7-53 nM. Their structures were elucidated by spectral analysis, including 1D and 2D NMR experiments. In chapter II, yuanhuadine showed potent growth inhibition and relatively strong selectivity against lung cancer cells compared to a panel of several human cancer cell lines. Comparatively, yuanhuadine was nontoxic to human normal lung epithelial cells (MRC-5). In A549 cells, yuanhuadine exhibited the growth inhibition of the cells in a time- and dose-dependent manner with an IC50 value of 0.7 nM at 72 h incubation. Flow cytometric analysis revealed that yuanhuadine (20 nM) induced cell cycle arrest at G0/G1 as well as G2/M phase in A549 cells. The cell cycle arrests were well correlated with the expression of checkpoint proteins including the upregulation of cyclin-dependent kinase inhibitor p21, and down-regulation of cyclin A, cyclin E, cyclin B, cyclin dependent kinases 2 and 4, cdc2, phosphorylation of Rb and c-myc expression. There was also suppression in phosphorylation of phosphoinositide-dependent kinase-1 (PDK1), Akt, glycogen synthase kinase-3β(GSK-3β), and signal transducers and activators of transcription 3 (STAT3). In addition, yuanhuadine inhibited the mammalian target of rapamycin (mTOR) which is downstream molecule of Akt and its downstream effector molecules, p70 S6 kinase (p70S6K) and eukaryotic initiation factor 4E binding protein 1 (4EBP1), indicating that the cancer cell growth inhibition by yuanhuadine might be in part mediated by the suppression of Akt/mTOR signaling pathway. Additionally, yuanhuadine inhibited epidermal growth factor (EGF)-induced epidermal growth factor receptor (EGFR) signaling pathway by suppression of phosphorylation of EGFR (Y1068 and Y1173) and their downstream molecules such as Akt and extracellular regulated kinase (ERK) 1/2. Yuanhuadine also abrogated hepatocyte growth factor (HGF)-induced phosphorylation of c-Met and its downstream effectors including Akt, mTOR, Stat3, and focal adhesion kinase (FAK). Yuanhuadine was shown to influence the autophagy induction related to mTOR signaling. c-Cbl gene was overexpressed in lung cancer cells such as A549, SK-MES-1, NCI-H292, and NCI-H358 compared to the MRC-5 normal epithelial cells. Especially, NCI-H358 cells (resistant to yuanhuadine) expressed c-Cbl distinctively higher than other lung cancers. In addition to lung cancer cells, in colon and breast cancer cell line, HCT-116 and T47D cells (resistant to yuanhuadine) expressed higher c-Cbl gene than HCT-15 and MDA-MB-231 cells (sensitive to yuanhuadine). The expression of c-Cbl gene was decreased after treatment with yuanhuadine in a dose-dependent manner. In addition, the growth inhibitory effects of A549 xenografts in vivo were shown by oral administration of yuanhuadine. Synergistic effects were also observed when yuanhuadine was combined with gefitinib and cisplatin. Taken together, these findings suggest that yuanhuadine might provide a novel lead candidate for therapeutic agent against human lung cancer.;본 연구에서는, 사람 폐암세포주의 세포 성장 억제 효능에 대한 활성 추적분획법을 실시하여 원화 (the flowers of Daphne genkwa)로부터 5개의 daphnane-type diterpenoids를 분리하였으며 이 중 활성이 가장 뛰어난 yuanhuadine에 대하여 암세포의 성장 저해 효능 및 작용기전을 확인하였다. 