In vitro and In vivo Studies of Novel Compounds as P-glycoprotein Inhibitors

P-glycoprotein (P-gp) is a well-characterized ATP-binding cassette (ABC) that functions as a biological barrier by eliminating toxins and xenobiotics from cells. In vitro and in vivo studies demonstrated that P-gp is an important factor in drug absorption and disposition because of its expressed locations. Although P-gp was first discovered in drug-resistant Chinese hamster ovary cells, P-gp is also expressed in normal organs, such as the liver, intestine, kidney, and brain. P-gp appears to play a greater role in limiting cellular uptake of drugs from the intestinal lumen into epithelial cells than in enhancing the excretion of drugs from hepatocytes and the renal tubules into the adjacent luminal space. In addition, P-gp exhibits specificity for a wide range of substrates, including anticancer agents, immunosupressants, HIV-protease inhibitors, steroids, anti-microbial agents, and others, which are not associated with structural or functional relationships. Oral administration is preferred over other administration routes because oral drugs can be administered at home, improving patient convenience and quality of life and potentially decreasing costs by preventing hospitalization. In addition, patients avoid the risk of infection that is associated with injections. The systemic exposure of orally administered drugs, which is represented by oral bioavailability (BA), is a significant factor in oral absorption. The BA of a drug is associated not only with its physicochemical properties but also with the function of drug transporters. Because of its localizations, functions and substrate specificities, P-gp acts a major barrier to orally delivered drugs. Some studies reported that co-administration of orally administered drugs with a P-gp inhibitor could improve systemic exposure. Thus, the modulation of P-gp is an important factor in the development of oral drugs. Because of this increasing interest in P-gp inhibitors, a number of inhibitors were developed and some of these inhibitors are currently being tested in clinical trials. In this study, a variety of derivatives, including coumarin derivatives (Chapter I), xanthone analogues (Chapter II), and synthesized optically active phenylbutenoid dimers (Chapter III), were investigated as P-gp inhibitors. In vitro studies tested the P-gp inhibitory activity of the derivatives and identified the mechanisms of action of the derivatives. To evaluate the potential for clinical application of the derivatives as P-gp inhibitors, the P-gp inhibition-related effect of the candidates selected from the in vitro studies on the pharmacokinetic parameters