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환경동화의 결말 분위기가 초등학생의 환경감수성과 환경태도에 미치는 영향
학위논문 (석사)-- 서울대학교 대학원 : 사범대학 협동과정 환경교육전공, 2018. 2. 류재명.이 연구의 목적은 환경동화의 결말 분위기가 초등학생의 환경감수성과 환경태도에 어떤 영향을 미치는가를 조사 분석하여, 학생들의 환경감수성과 환경태도를 바람직한 방향으로 신장시킬 수 있는 교육 자료의 선정과 환경 교육 방법의 개선에 대한 시사점을 제공하기 위한 것이다. 연구를 위하여 서울시 서초구에 위치한 I초등학교 5학년 학생 102명을 두 실험집단과 통제집단으로 나누어, 환경감수성 및 환경태도 검사지로 사전 검사를 한 후, 한 실험집단에는 긍정적 결말 분위기의 환경동화를, 다른 실험집단에는 부정적 결말 분위기의 환경동화를 각 8편씩 약 3주 동안 읽게 한 후 사후 검사를 하여 그 결과를 비교 분석하였다. 환경동화의 결말 분위기는 학생들이 결말 내용을 읽고 어떤 기분이나 감정이 드는지에 따라 긍정적 결말 분위기와 부정적 결말 분위기로 구분 지었다. 긍정적 결말 분위기의 환경동화는 환경문제의 극복, 사람과 자연(동식물)이 공생하며 살아가는 등의 내용으로 마무리되며, 이를 읽고 만족스러움, 희망적임, 행복함과 같은 긍정정서를 느낄 수 있다. 부정적 결말 분위기의 환경동화는 인간의 욕심으로 인해 자연이 파괴되거나 등장인물이 불행해지는 등의 내용으로 마무리되며, 이를 읽고 화남, 절망적임, 우울함과 같은 부정정서를 느낄 수 있다.
연구 결과, 두 실험집단 간의 사후검사 분석 결과, 환경감수성과 환경태도에서 통계적으로 유의미한 차이가 있는 것으로 나타났다. 우선, 긍정적 결말 분위기의 환경동화가 환경감수성 전체와 범주별 환경감수성 신장에 더 효과가 있었다. 환경태도를 살펴보면, 긍정적 결말 분위기의 환경동화가 환경태도 전체와 영역별 환경태도의 변화에 더 바람직한 방향으로 영향을 미쳤다. 한편 주제별 환경태도에서는 환경일반, 환경오염, 에너지, 수자원에서는 긍정적 결말 분위기의 환경동화가, 재활용에서는 부정적 결말 분위기의 환경동화가 더 효과적인 것으로 나타났다. 동물보호 주제에서는 통계적으로 유의미한 차이가 없었는데, 동물보호 태도 형성에 있어서 동화의 결말 분위기가 큰 영향을 주지 않는다고 볼 수 있다.
결론적으로 환경동화의 결말 분위기는 초등학교 학생들의 환경감수성과 환경태도에 영향을 주었다. 따라서 환경 관련 수업내외에서 학습 주제나 목표에 따라 적절한 환경 독서 자료를 투입하면 학생들의 환경감수성과 환경에 대한 태도를 긍정적인 방향으로 신장시킬 수 있을 것으로 보이며, 일상에서도 환경 독서 활동을 꾸준히 한다면, 궁극적으로 학생들의 실천적 성향이 높아질 것으로 생각된다.The purpose of this study is to investigate the influence of the mood of the end of environmental fairy tales on elementary school students environmental sensibility and environmental attitude and to provide suggestions for the selection of educational materials and the improvement of environmental education methods that can enhance students environmental sensibility and environmental attitude in a desirable direction.
For the study, 102 students who are the fifth grade of elementary schol located in Seocho-gu, Seoul were divided into two experimental groups and a control group, and after the preliminary test with the inventory with regard to environmental sensibility and environmental attitude, it allowed one experimental group to read 8 environmental fairy tales with a positive ending mood and the other experimental group to read 8 environmental fairy tales with a negative ending mood for about three weeks, respectively, and then the post test was conducted to compare and analyze the results.