원화로부터 3개의 알려진 daphnane-type diterpene esters인 yuanhuacine (3), yuanhuadine (4), yuanhuagine (5)과 함께 yuanhuadine의 구조 유사체인 새로운 2개의 화합물 5β-hydroxyresiniferonol-6α,7α-epoxy-12β-propanoxyl-9,13,14-ortho-2E,4E-decadienoate (yuanhuahine) (1)과 5β-hydroxyresiniferonol-6α,7α-epoxy-12β-butanoxyl-9,13,14-ortho-2E,4E-decadienoate (yuanhualine) (2)이 분리되었다. 이들 화합물은 A549 세포에 대하여 0.7-53 nM의 IC50 값을 가지며 높은 세포 성장 저해 활성을 나타내었으며 화합물들의 구조는 각종 이화학적 및 분광학적 기법을 사용하여 분석하였다. Yuanhuadine은 여러 암세포주들에 대하여 암세포 성장 저해 활성을 나타냈으며 이들 중 폐암세포주들에 대하여 선택적으로 더 높은 암세포 성장 저해 활성을 보이는 것으로 확인되었다. 이와 함께 yuanhuadine은 사람 폐 정상세포주인 MRC-5 세포에 대하여 독성을 거의 나타내지 않았다. 이러한 결과를 바탕으로 사람 폐암세포주인 A549 세포에 대한 yuanhuadine의 암세포 성장 저해 활성과 이에 대한 작용기전을 살펴보았다. A549 세포에 대하여 yuanhuadine은 시간 및 농도 의존적으로 세포 성장을 저해하였으며 72 시간 처리시 0.7 nM의 IC50 값을 나타내었다. 또한 yuanhuadine은 cytostatic하며 비가역적인 세포 성장 억제 효능을 나타내는 것으로 확인되었다. FACS 분석법에 의하여 yuanhuadine의 처리에 따른 세포의 주기형태 변화를 관찰한 결과, yuanhuadine은 A549 세포의 G0/G1기 및 G2/M기의 진행 억제를 유도하는 것으로 나타났으며, 이는 cyclin dependent kinase (cdk) inhibitor 인 p21 단백질 발현의 증가와 cyclin A, cyclin E, cyclin B, cdc2, cdk2, cdk4, p-Rb 및 c-myc 단백질 발현의 감소와 관련이 있는 것으로 확인되었다. 다음으로 암세포내의 주요 세포신호전달체계인 Akt/mTOR signaling pathway에 대한 yuanhuadine의 영향을 살펴본 결과, yuanhuadine은 Akt의 upstream에 해당되는 phosphoinositide-dependent kinase-1 (PDK-1)의 활성화를 억제하였으며 Akt의 활성을 강력하게 저해하고 Akt 아래 신호전달체계에 속한 glycogen synthase kinase-3β (GSK3β), signal transducers and activators of transcription 3 (Stat3) 및 mammalian target of rapamycin (mTOR)의 활성화를 억제하였다. 그리고 mTOR의 2가지 주된 downstream인 p70 S6 kinase (p70S6K)와 eukaryotic initiation factor 4E binding protein 1 (4EBP1)의 활성화 또한 억제하였다. 이러한 결과를 바탕으로 yuanhuadine은 Akt/mTOR signaling pathway를 강력히 억제하는 것으로 생각된다. 이 Akt/mTOR는 여러 receptor tyrosine kinase (RTK) 들에 의하여 영향을 받는데 본 연구에서는 폐암에서 주된 표적으로 여겨지는 epidermal growth factor receptor (EGFR) 및 c-Met과 각각의 downstream signaling pathway에 대한 yuanhuadine의 영향을 알아보았다. 먼저 EGFR에 대하여 yuanhuadine은 epidermal growth factor (EGF)에 의하여 유도된 EGFR 및 이의 downstream effector인 Akt와 extracellular regulated kinase (ERK) 1/2의 활성화를 억제하는 것으로 나타났다. 그리고 yuanhuadine은 hepatocyte growth factor (HGF)에 의하여 유도된 c-Met의 활성화를 저해할 뿐 아니라 c-Met의 단백질 발현 자체를 감소시키는 것으로 확인되었으며 c-Met의 downstream signal에 속하는 Akt, forkhead box protein FOXO3a (FKHRL1), focal adhesion kinase (FAK), STAT3, mTOR, p70S6K, and 4EBP1의 활성화 또한 저해하는 것으로 나타났다. 이외에 최근 새로운 폐암의 지표로 제시된 c-Cbl의 발현에 대하여 확인해 본 결과 여러 폐암세포주 중 yuanhuadine에 대한 암세포 성장 저해 활성이 낮게 나타난 NCI-H358 세포에서 c-Cbl의 발현이 높은 것으로 나타났으며 이러한 경향은 대장암세포주 및 유방암 세포에서도 나타났다. 이러한 결과를 바탕으로 c-Cbl의 발현이 높은 NCI-H358세포를 siRNA 기법을 사용하여 c-Cbl의 발현을 감소시킨 뒤 yuanhuadine에 의한 암세포 성장 저해 활성을 확인해 본 결과 유의적으로 c-Cbl 발현이 감소된 세포에서 더 높은 암세포 성장 저해 활성이 나타나는 것을 관찰할 수 있었다. 이 외에 A549 및 HCT-15 세포에서 c-Cbl의 발현은 yuanhuadine에 의하여 농도 의존적으로 감소되었다. 또 다른 작용기전인 Akt/mTOR signaling과 관련이 있는 것으로 보고되고 있는 autophagy에 대한 yuanhuadine의 영향을 살펴본 결과 acridine orange 및 monodansylcadaverine (MDC) 염색법에 의하여 yuanhuadine이 autophagy를 유도함을 간접적으로 확인할 수 있었다. 이 외 in vivo에서 yuanhuadine의 경구투여에 따라 A549 xenograft의 성장 저해가 유도되었다. 그리고 A549 세포에 대하여 현재 폐암제로 사용되고 있는 gefitinib 및 cisplatin과 yuanhuadine의 combination 처리 결과 yuanhuadine은 이들 약물에 대하여 높은 synergy 효과를 나타냄을 확인할 수 있었다. 