of the P-gp substrate paclitaxel (PTX) was estimated. The optimal dose of each candidate for P-gp inhibition was also determined. When PTX was co-administered with the optimal doses of the coumarin derivative LL-348, the xanthone analogues compound 132b) and compound N4-1, and the synthesized optically active phenylbutenoid dimer compound 2, the oral BAs of PTX were enhanced 9.6-, 2.5-, 3.2- and 1.8-fold, respectively. In addition, the effect of the coumarin derivative LL-348 and the xanthone analogue compound 132b) on the efficacy of the anticancer agent PTX was assessed in human alveolar basal epithelial carcinoma (A549)-bearing mice. When PTX was administered with a 10 mg/kg oral dose of LL-348, tumor growth was strongly inhibited and tumor regression occurred. When PTX was co-administered with 10 mg/kg of compound 132b), tumor growth was inhibited but tumor regression was not observed. The results from Chapters I to III suggested that each compound had an optimal dose for inhibition of P-gp because P-gp was saturable. In addition, the structural similarities of the P-gp inhibitors that were used in our studies were analyzed. In this study, the P-gp inhibitors had more than one benzene ring, one of which was connected to a butene chain that had a variety of substituents. In addition, P-gp is considered a major cause of multidrug resistance (MDR). MDR is a serious problem in cancer therapy because it leads to cross-resistance against diverse anticancer agents. Therefore, the effect of the xanthone analogue 3-(3-chloro-2-hydroxyptopoxy)-1-hydroxy-9H-thioxanthen-9-one on P-gp inhibition-mediated chemo-sensitization in human gastric cancer-bearing mice was studied (Appendix 2). Although paclitaxel (PTX) is not indicated for gastric cancer cells, tumor regression occurred when PTX was injected with a 1 mg/kg intravenous dose of compound 132b). ;P-당당백질은, 에너지 의존적으로 작동하는 약물 배출 수송체 중 하나로 암세포에서 처음 발견되었지만 간, 소장, 신장, 뇌와 같은 정상 기관에도 발현된다. 정상 기관에서 P-당단백질은 세포 내로 유입되는 외부물질을 세포 밖으로 배출하는 역할을 하기 때문에, P-당단백은 약물의 흡수, 분포, 대사, 배설에 중요한 영향을 미치는 것으로 알려졌다. 특히 소장에서 발현되는 P-당단백질의 경우, 경구로 흡수되는 약물의 흡수를 방해하는 가장 큰 원인 중 하나로 손꼽힌다. P-당단백질은 구조적, 기능적 연관성이 없는 광범위한 물질을 그 기질로 갖기 때문에, 소장에서 발현되는 P-당단백질은 다양한 물질의 경구 흡수를 저하시킨다고 알려졌다. 따라서 소장의 P-당단백질을 효과적으로 억제한다면, 다양한 약물의 경구 흡수율을 증진 시킬 수 있을 것으로 사료된다, 따라서 그동안 경구 흡수율이 낮아 경구용 제제 개발이 어려웠던 약물과 P-당단백질 억제제를 함께 투여함으로써, 손쉽게 경구용 제제 개발이 가능할 것으로 생각된다. 본 연구에서는 다양한 유도체들의 P-당단백질 억제제로서의 가능성을 평가하고, 그 중 후보물질을 도출하여 실제 경구 흡수가 어려운 P-당단백질 기질 약물의 경구 흡수 증진 여부를 실험하였다. 더불어 실제 암 모델에 적용하여, 그 효능 역시 평가하였다. 쿠마린 유도체 4종 (챕터 1), 잔톤 유도체 20종 (챕터 2), 절대입체 이성질체로 분리한 페닐부테노이드 중합체 2종 (챕터 3) 에 대하여 본 연구에서는 실험을 진행하였다. In vitro 실험을 통하여 가장 효과 있는 P-당단백질 억제제 물질을 구조 별로 한가지씩 선정하였고, 선정된 물질을 P-당단백질 기질 항암제인 파클리 탁셀과 함께 경구로 쥐에 투여하여, 선정된 물질이 파클리 탁셀의 혈중 농도에 미치는 영향을 HPLC로 분석, 평가하였다. 