The mood in the end of environmental fairy tales was classified into a positive ending mood and a negative ending mood depending on how students feel after reading the contents of the ending. Environmental fairy tales that create a positive ending mood end with contents such as the overcoming of environmental problems and living together with people and nature(animals and plants), which makes readers feel positive emotions such as satisfaction, hopefulness, and happiness. Environmental fairy tales that create a negative ending mood end with contents like that nature is destroyed, or characters become unhappy due to human greed, making it possible for readers to feel negative feelings such as angry, hopeless, and depressed.
The results of analyzing the study and post-test between the two experimental groups showed that there was a statistically significant difference in environmental sensibility and environmental attitude. First of all, environmental fairy tales that create a positive ending mood were more effective in enhancing the overall environmental sensibility and environmental sensibility by category. In terms of the environmental attitude, the environmental fairy tales with a positive ending mood influenced the overall environmental attitude and the changes in the environmental attitudes of each area in a more favorable direction. On the other hand, in the environmental attitudes of each subject, the environmental fairy tales with a positive ending mood were more effective in the general environment, environmental pollution, energy, and water resources, and those with a negative ending mood were more effective in the recycling. There was no statistically significant difference in animal protection-related topics, meaning that the mood of the end of fairy tales did not have a great influence on the formation of attitudes toward animal protection.
In conclusion, the mood of the end of environmental fairy tales had an influence on the environmental sensibility and environmental attitude of elementary school students. Therefore, the inclusion of proper environmental reading materials according to the learning theme or target within or outside the environment-related classroom will likely enhance students environmental sensibility and environmental attitude in a positive direction, and if students continue to do activities about reading environmental books, it is thought to ultimately increase students practical orientation.제 1 장 서론 1
제 1 절 연구의 필요성 및 목적 1
제 2 절 연구문제 4
제 3 절 용어 및 개념의 정의 5
1. 환경동화 5
2. 결말 분위기 5
3. 환경감수성 6
4. 환경태도 6
제 2 장 이론적 배경 7
제 1 절 초등환경교육과 환경동화 7
1. 초등환경교육의 목표 7
2. 초등환경교육의 특성 8
3. 환경동화의 교육적 가치 9
4. 선행연구 검토 10
제 2 절 환경감수성의 이론적 탐색 11
1. 환경감수성의 개념 11
2. 환경감수성의 필요성 12
3. 환경감수성의 구성요소와 측정 13
제 3 절 환경태도의 이론적 탐색 15
1. 환경태도의 개념 15
2. 환경태도의 구성요소 15
3. 환경태도 형성의 중요성 17
제 4 절 긍정정서 및 부정정서 17
1. 긍정정서 및 부정정서의 정의 18
2. 긍정정서 및 부정정서의 특성 19
제 3 장 연구 방법 20
제 1 절 연구의 절차 20
제 2 절 실험설계 21
1. 사전검사 22
2. 실험 처치 23
3. 사후검사 27
제 3 절 검사도구 27
1. 환경감수성 27
2. 환경태도 28
제 4 절 자료의 처리 31
제 4 장 결과 및 논의 32
제 1 절 환경감수성의 변화 32
1. 환경감수성 전체의 변화에 미치는 영향 32
2. 환경감수성에 대한 각 범주의 변화에 미치는 영향 34
제 2 절 환경태도의 변화 39
1. 환경태도 전체의 변화에 미치는 영향 39
2. 환경태도 중 영역 변화에 미치는 영향 41
3. 환경태도 중 주제 변화에 미치는 영향 45
제 5 장 결론 및 제언 52
제 1 절 결론 52
제 2 절 제언 55
참고문헌 56
Abstract 61
부록 64Maste
The vocabulary, ability to fast mapping and nonword repetition of 3 years old children who were prematurely born
The purpose of this study is to investigate the vocabulary, fast mapping ability, and nonword repetition ability of children born to preterm. A total of 48 subjects are enrolled in the study and compared the performances between children born as premature and term.