지금까지의 결과를 종합해 볼 때, yuanhuadine은 폐암에 대하여 선택적인 항암효능을 갖는 천연물 유래 항암제 개발을 위한 선도물질로서 가능성이 제시된다.Abstract = x I. Isolation and identification of new diterpenoids from the flower of Daphne genkwa = 1 A. Introduction = 1 1. Family Thymelaeaceae = 1 2. Daphne genkwa = 2 3. Daphnane-type diterpenoids = 5 B. Experimental = 11 1. Plant material = 11 2. Equipments and general experimental procedures = 11 3. Plant extraction = 11 4. Inhibitory effects of the initial extracts of D. genkwa on the proliferation of various cancer cells = 12 5. Isolation and characterization of isolates = 14 6. Inhibition of cell proliferation of A549 human lung cancer cells = 20 C. Discussion = 21 1. Identification and structure elucidation of the isolates from D. genkwa = 21 2. Inhibitory effects of isolates on the proliferation of A549 human lung cancer cells = 26 D. Summary and Conclusion = 28 II. Anticancer effects of a daphnane-type diterpenene yuanhuadine and its mechanisms of action = 29 A. Introduction = 29 1. Lung cancer = 29 2. Chemotherapy for NSCLC = 30 3. Targeted therapy for NSCLC = 32 4. Multiple signaling pathways in non-small cell lung cancer = 36 5. The purpose of this study = 39 B. Materials and Methods = 41 C. Results = 51 1. Inhibitory effect on the proliferation of various human cancer cells and normal cells = 51 2. Anti-proliferative mechanisms of yuanhuadine in A549 human lung cancer cells = 56 3. Anti-proliferation effects of the combined treatment with yuanhuadine and standard chemotherapy in A549 cells. = 91 D. Discussion = 96 E. Summary and Conclusion = 106 References = 107 Appendix = 119 국문초록 = 14

PLC-r의 활성인자인 Ahnak단백질에 대한 특성 연구

다양한 기능을 수행하는 세포는 growth factor나 hormone의 자극에 대하여 단순한 신호전달체계를 갖지 않고 세포신호전달체계사이의 의견교환 즉 &amp;quot;cross-talk&amp;quot;을 수행함으로써 세포의 신호전달 자체뿐만 아니라 신호전달의 강도 (strength)를 조절한다. 최근 neurological tissue에서는 Tau 단백질이, non-neurological tissue에서는 AHNAK 단백질이 cPLA2의 산물인 arachidonic acid (AA)가 존재하는 조건에서 PLC-γ를 활성화시키는 것이 알려짐으로써 생체내에서 cPLA2와 PLC-γ사이의 밀접한 관계 (cross-talk)가 제시되었다. 더 나아가 PLC-γ와 AHNAK 단백질은 AA가 존재하는 조건에서만 물리적으로 결합하는 것이 증명되었다. 이러한 세포내 기능을 갖는 AHNAK 단백질은 PKC에 의해 인산화 되어 세포막쪽으로 이동되는 것이 밝혀졌는데 인산화된 AHNAK이 PLC-r에는 어떠한 영향을 주는지에 대해 조사해 보았다. PKC에 의한 PLC-γ의 인산화는 PLC 활성에 negative feedback 효과를 보이는 것으로 알려져 있다. 본 논문의 실험에서는 PKC에 의하여 인산화된 AHNAK 단백질이 PLC-γ의 활성을 증가시키며, 인산화된 AHNAK이 AA 존재 하에서 PLC-γ와 더 강한 결합을 하는 것을 볼수 있었다. 또한 AHNAK에 의한 PLC-γ의 활성화를 in vivo 에서도 확인하였다. PLC-γ 가 과발현되어 있는 NIH 3T3 2.2 세포에 AHNAK을 transfection 한 후 PMA자극을 주니 AHNAK을 넣지 않은 세포에 자극을 주었을 때보다 PLC의 활성이 상대적으로 높아졌다. In vivo에서도 PKC에 의한 자극으로 AHNAK 단백질이 PLC-γ를 활성화시킴을 확인하였다. 이러한 결과들은 PLC-γ에 대한 PKC의 효과가 AHNAK을 통해 positive feedback으로 작용함을 보여주고 있다. ; Several lines of evidence suggested that phospholipase C-γ,(PLC-γ) is activated either by tau in a neuronal cell-specific microtubule-associated protein, or by AHNAK protein in non-neuronal tissues in the presence of arachidonic acid. AHNAK was initially identified by Bishop and colleagues as the product of a gene whose expression is repressed in human neuroblastomas and several other types of tumor cell lines and named AHNAK to convey its exceptional size. AHNAK was also independently isolated as a 680 kDa protein uniquely localized to the desmosomes of bovine muzzle epidermal cells and termed desmoyokin. The genomic sequence predicts a length of 5643 amino acids for AHNAK. The central region of AHNAK is comprised of approximately 30 repeated