각각의 유도체들은 다양한 용량으로 투여하여, 최적의 효과를 나타낼 수 있는 용량을 도출하고자 하였다. 그 결과, LL-348 (쿠마린 유도체), compound 132b) (3환링 잔톤 유도체), N4-1 (4환링 잔톤 유도체), compound 2 (절대 입체 이성질체인 페닐부테노이드체)는 파클리 탁셀의 경구 흡수율을 각각 9.6-, 2.5-, 1.8-배 증가시켰다. 이 중, LL-348 과 compound 132b) 는 인체 유래 폐암 동물 모델에서 항암제의 효능을 증진시켜 치료 효과를 상승 시킬 수 있는지도 평가되었다. LL-348을 파클리 탁셀과 함께 폐암 모델 동물에 투여한 결과, 암의 성장이 강력하게 억제되었으며, 더불어 암의 소실이 관찰 되었다. compound 132b) 와 파클리 탁셀을 폐암 모델 동물에 경구로 투여하였을 때에는, 암의 소실은 관찰되지 않았으나, 암의 성장이 억제되는 것을 확인할 수 있었다. 이와 더불어 본 연구에선, 연구에 사용된 물질 중 P-당단백질의 억제하는 효과가 있는 것으로 나타난 물질들의 구조적 공통점을 찾고자 하였다. 본 실험에서 선정된 P-당단백질 억제제는 공통적으로 하나 이상의 벤젠 고리를 가지고 있으며, 벤젠 고리에는 다양한 치환기를 갖고 있는 부탄 체인이 연결되어 있었다. 더불어 항암치료의 주요 실패 원인인 약물 다약제 내성은 암세포 내에 과발현된 P-당단백질 때문으로 알려졌기 때문에, 본 연구에서는, 잔톤 유도체인 compound 132b)의 항암 감작제로서의 가능성 역시 평가하였다. 1 mg/kg 용량의 compound 132b)를 파클리탁셀과 함께 인체 유래 위암 모델 동물에 정맥 주사한 결과, 항암제의 적응증이 아닌 위암에서 실제 암의 소실이 관찰 되었다.I. INTRODUCTION 1 A. Physical Properties 1 1. Structure 1 2. Drug binding sites and drug efflux mechanism 3 3. Distribution and functions 9 4. Substrates 10 5. Inhibitors 11 B. Pharmacological Functions 13 1. Role of P-gp in drug absorption 13 2. Impact of P-gp on tumor responses 13 C. Pharmacological Effects of P-gp inhibition 15 1. Pharmacokinetic advantage 15 2. Others 16 D. Objective of this Study 17 II. MATHERIALS 18 A. Chemicals 18 B. Animals 19 C. Cell lines 19 D. Compounds 19 III. Chapter I : Effect of coumarin derivative-mediated inhibition of P-glycoprotein on oral bioavailability and therapeutic efficacy of paclitaxel (formatted in Eur J Pharmacol) 20 1. Introduction 21 2. Methods 23 3. Results 28 4. Discussions and Conclusions 38 5. References 42 IV. Chapter II : Xanthone Analogues as Potent Modulators of Intestinal P-glycoprotein (formatted in Eur J Pharm Chem) 45 1. Introduction 46 2. Methods 49 3. Results 54 4. Discussion and Conclusions 64 5. References 67 V. Chapter III : In vitro and in vivo evaluation of phenylbutenoid dimers as inhibitors as P-glycoprotein (formatted in J Nat Prod) 71 1. Introduction 72 2. Results and Discussion 75 3. Conclusion 84 4. Experimental section 85 5. References 90 VI. COMPREHENSIVE DISCUSSION 92 VII. Appendix 1 : P-glycoprotein inhibitory activities by various compounds 95 1. Introduction 96 2. Methods 99 3. Results and Discussion 104 4. Conclusion 116 5. References 117 VIII. Appendix 2 : a P-gp Inhibitor As a Chemo-sensitizer 120 1. Introduction 121 2. Methods 125 3. Results and Discussion 127 4. Conclusion 131 5. References 132 IX. REFERENCES 134 X. SUPPLEMENTARY DATA 144 XI. Additional Work : Preclinical evaluation of efficacy and stability of docetaxel micelle-encapsulated by a tripodal cyclotriphosphazene amphiphile (formatted in Cancer Chemother Pharmacol) 151 0. Abstract 152 1. Introduction 153 2. Methods 155 3. Results 159 4. Discussion 173 5. References 175 XII. 국문초록 17