As a classification according to ICD-10, 24 terms with gestational age more than 38 weeks and 24 preterm with gestational age less than 35 weeks.
Research has been carried out on three tasks: (1) Korean Receptive and Expressive Vocabulary Test (REVT), (2) Fast mapping task, and (3) Nonword repetition task.
First, So as to measure the children 's vocabulary, I compared the frequency of the REVT expressions and the receptive domains. Two-way mixed analysis of variance (ANOVA) was used to investigate the difference between the two groups. In addition, I used analysis of covariance (ANCOVA) to examine the difference between groups when controlling the age and gestational age.
I also compared the rate of correct responses of fast mapping, which comprehends the names of unfamiliar objects by arranging 16 unfamiliar objects and 16 familiar objects in each set. The unfamiliar objects used in the experiment are marked with a nonword of two syllables. Through fast mapping, I gave the child the name of an unfamiliar object, and when I called the object the name, I looked to see if it correctly pointed to the object. One-way analysis of variance (ANOVA) was used to analyze the difference in the response rates between the two groups. we used analysis of covariance (ANCOVA) to examine the difference between groups when controlling the age, gestational age and vocabulary.
I compared the rate of correct responses of the nonword repetition between the two groups and analyzed the characteristics according to the syllable length from two syllables to six syllables. A task consisted of a total of twenty items ranging from two to six syllables in length, and four for each of the five syllable lengths. Two-way mixed analysis of variance (ANOVA) was performed to determine the difference between the two groups. The Bonferroni post - test was used to analyze the effect of syllable length.
The Pearson correlation coefficient was also used to determine whether there were significant correlations between the vocabulary and the performance of fast mapping and nonword repetition.
As a result, there was a significant difference between expressive vocabulary and receptive vocabulary in children born as preterm and term. The fast mapping and the nonword repetition task showed obvious distinction as well. Children born prematurely performed significantly lower in all tasks.
This study shows that premature birth can be one of the causes of delayed language development. It was also found that the presence of preterm birth was more influential than the length of gestational age when a preterm was born.
Based on this point, it is essential to prevent the problem of language development through early intervention.;본 연구에서는 미숙아로 출생한 아동과 만삭아로 출생한 아동 간의 어휘력, 빠른 의미 연결과 비단어 따라말하기 능력을 비교하였다. 연구의 대상자는 총 48명으로, ICD-10(International Statistical Classification 10th Revision)에 따른 분류에 따라 재태기간 38주 이상인 만삭아 24명과 재태기간 35주 이하로 출생한 미숙아 24명이 연구에 참여하였다.
연구는 수용∙ 표현 어휘력 검사(Receptive & Expressive Vocabulary Test: REVT, 김영태 외, 2009), 빠른 의미 연결 및 비단어 따라말하기의 총 세 가지 과제로 진행되었다. 먼저, 아동의 어휘력을 측정하기 위해 REVT의 표현 영역과 수용 영역의 정반응율을 비교 분석 하였다. 또한 낯선 물체 16개와 익숙한 물체 16개를 한 셋트에 각각 4개씩 배치하여 낯선 물체의 이름에 대해 이해하는 빠른 의미 연결의 정반응율을 비교해보았다. 그리고 두 집단 간의 비단어 따라말하기의 정반응율을 비교하고 2음절부터 6음절까지 음절길이에 따른 특성을 분석했다. 이원혼합분산분석(two-way mixed ANOVA)으로 집단 간 차이를 알아보았으며, Bonferroni 사후검정을 통해 음절길이에 따른 효과를 분석하였다. 또한 상관을 알아보기 위해 Pearson의 적률상관분석을 실시하여 재태기간과 생활연령 등 여러 요소가 어휘력과 빠른 의미 연결, 비단어 따라말하기의 수행력과 유의한 관계가 있는지 알아보았다.
연구 결과, 미숙아로 출생한 아동과 만삭아로 출생한 아동은 표현 어휘력과 수용 어휘력이 모두 유의한 차이가 있었다. 빠른 의미 연결 과제와 비단어 따라말하기 과제에서도 유의한 차이를 보였다. 미숙아로 출생한 아동이 모든 과제에서 유의하게 낮은 수행을 하였다.
