The functional study of macrophage survival and osteoclast differentiation

The development of pluripotent hematopoietic stem cells into different cell types requires the expression of different sets of lineage-determining and lineage-specific genes. Myeloid stem cells generate progenitors of red blood cells (erythrocyte) or white blood cells (neutrophils, monocytes, dendritic cells). Monocyte/macrophages generated from hematopoietic stem cells are differentiated by macrophage colony-stimulating factor (M-CSF) that regulates the proliferation or survival of monocyte/macrophage. Osteoclasts originate from hematopoietic stem cells and are formed by the fusion of monocyte/macrophage precursor cells. Osteoclast differentiation is activated by macrophage colony-stimulating factor (M-CSF), receptor activator of nuclear factor-κB ligand (RANKL). Therefore, a detailed understanding of the role of cytokines, such as RANKL and M-CSF, will lead to novel strategies for the treatment of various diseases, including osteoporosis, osteoarthritis, rheumatoid arthritis, paget’s disease, multiple myeloma and metastatic bone tumors. Here, I investigate not only positive role of EEIG1 in RANKL-induced osteoclastogenesis but also the function of SHP1 in M-CSF-induced monocyte/macrophage proliferation. The differentiation of osteoclasts is mainly regulated by signaling pathways activated by RANK-RANKL binding and by co-stimulatory signals linked to ITAM-containing adaptors. However, how RANK and ITAM signals are integrated remains unclear. In the first part, I suggest that RANKL-induced EEIG1 gene plays an important role in osteoclastogenic signaling as an integrator between RANK to ITAM-containing immune receptors, acting through feedback regulation of NFATc1 and prolonging ITAM signaling. In the second part, I investigate that the redox-sensitive Src homology region 2 domain-containing phosphatase 1 (SHP1) is a critical regulator of M-CSF-mediated signaling in bone marrow monocyte/macrophage lineage cells (BMMs) and M-CSF-mediated ROS generation leads to SHP1 oxidation, which promotes cell proliferation through the PI3K/Akt-dependent signaling pathway.;RANK ligand (RANKL) 에 의한 신호전달은 골수에서 유래한 단핵구/포식세포로부터의 파골세포로의 분화에 필수적이다. RANK, TRAF6, NF-κB 그리고 ITAM signaling 이 파골세포 분화에 중요한 단백질임은 잘 밝혀져 있으나, RANK 와 ITAM signaling 의 연결고리에 의한 파골세포 분화 및 신호 조절 단백질에 대해서는 명확하지 않다. 본 논문 첫 번째 장 에서는 RANKL에 의해 유도되는 신규 조절 단백질 Early estrogen-inducible gene 1 (EEIG1)이 파골세포의 분화에서 어떠한 역할을 하는가를 조사하였다. 파골세포 분화 과정 동안 RANKL에 의해 증가하는 단백질들을 찾기 위해 GeneChip 방법을 수행하였고, 그 결과 EEIG1 이 RANKL에 의해 유도됨을 확인하였다. EEIG1은 파골세포 분화에 NFATc1의 발현을 증가시킴으로써 긍정적 조절인자로 작용하는 것을 확인하였고, 이는 EEIG1 의 N-turminus와 RANK의 C-turminus의 결합을 통해 유도되는 현상임을 발견하였다. 또한 EEIG1은 ITAM signaling에 관계된 단백질 들과도 결합함을 통해 ITAM signaling에서도 중요한 역할을 함을 알게 되었고, 이러한 결과들은 EEIG1이 RANK 와 ITAM signaling 의 연결 인자로 파골세포의 분화를 조절함을 제시한다. Macrophage colony-stimulating factor (M-CSF) 는 골수에서 유래한 대식세포 (macrophage)의 생존에 필수인자이다. 