《乙丙燕行录》研究

학위논문 (석사)-- 서울대학교 대학원 : 국어국문학과, 2013. 8. 김명호.이 논문은 담헌 홍대용의 한글 연행록인 『을병연행록』을 주로 여성 독자와 관련하여 분석하고, 이로 인해 『연기』를 비롯한 담헌의 다른 한문 연행 기록들과는 상이한 특징들을 해명함으로써 그 독자적 가치를 부각하는 것을 목적으로 한다. 이를 위해 본고는 다음과 같은 세 가지 연구방법을 취하였다. 첫째는 『을병연행록』을 현재까지 알려진 거의 모든 홍대용의 한문 연행 관련 기록들과 비교 분석하였다. 둘째는 여성 독자와의 관련성을 중심으로 『을병연행록』의 내용과 표현을 분석하는 것이다. 셋째는 다양한 글쓰기 방식을 중심으로 『을병연행록』의 문예적인 가치를 해명하는 것이다. 예비적 고찰에서는 본격적인 논의에 앞서 연행의 경위와 아울러, 개방적이고 적극적인 홍대용의 연행 자세를 살펴보았다. 이러한 연행 자세는 선입견에서 벗어나 청조 중국의 현실을 새롭게 파악하는 데 크게 기여했다고 본다. 다음으로는 텍스트의 형성 과정을 고찰하여, 『을병연행록』의 창작 시기와 독자층을 추정해 보았다. 『간정동회우록』의 이본 4종을 『을병연행록』과 비교 분석해서, 『을병연행록』이 홍대용의 연행 기록 중 초기에 저술된 텍스트임을 논증했다. 또한 『계방일기』와 『흠영』의 관련 기록에 의거해 『을병연행록』이 『연기』보다 먼저 완성된 연행록이라고 추정했다. 제3장에서는 조선 후기의 저명한 실학자였던 홍대용의 학문관에 의거하여 청나라 견문 내용을 실사(實事), 실지(實地), 실심(實心)으로 나누어 고찰하였다. 우선, 실학자인 홍대용은 실사에 주목함으로써 중국 여성들의 일상을 포착하여 이를 독자인 조선 여성들의 관심사로 부각시켰다. 이는 홍대용이 『을병연행록』을 읽게 될 여성 독자들을 배려한 결과였다. 물론 여성의 부덕을 강조한 대목들에서 그의 보수적인 여성관이 드러나 있기는 하지만, 홍대용이 관찰 대상에 중국 여성들을 포함하고 여성적인 관심사를 집중적으로 다룬 점은 큰 의의가 있다고 본다. 다음으로, 청나라를 실지 체험하면서 홍대용의 대청 인식이 변화하게 되는 과정을 살펴보았다. 홍대용은 대명의리론(對明義理論)에 입각한 존명(尊明) 사상을 숨기지 않고 표출하는 한편, 청나라 통치의 장점을 긍정했으며, 천주당을 방문하여 최신 서학 정보를 입수하고자 노력했다. 또 청의 선진 문물들을 심층적으로 관찰하여 그 기저 원리를 대규모 세심법(大規模細心法)으로 파악하면서, 그의 대청 인식에 균열이 일어났던 것으로 보인다. 끝으로, 홍대용이 다양한 청나라 사람들과 실심으로 교유하면서, 특히 엄성ㆍ반정균ㆍ육비 등 항주 출신 선비들과 천애지기(天涯知己)의 뜨거운 우정을 맺은 사실을 살펴보았다. 또한 항주 선비들과의 학문적 토론에서 드러난 바 관용적인 태도를 바탕으로 한 홍대용의 우정론도 살펴보았다. 제4장에서는 홍대용이 제3장에서 살펴본 자신의 중국 견문 내용을 여성 독자들에게 효과적으로 전달하기 위해 구사한 다양한 글쓰기 방식들을 고찰했다. 『을병연행록』에서 홍대용은 여성들의 관심사와 직결되는 중국 문물들을 상세하게 묘사했다. 또한 낯선 용어나 한시 등에는 자상한 해설을 덧붙이고, 전문적이고 학술적인 내용은 생략하기도 했다. 이를 통해 여성 독자에 대한 홍대용의 세심한 배려를 확인할 수 있다. 또한 홍대용은 소설적인 수법을 적극적으로 구사하여 중국 여행 체험을 생생하게 재현하고자 했다. 즉 대화를 재현함으로써 장면의 확장을 꾀하고, 서사에 유기성을 부여했으며, 등장인물의 입체적이고 해학적인 형상화를 시도하였다. 이는 홍대용이 『수호전』 등 중국 소설에 대한 조예를 갖추었기 때문에 가능한 것이었다. 마지막으로, 홍대용이 자신의 연행 체험 중 가장 중요한 사건이었던 청국인들과의 교유를 충실하게 표현하기 위해, 연행록으로서는 이례적으로 필담과 서신을 비롯한 다양한 양식의 글들을 대폭 도입했음을 지적했다. 홍대용은 원래의 필담을 확장 또는 축소하기도 했는데, 이는 여성 독자들의 관심사나 수준을 고려했기 때문으로 보았다. 이러한 다양한 글쓰기 방식을 보면, 『을병연행록』이 뛰어난 문예성을 성취한 작품임을 알 수 있다.Ⅰ. 서 론 1. 연구사 검토 2. 연구 방법과 텍스트 Ⅱ. 1765년 동지사행과 『을병연행록』 1. 연행(燕行)의 경위와 담헌의 연행 자세 2. 텍스트의 형성 과정 1) 『을병연행록』과 『연기(燕記)』의 선후 관계 2) 『을병연행록』과 여성 독자 Ⅲ. 실학자가 본 청조(淸朝) 중국 1. 실사(實事) 주목과 여성의 관심사 부각 2. 실지(實地) 체험과 대청(對淸) 인식 변화 3. 실심(實心) 교유와 청국인과의 우정 Ⅳ. 다양한 글쓰기 방식 1. 여성 독자를 위한 세심한 배려 2. 소설적 수법에 의한 현장감 재현 3. 필담ㆍ서간ㆍ시문(詩文)의 대폭 도입 Ⅴ. 결 론 참 고 문 헌 中 文 摘 要Maste

A Study on Ganjeongrok(乾淨錄), a Collection of written conversation by Hong Dae-yong