본 연구를 통해 조산은 언어 발달 지연의 원인이 될 수 있다는 것을 알 수 있었다. 이러한 점을 토대로 조기중재를 통해 언어발달에 문제가 발생되는 것을 예방해야 할 것이다.Ⅰ. 서론 1
A. 연구의 필요성 및 목적 1
B. 연구 문제 6
C. 용어 정의 7
1. 미숙아 7
2. 만삭아 7
3. 빠른 의미 연결 7
4. 비단어 따라말하기 8
Ⅱ. 이론적 배경 9
A. 미숙아의 현황과 발달 추이 9
B. 미숙아로 출생한 아동의 언어 능력 11
C. 어휘력에 관한 선행 연구 12
D. 빠른 의미 연결에 관한 선행 연구 13
E. 비단어 따라말하기에 관한 선행 연구 19
Ⅲ. 연구 방법 24
A. 연구 대상 24
1. 미숙아로 출생한 아동 24
2. 만삭아로 출생한 아동 24
B. 연구 도구 26
1. 기초 검사 도구 26
2. 본 연구 과제 27
C. 연구 절차 28
D. 자료 분석 31
E. 자료의 통계적 처리 33
F. 신뢰도 34
Ⅵ. 연구 결과 35
A. 집단 간 REVT 수행력 비교 35
B. 집단 간 빠른 의미 연결 수행력 비교 36
C. 집단 간 음절길이에 따른 비단어 따라말하기 수행력 비교 39
D. 다양한 변인과 REVT 정반응율, 빠른 의미 연결 정반응율, 비단어 따라말하기 정반응율 간의 상관관계 43
1. 미숙아로 출생한 아동 집단에서 재태기간, 출생 시 체중, 생활연령, REVT 정반응율과 빠른 의미 연결 정반응율, 비단어 따라말하기 정반응율 간의 상관관계 43
2. 만삭아로 출생한 아동 집단에서 재태기간, 출생 시 체중, 생활연령, REVT 정반응율과 빠른 의미 연결 정반응율, 비단어 따라말하기 정반응율 간의 상관관계 44
Ⅴ. 결론 46
A. 결론 및 논의 46
B. 연구의 제한점 및 제언 54
참고문헌 55
부록 70
ABSTRACT 7
STM Studies on Properties of Fe(TCNE) on Ultrathin Insulating Layer
Spin relaxation time (T1) has been investigated extensively as it plays a key role towards miniaturization of memory devices at atomic scale. When the spin of an atom or a molecule is excited by electrical pump voltages, it relaxes back to its ground state due to interaction with its local environment. One of the approaches to probe the spin dynamics at atomic scale is to use scanning tunneling microscopy (STM). In particular, controlling the spin relaxation time of individual atoms via physical and chemical interaction with organic molecules has been one of highly interesting topics since the organic molecules may offer various tunability via chemical methodologies.
Here, we form metal (iron, Fe)-organic molecule (tetracyanoethylene, TCNE) complexes on two monolayer of magnesium oxide (MgO) grown on silver (Ag (100)) surface using atomic manipulation and study the evolution of the spin relaxation time of iron site of Fe(TCNE) complex using electrical pump probe method. We also studied the relationship between distance between tip and sample, or tunneling current, or conductance and the spin relaxation time (T1).
With these studies, we found out that the spin relaxation time of iron site in Fe(TCNE) complex is approximately 10 μs, which is 2 orders of magnitude smaller than that of an isolated iron atom on MgO/Ag(100). We could understand that this was due to the 2 orders of magnitude decrease in conductance from TCNE rather than the decrease in spin relaxation time of iron. Because the intrinsic spin state of iron did not change before and after forming the complex, it implies that the Fe and TCNE are weakly coupled in the complex.