대식세포에 M-CSF 처리는 M-CSF receptor (c-fms) 와 NADPH oxidase (Nox) 를 경유하는 신호전달 경로를 통해 일시적으로 세포내의 활성산소종을 증가시킨다. 두 번째 장에서는 M-CSF에 의해 유도된 활성산소종이 Src homology 2 (SH2) domain-containing tyrosine phosphatases (SHP1)을 억제하여 대식세포의 생존에 어떻게 관여하는지에 대하여 조사하였다. M-CSF 에 의해 유도되는 신호전달 체계와 활성산소종에 의해 유도되는 신호전달 체계가 유사함을 통해 연관성을 찾고, M-CSF에 의해 활성산소종이 발생됨을 확인하였다. M-CSF에 의해 유도된 활성산소종은 특이적으로 SHP1의 cysteine 잔기에 산화(oxidation)를 일으키어 SHP1의 기능을 억제하는 효과를 가져왔다. SHP1의 과 발현 이나 SHP1의 결여에서 M-CSF에 의한 PI3K 와 Akt 의 인산화 가 조절됨을 발현하였다. PI3K 와 Akt 의 인산화는 세포의 생존에 관여하는 단백질로, SHP1의 활성산소종에 의한 억제가 M-CSF에 의한 세포 생존에 필요한 인자일 것이라 추측하여 세포 생존과 증식 실험을 한 결과 SHP1의 과 발현 이나 SHP1의 결여에서 세포의 생존과 증식이 Cyclin D 단백질의 조절에 의해 유지 되는 것을 확인하였다. 이러한 결과들은 M-CSF에 의해 유도된 활성산소종이 SHP1을 억제함으로 대식세포의 생존을 유지함을 제시한다.PART Ⅰ1 ABSTRACT 2 INTRODUCTION 3 MATERIALS & METHODS 10 Isolation of bone marrow monocytes/macrophages and cell line 10 Reagents and plasmids 10 GeneChip analysis 11 Reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR) 11 Immunostaining 12 Retroviral gene transduction 12 In vitro osteoclastogenesis 12 Real-time quantitative PCR 13 GST pull down assay 13 RAW264.7 cells with stable expression of EEIG1 shRNA 14 Cell stimulation and analysis 14 Peptide synthesis and in vitro transduction of peptides 14 Ca2+ measurements 15 RANKL-induced bone destruction 15 Statistics 16 RESULTS 17 EEIG1 expression was gradually increased during RANKL-induced osteoclastogenesis 17 EEIG1 positively regulates RANKL-induced osteoclast differentiation 20 EEIG1 interacts with the RANK receptor under RANKL stimulation 23 The C-terminal region of RANK interacts with EEIG1 25 The N-terminal region of EEIG was required for interaction with RANK 30 EEIG1 forms RANK receptor complex, RANK- PLC2-GAB2 35 EEIG1 interacts with the ITAM-associated proteins, Btk and Tec, but not with syk 36 EEIG1 regulates PLC2 activation and Ca2+ oscillation by RANKL stimulation 40 EE1 peptide inhibits the RANKL-induced bone loss in vivo 43 EEIG1 is expressed via NFATc1 45 DISCUSSION 48 PART Ⅱ 52 ABSTRACT 53 INTRODUCTION 54 MATERIALS & METHODS 58 Cell culture 58 Plasmids and reagents 58 Cell stimulation and analysis 58 Assay of intracellular ROS 59 Biotinylation for detection of oxidized thiols in SHP1 59 Retroviral infection 60 RNA interference 60 Cell proliferation assay 61 Statistics 61 RESULTS 62 Exogenous H2O2 stimulates phosphorylation of c-Fms receptor 62 DPI blocks M-CSF-induced ROS production and phosphorylation of c-Fms, Gab 2 or Akt 65 DPI reduces M-CSF-induced cell proliferation 68 SHP1 is oxidized by M-CSF-induced ROS 70 SHP1 selectively regulates M-CSF-induced activation of PI3K/Akt, but not MAP kinases 72 SHP1 regulates M-CSF-induced monocyte/macrophage proliferation 76 DISCUSSION 80 REFERENCES 84 국문초록 94 ACKNOWLEDGEMENTS 9