motifs. The repeated unit is 128 amino acids in length, but some of the units are less than 128 residues. The 128-residue motifs are on average approximately 80% identical to each other with respect to amino acid sequence. Examination of the amino acid sequence within the repeated unit reveals a number of recurrences of hepta- (or octa-) sequence (D/E)ΦΦΦK(A/G)P(K), where Φ represents a hydrophobic residue, Φ represents a hydrophilic residue, and other letters correspond to conventional one letter representation of amino acid residues. Two AHNAK fragments containing one and four of the repeated motifs, respectively, were expressed as glutathione S-transferase fusion proteins. Both recombinant proteins activated PLC-Υ1 at nanomolar concentrations in the presence of arachidonic acid, suggesting that an intact AHNAK molecule contains multiple sites for PLC-Υ1 activation. Concerted action of AHNAK and AA stimulated PLC-Υ1 activity. Furthermore, the AA was to promote a physical interaction between AHNAK and PLC-Υ1. Given that and AHNAK are known to be phosphoproteins, phosphorylation may play a role in regulation of their function as PLC-Υ1 activators. In keratinocytes, AHNAK was mainly in the cytoplasm when cells were kept in low Ca^2+ medium, but translocated to the plasma membranes with a concomitant increase in the degree of phosphorylation upon an increase in extracellular Ca^2+ concentrations or treatment with phorbol ester. The level of expression as well as the state of phosphorylation of the protein in several transformed cells was altered during growth and differentiation. To investigate the effect of phosphorylation of AHNAK on PLC-Υ1 activity, PKC-phosphorylated AHNAK proteins are engaged. PKC-phosphorylated AHNAK proteins more activated PLC-Υ1 activity than unphosphorylated AHNAK. To verify the function of AHNAK in vivo, we determined total IP in cells in response to PMA. Stimulation of AHNAK-transfected NIH3T3 2.2 cells with PMA resulted in 40% increase of total EP than NIH3T3 2.2 cells. Our results suggest that arachidonic acid liberated by phospholipase A2 can act as an additional trigger for PLC-Υ1 activation, constituting an alternative mechanism that is independent of tyrosine phosphorylation. Moreover, AHNAK protein can mediate positive feedback loop between PKC and PLC-Υ1 upon stimulation of PKC.논문개요 = vii I. 서론 = 1 II. 재료 및 방법 = 12 1. 재료 및 기기 = 12 2. 방법 = 12 2.1 세포 배양 = 12 2.2 AHNAK 단백질의 정제 = 13 2.3 AHNAK 단백질에 대한 항체 제조 = 13 2.4 Transformation = 13 2.5 조직에서의 단백질 분리 = 13 2.6 western blotting = 14 2.7 AHNAK 단백질의 인산화 = 15 2.8 PLC 활성 측정 = 15 2.9 세포 내의 PLC 활성 측정 = 16 2.10 High Performance Liquid Chromatography를 이용한 total IP의 분리 = 17 2.11 AHNAK과 PLC-γ의 complex 형성 확인 = 17 III. 결과 = 19 1. PLC-γ 활성 인자읜 AHNAK 단백질의 정제 = 19 2. PLC-γ 활성에 대한 AHNAK과 AA의 효과 = 23 3. AA의 존제하에서 PLC-γ1과 AHNAK의 직접적인 결합 = 23 4. PLC isozyme에 대한 AHNAK 단백질의 specificity = 23 5. Hela 세포추출물에서의 AA에 의한 PLC-γ의 활성 = 26 6. 각 조직에서의 AHNAK의 발현 정도 = 29 7. AHNAK 단백질의 인산화 = 29 8. 인산화된 AHNAK을 통한 PLC-γ의 활성화 = 29 9. AA의 존재하에서 PLC-γ와 인산화된 AHNAK 단백질의 직접적인 결합 = 32 10. In vivo에서의 AHANK 단백질에 의한 PLC-γ의 활성 = 32 IV. 고찰 = 38 참고문헌 = 43 Abstract = 4

한국인의 철도소음에 의한 수면방해의 정량적 평가를 위한 기법 연구

학위논문(석사)--서울대학교 대학원 :기계항공공학부,2006.Maste