In addition, we successfully map the spin relaxation time across the metal-organic molecule complex and this helps us understand the spin dynamics of the complex in microsecond range. This technique is utilized for identification of the location of the Fe atom within Fe(TCNE) complex with atomic precision. This work may contribute to the understanding of how the local environment influence the spin dynamics and the structures in the contents of metalloorganic complexes.;스핀 이완 시간 (T1)은 메모리 소자를 원자 단위로 초소형화 하기 위해 중요한 역할을 한다. 원자의 스핀에 전자 펌프 전압이 가해지면 스핀은 들뜬 상태로 여기되고, 이후 주변 환경과의 상호작용을 통해 원래의 바닥 상태로 돌아온다. 이러한 스핀의 역학을 조사하기 위해 STM을 이용할 수 있다. 구체적으로, 스핀 이완 시간(T1)을 조절하기 위해 단일 원자와 유기 분자의 물리적, 화학적 상호작용을 이용할 수 있는데, 이는 유기 분자를 이용하여 다양한 화학적 특성을 조절할 수 있다는 특징 때문에 흥미로운 주제로 알려져있다.
우리는 은(100) 표면 위에 두 원자층의 산화 마그네슘 (MgO)을 길러서 그 위에 금속(철, Fe)과 유기 분자 (테트라사이아노에틸렌, TCNE)를 원자 조종 방식으로 결합시키고, 철과 유기분자 복합체 내 철 위치의 스핀 이완 시간이 어떻게 변화하는지 전기적 펌프-탐침 방식을 이용하여 관측하였다. 또한 탐침과 샘플 사이의 거리에 따라, 혹은 터널링 전류, 또는 전도도에 따라 스핀 이완 시간 (T1)이 어떻게 변화하는지 알아보았다.
본 연구를 통해, 우리는 철-유기분자 복합체 내의 철 위치에서의 스핀 이완 시간이 은(100) 표면 위 산화 마그네슘 (MgO) 위에서 계산된 단일 철 원자의 스핀 이완 시간보다 100배 낮은 것을 확인할 수 있었다. 이는 철 자체의 스핀 이완 시간이 줄어든 것이 아니라, TCNE가 전도도가 100배 낮추는 데 영향을 미쳤기 때문이다. 철 자체의 스핀은 복합체 형성 전후에 변화가 없으므로 이는 철과 TCNE 분자가 약하게 결합한다는 것을 뜻한다.
또한, 스핀 이완 시간 (T1)이 철-유기분자 복합체 속에서 어떻게 나타나는지 원자지도를 그렸고, 이는 스핀 역학을 마이크로 초 단위에서 이해하는 데 도움을 주었다. 이를 통해 원자 단위의 정확도로 철-유기분자 복합체 내에서의 철 원자 위치를 확인할 수 있었다. 따라서 원자 지도는 철-유기분자 결합체 내의 스핀 역학과 구조에 국소적 환경이 어떻게 영향을 미치는지 이해하는 데 기여할 수 있다.I.Introduction 1
II.Scanning Tunneling Microscopy and Spectroscopy 3
1.Principles of STM 3
1)Quantum tunneling: Bardeen's theorem 3
2)Sample Scanning 5
2.Scanning Tunneling Spectroscopy (STS) 6
1)Principles of STS and Lock-in technique 6
2)Inelastic Electron Tunneling Spectroscopy and Spin Polarized STS 7
3.Experimental Setup 9
1)Scanning Tunneling Microscope (STM) 9
2)Equipment for sample preparation 11
4.Sample preparation procedure 12
III.Single Atom Spectroscopy 15