Regulation of osteoclast differentiation by histone deacetylase 1

Osteoclasts (OCs) are multinucleated cells that resorb bone and are essential for maintaining bone homeostasis together with osteoblasts. Regulation of osteoclast differentiation is central to the understanding of the pathogenesis and treatment of disease such as osteoporosis. Tumor necrosis factor-related activation induced cytokine (TRANCE) is the essential signal required both in vitro and in vivo for full osteoclast differentiation in the presence of the permissive factor macrophage colony stimulating factor (M-CSF). I identified that histone deacetylase1 (HDAC1), a member of the classⅠHDACs, is an induced protein following TRANCE stimulation by using 2-dimensional gel electrophoresis (2-DE) and mass spectrophotometry. The expression level of HDAC1 protein increased continuously during TRANCE-induced differentiation of BMMs to osteoclasts. Specific HDAC1 inhibitors, TSA and NaB or knock-down of HDAC1 by RNA interference (RNAi) inhibited TRANCE-induced osteoclastogenesis. Chromatin immunoprecipitation (ChIP) of TRANCE-stimulated BMMs, reveals HDAC1 occupancy at differentiation gene promoters including NFATc1 and TRAP. Thus HDAC1 may act as a positive regulator for regulating terminal differentiation of osteoclasts.;파골세포 (osteoclast) 는 우리 몸에서 유일하게 뼈를 분해하는 다핵세포 (multinucleated cell) 로 뼈를 생성하는 조골세포 (osteoblast)와 함께 뼈의 항상성 (homeostasis) 을 유지한다. 파골세포는 TRANCE (tumor-necrosis factor related activation induced cytokine) 자극에 의해 그 전구체인 대식세포 (macrophage) 로부터 분화한다. 이 분화 과정을 우리가 이해할 수 있다면 골다공증 (Osteoporosis) 의 병리학적 연구에 큰 기여를 할 수 있게 된다. TRANCE 신호에 의한 분화 과정중에 많은 단백질들의 변화가 일어나게 되는데 이 들 중 하나인 Histone deacetylase1 (HDAC1) 을 Two-dimensional gel electrophoresis (2-DE) and mass spectrophotometry 방법을 통하여 찾게 되었다. HDAC1은 처음 효모 전사조절 인자인 Rpd3와 유사성을 가짐으로 발견되었고 주로 전사 조절 인자로 알려져 있다. 특히 전사 억제인자로 세포주기, 세포사멸, 세포분화억제 등에 영향을 줄 수 있는 단백질로 알려져 있다. 여기서 HDAC1의 파골세포 분화 조절을 알기 위해 우선 골수로부터 얻은 대식 세포에서 HDAC1 단백질의 양이 TRANCE자극에 의해 증가됨을 확인하였다. 그리고 이 단백질의 구체적인 기능 규명을 위해 HDAC1의 억제제와 HDAC1 유전자 발현 억제 (RNA interference, RNA간섭) 방법을 이용하여 파골 세포로의 분화가 억제되는 것을 확인 하였다. 따라서 HDAC1 은 대식세포에서 파골 세포로의 분화 유도 인자 (positive regulator) 로 작용함을 알게 되었다. 이 단백질의 기능과 관련하여 Histone의 아세틸화를 관찰해 보았는데 HDAC1 유전자 발현 억제에 의해서 Histone의 아세틸화가 증가함을 확인하였다. 그리고 이들이 파골세포 분화에 직접적으로 연관 되었는지 알기 위해 파골세포 분화에 표본 단백질로 알려진 NFATc1 과 TRAP의 유전자 프로모터 (prmoter) 부위의 아세틸화를 염색체 면역침전 (Chromatin immunoprecipitation) 방법으로 확인하였다. 그 결과 NFATc1 과 TRAP 프로모터 부위의 아세틸화가 증가한 것을 확인 할 수 있었다. 또한 이 프로모터 부위와 HDAC1의 직접적인 결합관계를 염색체 면역침전을 통해 확인하였다. HDAC1 유전자 발현 억제에 의해서 NFATc1 과 TRAP 프로모터 부위와 HDAC1의 결합이 관찰되지 않았으므로 파골세포 분화에 직접적인 영향을 주는 단백질의 유전자 프로모터 부위와 HDAC1의 결합관계가 직접적으로 연결되어 있음을 알 수 있었다. 따라서 HDAC1이 파골세포 분화에 있어서 분화조절 인자들과 밀접한 관계를 가지고 있으며, HDAC1의 발현 여부에 따라 분화가 조절됨을 통하여 HDAC1은 파골세포 분화에 중요한 유도인자임을 알게 되었다. 본 연구가 기존의 밝혀진 HDAC1의 분화억제 작용 결과와 상반되는 결론을 안고 있지만 이 실험의 결과들과 좀 더 심도 깊은 실험들을 종합해서 HDAC1의 파골세포 분화 유도에 대한 확실 한 증거가 될 수 있을 것으로 확신한다. 그리고 파골세포 분화에 있어서 HDAC1의 기능을 규명하게 되면 골다공증 유발 원인을 알고 제거할 수 있음으로 임상적으로 치료제 개발에 도움이 될 수 있을 것으로 확신한다.Contents = ⅰ Abstract = ⅲ Ⅰ. TRODUCTION = 1 Ⅱ. MATERIALS AND METHODS = 4 Cell culture = 4 Two-dimensional gel electrophoresis (2-DE) and mass spectrophotometry = 5 RNAi construction and retroviral infection system = 6 Immunoblotting = 7 TRAP (tartrate-resistant acid phosphatase) staining = 8 Histone isolation = 8 Chromatin immunoprecipitation (ChIP) assay = 9 Ⅲ. RESULTS = 12 Identification of HDAC1 in osteoclasts induced by TRANCE = 12 Expression of HDAC1 during osteoclast differentiation = 12 Suppression of osteoclast differentiation by HDAC inhibitors = 18 Inhibition of osteoclastogenesis by HDAC1 RNA interference = 21 Increase of histone acetylation level by knock-down of HDAC1 = 24 Effects of HDAC1 on osteoclast differentiation-related gene promoters = 25 Ⅳ. DISCUSSION = 32 Ⅵ. REFERENCES = 35 Ⅶ. 논문개요 = 4

