분열성 효모 Schizosaccharomyces pombe 내 Aconitase 2에 의한 유전자 발현 조절 연구

학위논문 (박사) -- 서울대학교 대학원 : 자연과학대학 생명과학부, 2021. 2. 허원기노정혜.생물체는 환경 변화를 감지함과 동시에 유전자 발현을 조절하는 효율적인 방식을 고안해왔다. 포유류의 aconitase와 같이 다기능(moonlighting) 대사 효소를 통한 유전자 조절이 대표적인 예이다. 미토콘드리아 TCA 회로 효소로 잘 알려진 aconitase는 세포 내 철이 부족할 경우 이를 인식하고 iron regulatory protein (IRP)로 작용하여 철 항상성과 관련된 mRNA의 발현을 조절한다. Aconitase의 다양한 기능은 박테리아부터 척추동물까지 여러 모델 생물체 내에서 보고된 바 있으나, 분열성 효모 Schizosaccharomyces pombe 내에서는 아직 많이 밝혀지지 않았다. 본 연구팀에서는 분열성 효모 내 aconitase 2 (Aco2)가 미토콘드리아 외에 핵 또는 세포질에도 존재함을 최초로 보고하였고, 미토콘드리아 내 Aco2는 미토콘드리아 단백질의 번역, 핵 내 Aco2는 heterochromatin 형성에 영향을 미친다는 사실을 밝혔다. 본 논문은 이에 대한 후속 연구로, 핵 내 존재하는 Aco2의 또 다른 기능을 찾기 위해 Aco2의NLS (nuclear localization signal)를 제거한 균주(aco2ΔNLS)를 이용하여 전사체 분석(genome-wide transcriptome analysis)을 수행하였다. 야생형 균주와의 유전자 발현양을 비교분석한 결과, Aco2 NLS 결손 균주에서 유전자 발현이 크게 변화하는 유전자군으로 철 흡수 수송체 및 전자전달계 관련 유전자들이 발견되었다. 철은 세포 내 필수적인 원소이나 과다하게 존재할 경우 활성산소를 만들어 세포를 손상시킨다. 따라서 세포 내 철 항상성 유지는 매우 중요하고 철 흡수 유전자들의 발현은 Fep1과 같은 전자억제인자에 의해 철저하게 조절된다. 그러나 Aco2 NLS 결손 균주에서는 철이 부족한 환경이 아님에도 불구하고 Str1, Str3, Shu1과 같은 철 흡수 mRNA의 발현이 증가해 있었다. mRNA decay assay를 통해 Aco2 NLS 결손 균주에서는 철 흡수 mRNA의 분해가 지연되어 세포 내 축적된 것이라는 것을 알 수 있었다. UV crosslinking RNA-IP (CLIP) 실험으로 Aco2가 철 수송 mRNA들과 직접 결합함을 관찰하였고, RNA 분해효소들 중 Rrp6와 상호작용함을 co-IP로 확인하였다. 따라서 핵 내 Aco2는 철 흡수 mRNA들이 RNA 분해효소에 의해 적절하게 분해되도록 도움으로써 세포 내 철 항상성 유지에 기여한다고 생각된다. 또한 Aco2는 세포 호흡과 관련된 유전자들의 발현도 조절한다. 전사체 분석 결과 Aco2 NLS 결손 균주에서 미토콘드리아 내 ATP 합성과 관련된 전자전달계 유전자들의 발현이 크게 감소하는 것으로 나타났다. 전자전달계를 구성하는 단백질 유전자들은 대부분 핵 내 염색체에 코딩되어 있고 일부만 미토콘드리아 DNA에 코딩되어 있다. Aco2 NLS 결손 균주에서는 특히 핵 내 코딩되어 있는 전자전달계 유전자들의 발현이 전체적으로 감소하였고, Qcr2, Cox13같은 전자전달계 단백질의 양도 감소하였다. 세포 호흡이 요구되는 배지(non-fermentable carbon source media) 조건에서Aco2 NLS 결손 균주의 생장이 크게 저해되는 것을 보아, 핵 내 Aco2는 전자전달계 유전자들의 발현을 조절함으로써 세포 호흡까지 영향을 미치는 것으로 예상된다. mRNA decay assay 결과 전자전달계 mRNA들의 분해속도는 야생형 균주에 비해 별 다른 차이가 없었으므로, Aco2가 이 유전자들을 전사 과정에서 조절함을 짐작할 수 있다. 구체적인 조절 기작에 대해서는 추가 연구가 필요하다. 본 논문에서는 분열성 효모 내 Aco2가 핵 또는 세포질에서 철 항상성 유지 및 세포 호흡과 관련된 유전자들의 발현 조절한다는 사실을 밝혔다. 특히 Aco2에 의한 철 흡수 유전자들의 전사 후 조절 기작을 규명하여, 세포 내 철 항상성을 유지하는 새로운 방법을 제시하였다. 다기능 효소로서 진화적으로 보존된 기능과 분열성 효모 Aco2가 갖는 위치적 특성을 고려해볼 때, Aco2가 핵산 또는 단백질들과 상호작용하여 세포 내에서 또 다른 중요한 역할을 할 것으로 기대된다.Organisms have devised an efficient way of regulating gene expression while sensing environmental stress. A unique example is a regulatory mechanism through a moonlighting metabolic enzyme such as mammalian aconitase. Aconitase, well-known as a mitochondrial TCA cycle enzyme, senses iron deficiency and acts as an iron regulatory protein (IRP) in mammals and metazoa, controlling the expression of mRNA related to iron homeostasis. From prokaryotes to mammals, multiple functions of aconitase have been