1.Ultrathin Insulating Layers 15
1)Copper Nitride (Cu2N) film on Cu(100) 15
2)Magnesium Oxide (MgO) layer on Ag(100) 17
2.Atoms 19
1)Copper 20
2)Vanadium 21
3)Iron 23
3.Molecule 24
1)TCNE 24
IV. Iron-TCNE Molecule Complex on Insulating Layer 28
1. Formation of Iron-TCNE Complex Using Atom Manipulation . 28
1) Principles of atom manipulation 28
2) Image of Fe(TCNE) complex 30
2. Spectroscopy on Different Complexes 31
1) Fe(TCNE) complex 31
V. Spin Relaxation Time (T1) of Single Atom-Molecule Complex 33
1. Basics of T1 Time 33
1) Basic principle 33
2) Method 34
3) Rate equation 36
2. T1 time measurement 37
1) Pump probe measurement 37
2) Delay time map 39
VI. Conclusions 41
Abstract (in Korean) 4
Regulation of platelet-derived growth factor by peroxiredoxin II
H2O2는 최근 수용체가 관련된 signaling에서 중요한 역할을 한다고 알려지면서 많은 주목을 받고 있다. 실제 H2O2는 여러 성장인자와 cytokine등의 자극에 의해 세포 내에서 생성이 되는데, 앞선 논문에서 혈소판에서 유래된 성장 인자 (platelet-derived growth factor, 이하 PDGF) 에 의해 H2O2가 생성되고, 이는 하위 신호전달 관련 단백질들의 tyrosine 잔기의 인산화에 필수적이라는 것을 밝힌 바 있다. 외부 자극에 의한 H2O2의 생성 시스템은 아직 분명히 밝혀지지 않았지만, 제거 시스템은 많은 연구가 진행되어 있다. 2-Cys Prx는 새로운 preoxidase 집단의 구성원으로 thioredoxin, thioredoxin reductase, NADPH의 존재 하에서 H2O2를 효과적으로 환원시키는 역할을 한다. 2-Cys Prx는 크게 H2O2 signaling의 조절자이자 산화 스트레스의 방어자로서의 두 가지 역할을 하는 것으로 알려져 있다. 앞선 논문에서 2-Cys Prx 중 하나인 Prx II가 PDGF signaling의 중요한 조절인자라 것이 입증 되었다. Prx II가 제거된 세포 (MEFs) 에서 전체 단백질의 tyrosine 잔기 뿐 아니라 PLC-g1의 783번 tyrosine 잔기의 인산화 정도가 정상 세포에 비해 확연히 증가했다. 더불어 PDGF 자극에 의해 유도된 세포의 증식과 이동이 Prx II가 제거된 세포에서 더욱 활발히 일어나는 것을 확인 할 수 있었다. 나는 이 논문에서 이런 현상의 재연성 여부를 직접 만든 primary mouse embryonic fibroblast를 이용해서 확인하였다. 또한, PDGF signaling에서의 Prx II의 조절 메커니즘을 자세히 살펴보았다. Prx II는 PDGF 자극이 주어지면, 수용체 쪽으로 이동을 해서 H2O2를 환원 시키게 되고, 그로인해, 마찬가지로 수용체 주변에 있던 protein tyrosine phosphatase (PTPase)들의 산화를 어느 정도 경감시켜주는 역할을 하게 된다. 이 과정에서 Prx II에 의한 PDGF 수용체의 자리 특이적 조절에 관여하는 PTPase들을 찾는 실험은 현재, 진행 중이다.
또한, Prx II와 아미노산 서열 면에서 80%가 넘는 유사성을 보이는 또 다른 2-Cys Prx 구성원인 Prx I의 역할에 대한 연구도 진행하였다.