GnRH 맥동 발진기의 생체 리듬에 관한 연구

학위논문 (박사)-- 서울대학교 대학원 : 생명과학부, 2013. 2 . 김경진.최근 십여 년 간의 많은 연구로 생명체에 내재적인 일주기 리듬을 조절하는 분자 진자의 정체가 상당 부분 밝혀졌다. 그럼에도 불구하고 아일주기 리듬(ultradian rhythm)의 분자세포생물학적 정체에 대해서는 거의 연구된 바 없다. 따라서 본 연구는 아일주기 생체리듬의 대표적 사례로서 생식소 자극호르몬 방출 호르몬의 맥동 발진기(gonadotropin-releasing hormone (GnRH) pulse generator)를 연구하고자 한다. 1970년대 이래 GnRH 호르몬이 약 한 시간의 주기로 분비됨이 알려졌음에도 불구하고, 아직까지 GnRH 맥동 발진기의 기작은 규명된 바 없다. 본 연구의 제 1장에서는 GnRH 유전자 발현의 역동성이라는 관점에서 GnRH 맥동 발진기의 아일주기 리듬에 접근하고자 한다. 이를 위해 갓난 GnRHp-dsLuc 유전자 조작 생쥐의 시상하부 전시각 영역(preoptic area, POA)을 절편 배양하고, 이를 이용하여 단일 신경세포 수준에서 GnRH 유전자 발현을 실시간으로 관측하였다. 나아가 최근 GnRH 뉴런의 강력한 조절자로 알려진 kisspeptin에 의한 조절에 강조점을 두었다. 본 연구의 제 2장에서는 일주기 진자와 아일주기 리듬간의 연결고리를 찾고자, 분자 생체 시계의 문제가 GnRH 맥동 발진기에 미치는 영향에 주목하였다. 이를 위해 생체 시계의 핵심 전사 인자인 Bmal1이 유전적으로 결핍된 유전자 적중 생쥐로부터 얻은 GnRH 뉴런에서 맥동성을 연구하였다. 1. 제 1장에서는 GnRH 유전자 발현의 역동성을 그의 분비 패턴과 더불어 연구하였다. GnRH 프로모터 활성과 분비를 동시에 관측하기 위해 갓난 GnRHp-dsLuc 생쥐에서 POA 절편 배양을 마련하였다. 실시간 생체인광 영상 실험을 통해 기저 상태에서 GnRH 프로모터 활성이 약 10시간 주기의 아일주기 리듬을 가짐을 알게 되었다. 전체 GnRH 뉴런군에서 동기화 정도는, 비록 GnRH 분비와는 부분적으로만 연관되나, 생체 내에서 GnRH 맥동주기와 비교적 유사한 약 2시간 정도의 간격을 보였다. GnRH 뉴런을 강하게 자극하는 것으로 알려진 kisspeptin을 반복적으로 처리하였을 때에는 GnRH 프로모터 활성이 매 kisspeptin 처리에 따라 일시적으로 증가하며 맥동적 GnRH 분비 또한 크게 강화되었다. 상기의 결과들을 통해 맥동적인 kisspeptin 자극이 GnRH 전사와 분비의 시간적 패턴을 연관시킴으로써 GnRH 맥동 발진기의 조절기 역할을 수행할 것으로 사료된다. 2. 제 2장에서는 일주기 리듬과 아일주기 리듬간의 위계적인 상호작용을 연구하였다. 일주기 분자기구가 결여된 모델에서 GnRH 맥동성을 연구하고자 Bmal1 유전자 적중 생쥐로부터 POA 절편 배양을 마련하였다. Bmal1 유전자가 결여된 POA 절편 배양은 GnRH 뉴런의 수라든지 GnRH 호르몬의 함량에 있어 자연형 유래의 POA 절편 배양과 큰 차이를 보이지 않았다. GnRH 발현의 자발적인 아일주기 리듬은 Bmal1 유전자가 없이도 유지되었으나, kisspeptin에 의해 유도된 맥동성은 특히 그 분비 수준에 있어 상당한 감쇠를 보였다. 한 편 Bmal1 결여 배양에 지속적인 kisspeptin 처리시 자연형 수준의 반응을 보였는데, 이는 주기적 kisspeptin 자극에 의한 GnRH 맥동성 감쇠가 수용체 혹은 그 하위 단계의 단순한 반응성 감소에 기인하지 않음을 시사한다. 종합해 보건대, 세포 일주기 시계는 GnRH 뉴런군의 동기화뿐 아니라 GnRH 펩타이드의 가공, 저장 혹은 분비 과정을 매개함으로써 아일주기 리듬 형성에 기여하는 것으로 사료된다.Extensive studies over the last decade have identified the molecular circadian clockwork controlling intrinsic daily rhythms. Nonetheless, the molecular cellular mechanism underlying ultradian rhythm remains largely unknown. Therefore, I intended to focus on gonadotropin-releasing hormone (GnRH) pulse generator driving episodic GnRH secretion with approximately one-to-two-hour interval, a classic example of ultradian rhythm. In spite of its discovery in the early 1970s, the mechanism for the GnRH pulse generator still remains elusive. In Chapter 1, I aimed to decipher the ultradian rhythm of GnRH pulse generator in the view of dynamicity in GnRH gene expression. For this purpose, I cultured preoptic area (POA) GnRH neurons derived from neonatal transgenic mouse harboring a GnRH promoter-driven destabilized luciferase construct (GnRHp-dsLuc). Furthermore, the regulation of GnRH pulsatility by kisspeptin, a strong activator of GnRH neuron, was explored. In Chapter 2, I investigate whether a defective circadian clock influences the GnRH pulse generator in order to elucidate a possible link between the circadian oscillator and ultradian rhythm. For this purpose, pulsatility of GnRH neurons derived from knockout mouse lacking Bmal1, a key transcription factor of core clock machinery, was studied. 