reported. A recent study from our lab revealed that aconitase 2 (Aco2) in Schizosaccharomyces pombe, a fusion protein of aconitase and a mitochondrial ribosomal protein, exists in the nucleus in addition to mitochondria, and that it is required for protein translation in mitochondria and controls heterochromatin formation in the nucleus. More study is in need to unravel the role of Aco2 in the nucleus. Considering the conserved function of aconitase in various organisms, Aco2 is likely to interact with nucleic acids or proteins to regulate gene expression. To investigate the role of nuclear Aco2, phenotypes of aco2 mutant devoid of nuclear localization signal (NLS) (aco2ΔNLS) were examined. Transcriptome analysis revealed that the mutation caused increase in mRNAs coding for iron uptake transporters, such as Str1, Str3, Shu1. mRNA decay assay and RT-qPCR analysis showed that the half-life of iron uptake mRNAs increased in aco2ΔNLS, suggesting that the nuclear Aco2 may function in the degradation of those mRNAs. UV crosslinking RNA-IP (CLIP) analysis revealed that Aco2 directly binds to iron transporter mRNAs. Among exoribonuclease candidates, Rrp6 and Caf1 appear to affect degradation of these mRNAs. Co-IP experiments of Aco2-FLAG with Rrp6-TAP demonstrated that they interact physically. Therefore, it is concluded that nuclear Aco2 facilitates iron uptake mRNAs to be degraded by exoribonucleases such as Rrp6 under iron-sufficient conditions. Aco2 contributes to maintain intracellular iron homeostasis through post-transcriptional regulation of iron transporter genes. From transcriptome analysis and respiration-defective phenotype of aco2ΔNLS mutant, it is hypothesized that nuclear Aco2 may regulate genes involved in cellular respiration. Most of gene expressions for nuclear-encoded electron transport chain (ETC) were decreased by about 2-fold in aco2ΔNLS. mRNA decay assay revealed that the decay rate of ETC mRNAs in aco2ΔNLS did not changed, indicating Aco2 may be involved in transcriptional regulation of ETC genes. Therefore, whether Aco2 interacts with the transcription factors of ETC genes or Aco2 itself regulates the expression of ETC genes as a transcription factor are needed to be demonstrated. This study newly discovered that S. pombe Aco2 regulates genes related to iron homeostasis and cellular respiration. Specially, a new mechanism for maintaining iron homeostasis was revealed that Aco2 regulates the expression of iron-uptake genes at the post-transcriptional level. Given the unique features of the moonlighting enzyme and dual targeting, Aco2 is expected to play another important role in maintaining the life of cells.ABSTRACT i CONTENTS iii LIST OF