학위논문(박사) -- 서울대학교대학원 : 인문대학 국어국문학과, 2024. 2. 이종묵.본고는 홍대용의 필담집인 『간정록(乾淨錄)』 에 문헌학적으로 접근하여 그 수정 양상을 밝히고 홍대용 필담집의 형성 과정과 그 의미를 분석하는 것을 목적으로 한다. 특히 홍대용이 장편의 연행록을 두 편이나 편찬했음에도 불구하고 따로 필담집을 저술한 이유를 고찰하고 홍대용 연행 기록의 전체 구도 안에서 홍대용 필담집의 의의를 규명하고자 하였다. 본고에서는 홍대용의 필담집을 크게 두 가지 방향으로 접근하여 분석하였다. 첫째, 홍대용을 중심으로 필담집의 형성 과정을 분석하였다. 홍대용은 1766년 2월에 청나라 북경에서 항주 출신 거인(擧人)들과 만나서 깊은 우정을 나누었다. 조선에 돌아온 후 바로 그들과 북경에서 한 달 동안 주고받은 서신 및 필담을 정리해서 필담집을 엮었다. 그리고 이 필담집은 홍대용의 전 생애에 걸쳐서 여러 차례 수정되었다. 숭실대 소장본 『간정록』 에는 이러한 수정 양상이 그대로 남아 있다. 그러므로 Ⅲ장에서는 먼저 홍대용 생전에 이루어진 필담집 수정과 편찬 과정을 숭실대본 『간정록』 의 수정 양상을 분석하면서 유추하였다. 다양한 수정 표시는 주색, 청색, 흑색으로 이루어져 있다. 홍대용은 청나라에서 필담을 주고받았던 때부터 필담집을 구상하였으며 귀국 직후에 초고본인 『간정록』 을 편찬했다. 하지만 조선 문인들의 비판과 청나라 거인들의 요청으로 수정을 거듭하여 『간정필담』 을 새롭게 편찬하였다. 홍대용은 이후에도 필담집을 계속 수정하면서 새로운 필담집을 구상했던 것으로 짐작된다. 홍대용 사후에는 19세기에 그의 후손인 홍양후(洪良厚)가 조부의 문집을 편찬하는 과정에서 홍대용의 필담집을 『간정동필담』 이라는 제목으로 편찬하였다. 20세기에는 신조선사(新朝鮮社)에서 홍양후가 편찬한 『간정동필담』 을 저본으로 하여 연활자본인 『간정동필담』 을 편찬하였다. 둘째, 홍대용 필담집을 비롯한 다양한 필담 기록들을 중심으로 홍대용 필담집의 의미를 고찰하였다. 먼저 현존하는 홍대용 필담집의 다양한 존재 양상을 살펴보았다. 이본들의 현황을 확인하고 개별 이본들의 서지적 특징을 분석하였다. 홍대용의 필담집은 다양한 서명으로 존재하였으므로 그 성격과 의미를 파악하였다. 이를 토대로 Ⅳ장에서는 홍대용 필담집 이본뿐만 아니라 홍대용 연행 기록 전체를 비교 분석하여 필담집 이본을 세 계열로 분류하고 그 상관관계를 파악하였다. 홍대용의 필담집 이본이 시기별로 크게 초고본 계열, 개작본 계열, 『담헌서』 계열로 나눌 수 있으며, 두 번째 계열인 개작본 계열을 다시 『담헌연기』 계열과 『연휘』 계열로 분류가 가능하다는 것을 입증했다. 또한 부분적이지만 두 번째 계열 이본들의 선후 관계를 짐작할 수 있는 근거들 또한 파악하였다. 또한 홍대용 필담집이 갖는 의미를 연행록 전체와 비교하여 분석하였다. 홍대용이 필담집을 엮고, 여러 차례에 걸쳐서 다양한 방식으로 수정하면서 끊임없이 교정을 가한 근본적인 이유이자 목적은 소통에 있다고 생각한다. 또한 완성도 높은 필담집을 만들어서 자신들의 우정을 알리고 싶었던 것으로 보인다. 동시대인들뿐만 아니라 자신의 후손을 비롯한 후대인과도 소통하고자 했다. 즉, 항주 선비들과의 우정이 불후의 이야기가 되기를 기대했던 것이다.The purpose of this study is to ananlyze the formation process and its meaning of Ganjeongrok(乾淨錄), a collection of written conversation by Hong Dae-yong by by revealing its modifications in philological methods. In particular, I tried to examine the reasons why Hong Dae-young wrote the separate collection of written conversation even though he compiled two long-form travelogues to define the significance of his collection of written conversation within the overall framework of his travel records. This study analyzes his collection of written conversation in two methods: First, I analyzed the formation process of the collection to define the authors circumstances. In February 1766, Hong Dae-yong met scholars from Hangzhou and had a close friendship with them in Beijing. Soon after his returning to Joseon, Hong Dae-yong made a book to compile letters and conversations shared with them during his month-long stay in Beijing. He revised the book several times throughout his lifetime. As Ganjeongrok in Soongsil University represents these modification. In chapter III, I first traced the process of revising and compiling the book during authors lifetime by analyzing the various correction marks