1. In Chapter 1, I investigated the temporal dynamics of GnRH gene transcription with its secretion. For this purpose, I obtained hypothalamic POA slices derived from neonatal GnRHp-dsLuc transgenic mouse. Real-time bioluminescence imaging revealed that GnRH promoter activities show a pattern of ultradian oscillation with 10-hr period under the basal condition, which is relatively longer than the period of GnRH pulse generator in vivo. GnRH neuronal population stochastically synchronized at an approximately 2-hr interval and was only partially associated with pulsatile GnRH secretion. Intermittent application of kisspeptin, a strong activator of GnRH neuron, markedly induced transient increases in promoter activity with robust reinforcement of the pulsatile secretion of GnRH which responded to each kisspeptin pulses. Pharmacological manipulation revealed that newly synthesized proteins may be required to maintain pulsatile secretion of GnRH and that retrograde signaling may exert an effect on GnRH gene transcription. Taken together, these results suggest that pulsatile kisspeptin tone strongly influence the GnRH pulse generator, leading to the temporal pattern of GnRH transcription and secretion. 2. In Chapter 2, I investigated the hierarchical interaction between circadian and ultradian rhythms. In order to monitor GnRH pulsatility in mouse lacking functional circadian clockwork, POA slices were obtained from GnRHp-dsLuc TG mice crossbred with a mouse lacking the Bmal1 gene were used. GnRH neurons in Bmal1-deficient knockout (KO) mouse exhibited comparable level of basal promoter activity and hormone contents of GnRH. While spontaneous bouts of GnRH promoter activity in Bmal1-deficient GnRH neurons were essentially the same as those in wildtype neurons, kisspeptin-induced pulsatile GnRH secretion was significantly attenuated. Response to continuous application of kisspeptin in Bmal1-deficient cultures suggests that attenuation of pulsatility may not result from the lack of basal Gpr54 expression or its downstream signaling pathways. In conclusion, the cellular circadian clockwork is needed to generate the hypothalamic GnRH pulse generation probably through the processing, storage, or secretion of the GnRH peptide together with GnRH transcription.Background 1. Biorhythm 2. GnRH pulse generator: A representative ultradian rhythm 3. Kisspeptin and its role in regulating GnRH neuron Purpose Chapter 1. Ultradian rhythm of GnRH gene expression and synchronization by kisspeptin Chapter 2. Role of Bmal1, a core clock component, in the generation of synchronous GnRH pulsesDocto