Prx I은 세포 내에 Prx II에 비해 몇 배나 더 많은 양으로 존재하지만, PDGF signaling에는 전혀 관여하지 않는다는 사실을 밝혔다. 즉, Prx I과 Prx II는 signaling 조절 측면에서 다른 역할을 하고 있다는 것을 알 수 있었다. 최근, 세포가 산화 스트레스를 받으면, 2-Cys Prx가 과산화 되면서 거대 분자 복합체를 형성함으로써 다른 단백질들의 집성을 막는 chaperone 역할을 한다는 보고가 있었다. 이 내용을 포유류 세포에서 확인하기 위해 HeLa cell에 H2O2를 처리한 후, Prx I과 Prx II의 단백질 크기를 gel filtration 방법으로 분석하였다. 그 결과, Prx I은 chaperone 역할을 할 수 있을 정도로 거대한 복합체를 형성했지만, Prx II는 decamer 이상의 복합체를 형성하지 못하는 것을 확인 할 수 있었다. 즉, 산화 스트레스 하에서도 Prx I과 Prx II는 다른 방법으로 세포를 조절하고 있다는 것을 예상할 수 있다. 결론적으로, 2-Cys Prx는 세포 내에서 성장 인자에 의한 유도된 H2O2 ignaling 조절할 뿐 아니라, 산화 스트레스 하에서 단백질들의 집성을 막는 두 가지 중요한 역할을 하고 있다. 뿐 만 아니라, 2-Cys Prx 의 구성원인 Prx I과 Prx II는 구조적으로 매우 유사함에도 불구하고, 세포 내에서 다른 조절 양상을 보여주고 있다.;Recently H2O2 has drawn much interest because of its role as a second messenger in receptor-mediated signaling. Platelet-derived growth factor (PDGF) also induces the production of H2O2, and this is required for subsequent protein tyrosine phosphorylation, although the generating system of H2O2 is still unclear. H2O2 generated in response to receptor stimulation is known to be eliminated efficiently by mammalian 2-Cys peroxiredoxins, members of a novel peroxidase family that catalyze the H2O2 reduction reaction in the presence of thioredoxin, thioredoxin reductase and NADPH. Although several lines of evidence have suggested that 2-Cys peroxiredoxins have dual roles as regulators of the H2O2 signal and as defenders of oxidative stress, their real physiological functions in higher eukaryotic cells had remained obscure. It has been clarified the physiological relevance of 2-cys Prxs, using mouse embryonic fibroblasts deficient in Prx II [1]. Prx II deficiency resulted in increased production of H2O2, enhanced activation of PDGF receptor (PDGFR) and phospholipase Cy1, and subsequently increased cell proliferation and migration in response to PDGF. Then, I confirmed the reproducibility of my previous report which showed a role of peroxiredoxin II as a regulator of PDGF signaling, using newly prepared MEFs. Also, this report demonstrates that Prx II translocated to PDGFR may relieve the membrane-associated PTPases from oxidative inactivation by eliminating H2O2 in the microenviroment of PDGFR. Identification of the PTPase protected by Prx II has remained as a further work. Besides, Prx I, another member of 2-Cys Prx family, does not participated in PDGF signaling pathway in spite of a large amount in cytoplasm. Instead, I show that Prx I might be involved in functioning as a molecular chaperone under oxidative stress, using size exclusion chromatography. These results demonstrate that endogenous H2O2 plays a localized role in PDGF signaling, and that Prx II specifically acts as an important regulator in this signaling, whereas Prx I does not.Abstract = i
Contents = iii
List of Figures = v
1. INTRODUCTION = 1
2. MATERIALS & METHODS = 7
2.1. Antibodies = 7
2.2. Cell culture = 7
2.3. Preparation of mouse embryonic fibroblasts (MEFs) = 7
2.4. Imunoblot assay = 8
2.5. Construction of retroviral plasmids = 9
2.6. Transfection of retroviral packaging line Phoenix-Ampo = 9
2.7. Retroviral transduction = 10
2.8. Generation of recombinants adenoviral plasmids in E. coli = 11
2.9. Production of adenoviruses in 293 cells = 11
2.10. Two-dimensional PAGE = 12
2.11. Size exclusion chromatography = 13
2.12. Protein tyrosine phosphatase assay = 14
2.13. Labeling of PTPases with biotin-iodoacetamide = 14
3. RESULTS = 16
3.1. Prx II is a physiological negative regulator of PDGF signaling = 16
3.2. The peroxidase activity of Prx II is essential for regulation of PDGFR phosphorylation = 19
3.3. Prx I is more abundant than Prx II in cytoplasm = 21
3.4. Prx I does not participate in PDGF signaling = 23
3.5. Mammalian Prx I produces multiple forms of high-molecular-weight protein complexes under oxidative stress in vivo = 28
3.6. Prx II may relieve the membrane-associated PTPases from oxidative inavtication = 32
3.7. Identification of PTPase responsible for dephosphorylating tyrosine 579/581 and 857 is going on = 39
4. DICUSSION = 43
5. REFERENCES = 4