in the Soongsil University version, which are indicated in various colors such as red, blue, and black. Hong Dae-yong conceptualized the book from the time of exchanging written conversation in China and compiled the first draft of Ganjeongrok right after returning Joseon. However, due to criticism from Joseon literati and requests from the Chinese scholars, he repeatedly revised the draft, eventually compiling a new version, Ganjeongpildam. He continued to revise the book and conceptualize new versions thereafter. After Hong Dae-yong's death, one of his descendants, Hong Yang-ho, compiled his grandfather's writings into a book titled Ganjeongdongpildam in in the 19th century. In the 20th century, a publisher named New Joseon Society published a printed book of Ganjeongdongpildam, based on Hong Yang-ho's compilation. Secondly, I examined the significance of his various records of written conversation. I first explored the existing states of Hong Dae-yong's collection of written conversation by identifying different versions, and analyzing their bibliographical features. The versions under various titles have different characters and their own meaning. Chapter IV classifies his collections of written conversation into three categories and identifies their relationships by analyzing not also collections of written conversation but also all of his travel records. It is proved that the collections can be divided into the first draft series, the revised series, and Damheonseo series. The revised series further categorized into Damheonyeongi and Yeonhwi series. I found partial evidences on the chronological relationships between the editions of the second series. Furthermore, the significance of Hong Dae-yong's collections was analyzed in comparison with the entire travel records. The fundamental reason and purpose for his compiling the collection and continually revising it in various ways were for communication. He aimed to create an well-written collection of written conversation to publicize his friendship. He wanted to communicate not only with his contemporaries but also with future generations, including his own descendants. In essence, he hoped that his friendship with the Hangzhou scholars would become an everlasting story.Ⅰ. 서론 · 1 1. 연구 목적 1 2. 연구 방법 9 Ⅱ. 홍대용 필담의 배경과 필담집의 존재 양상 · 12 1. 청 거인(擧人)과의 교우 12 2. 다양한 필담집의 존재 양상 18 1) 필담집의 이본 현황 18 2) 개별 이본의 서지적 특징 · 21 3) 필담집 서명의 성격과 의미 53 Ⅲ. 홍대용 필담집의 형성 과정 · 58 1. 홍대용 생전의 편찬과 수정 58 1) 초고본(草稿本) 『간정록(乾淨錄)』의 편찬 64 2) 『간정록』의 수정과 『간정필담(乾淨筆談)』의 편찬 102 3) 『간정필담』 이후의 수정 양상 137 2. 홍대용 사후의 수정과 정리 139 Ⅳ. 홍대용 필담집의 의의 144 1. 필담집 이본의 계열과 상관관계 · 144 2. 연행록과 필담집의 성격과 의미 170 Ⅴ. 결론 176 참고문헌 · 185 【부록】 숭실대본 『乾淨錄』 原文 標點 194 Abstract 295박