PC 통신서비스간의 상호접속 유인 연구

본 논문에서는 그동안 국제 및 시내통신 서비스의 경우를 중심으로 진행되어 왔던 필수설비(essential facility) 보유기업간의 양방향 상호접속(two-way interconnection)에 관한 논의를 PC 통신서비스의 경우로 확장한다. 이로부터 개별 PC 통신사업자들은 망외부성(network externality) 극대화를 위해 자발적으로 상호접속할 유인을 갖음을 보인다. 또한 경쟁적 PC 통신사업자간 서비스 대체성과 가입자 규모의 차이에 따라 상호접속이 용이할 수도 그렇지 않을 수도 있게 되며 경우에 따라서는 접속료 설정과 관련하여 반경쟁적 담합행위가 발생할 수 있음을 보인다. 마지막으로 분석결과를 현실의 사례에 적용해서 우리나라 4대 PC 통신업체간 상호접속의 가능성에 대해 고찰한다

MICROSCOPE SYSTEM

일 실시예에 따른 현미경 시스템은, 케이스; 상기 케이스 내에 배치되어 시료를 배양하는 인큐베이터 유닛; 상기 케이스 내에서 상기 인큐베이터 유닛의 하부에 배치되어, 상기 시료에 대하여 광을 조사하는 광원 및 상기 광원에서 조사된 광에 의해서 상기 시료에 대한 이미지를 획득하는 카메라를 포함하는 현미경 유닛; 및 상기 케이스 내에서 상기 인큐베이터의 상부에 배치되어, 광을 이용해서 시료의 활성을 조절하는 광유전학 조작 유닛;를 포함할 수 있다

A study on the asymmetric two-way interconnection in on-line services

학위논문(석사) - 한국과학기술원 : 테크노경영대학원, 1998.2, [ vi, 86 p. ]한국과학기술원 : 테크노경영대학원

Composition for inducing disturbance of circadian clock and model for disturbing circadian clock made using same

본 발명은 생체시계(circadian clock) 조절용 조성물 및 이를 이용한 생체시계 조절 방법에 관한 것으로서, 보다 구체적으로 생체시계 관련 유전자인 Cry1 및 Cry2를 동시에 녹아웃 시키기 위해 직접 설계한 sgRNA를 포함하는 CRISPR/Cas9 시스템, 이를 포함하는 생체시계 교란 유도용 조성물, 이를 활용해 제조한 생체시계 교란 모델 및 상기 모델을 활용한 생체시계 교란 치료물질의 스크리닝 방법에 관한 것이다. 본 발명에 따르면 생체시계와 관련된 유전자들을 타겟으로 하는 sgRNA를 활용하는 CRISPR/Cas9 기술을 통해 Cry1 및 Cry2를 동시에 녹아웃 시킨 생체시계 교란 돌연변이 모델을 제작할 수 있으며, 타겟 유전자 녹아웃 외의 효과가 미미하여 생체시계만 교란된 돌연변이 모델을 제작할 수 있고, 이렇게 제작된 돌연변이 모델을 활용하여 생체시계 교정물질을 스크리닝을 통해 발굴해낼 수 있다

Single guide RNA for suppressing the expression of clock gene, and use thereof

본 발명은 시계 유전자 Period의 발현을 억제용 단일 가이드 RNA 조합, 및 이의 용도에 관한 것으로, 시계 유전자(clock gene)인 Period 1(Per1) 및 Period 2(Per2)의 발현을 억제할 수 있는 특정 sgRNA 조합을 설계하고, 이를 포함하는 벡터를 이용하여 시교차상핵(suprachiasmatic nucleus, SCN)에서 일주기 분자 시계 진동이 억제되는 것을 확인하고, 상기 벡터를 포함하는 바이러스를 주입한 동물 모델에서 일주일 운동 활성에 운동 활동이 낮아지고 부정맥이 나타나는 등의 일주기 리듬 억제에 의한 병증이 나타나는 것을 확인함으로써, 상기 sgRNA 조합 및 이를 포함하는 벡터를 일주기 생체 리듬을 변화시킬 수 있는 도구로 제공된다