FIGURES vi LIST OF TABLES viii ABBREVIATIONS ix CHAPTER I. INTRODUCTION 1 I-1. Fission yeast S. pombe as a model organism 1 I-2. A moonlighting enzyme, aconitase 3 I-3. Two types of aconitases in S. pombe 7 I-4. Distinctive features of S. pombe Aconitase 2 7 I-5. Novel functions of Aco2 depending on its intracellular location 10 I-6. Maintenance iron homeostasis in S. pombe 12 I-7. Post-transcriptional gene regulation in eukaryotes 14 CHAPTER II. MATERIALS AND METHODS 15 II-1. Strains and Culture conditions 15 II-2. Yeast transformation 15 II-3. Genomic DNA extraction 15 II-4. RNA preparation & analysis 17 II-4.1. RNA extraction 17 II-4.2. cDNA synthesis and qPCR 17 II-5. Protein preparation & analysis 20 II-5.1. Protein preparation 20 II-5.2. SDS-PAGE gel and Western blotting 20 II-6. mRNA decay assay 20 II-7. UV crosslinking RNA-IP (CLIP) 21 II-8. Chromatin immunoprecipitation (ChIP) 22 II-9. Intracellular iron contents 22 CHAPTER III. RESULTS 23 III-1. Regulation of iron transporter mRNAs by Aco2 23 III-1.1. Transcriptome analysis of aco2ΔNLS 23 III-1.2. Expression levels of iron transporter mRNAs in aco2ΔNLS 23 III-1.3. Transcription of iron transporter genes in aco2ΔNLS 26 III-1.4. Degradation of iron transporter mRNAs in aco2ΔNLS 28 III-1.5. Aco2 domain involved in mRNA decay 29 III-1.6. RNA binding ability of Aco2 32 III-1.6. Searching for interaction partners of Aco2 33 III-1.7. Interaction between Aco2 and Rrp6 33 III-2. Regulation of nuclear-encoded ETC genes by Aco2 37 III-2.1. Comparison of cell growth in different media 37 III-2.2. Transcriptome analysis of downregulated genes in aco2ΔNLS 39 III-2.3. Transcription of nuclear-encoded ETC gene regulators 41 III-2.4. mRNA stability of nuclear-encoded ETC genes 42 III-2.5. Analyzing expression of ETC proteins 43 III-2.6. Aco2 domain required for nuclear-encoded ETC gene regulation 44 CHAPTER IV. DISCUSSION 46 IV-1. Degradation mechanism of iron transporter mRNA 46 IV-2. Specific recognition of iron transporter mRNAs by Aco2 47 IV-3. Transcriptional regulation of nuclear-encoded ETC genes by Aco2 49 IV-4. Mechanisms of dual targeting of Aco2 50 REFERENCES 51 국문초록 55Docto

A study on the characteristics measuring system of multi- batteries in series with inverter discharging load type

IMO 규정에 의해, Nox, Sox 배출량 규제 등의 환경문제가 대두되면서 전기추진선박이 늘어나고 있다. 전기추진선박의 추진용 유도전동기는 각각의 배터리가 직렬로 접속된 다중 배터리 모듈의 양 단자에 연결된 인버터로부터 생성된 교류 전압에 의해 구동된다. 따라서 전원으로 사용하고 있는 배터리의 수명이나 노화를 상시적으로 관리해야 할 필요가 있다. 선박이 운항 중일 때 배터리의 각 셀에 문제가 발생하면 공급전압이 급감하거나 배터리 전체가 단락되어 안전사고로 이어지기 때문에 배터리의 전압, 전류, 온도 등을 검출하여 안전한 범위로 관리해야 한다. 본 논문은 부하전류의 고조파 특성이 다른 2-3레벨 인버터로 구동되는 전동기를 배터리의 방전 부하로 접속하고, 사용하는 배터리 내부의 등가 저항과 리액턴스를 인버터의 레벨에 따라 측정하여 배터리의 노화를 추정하는 직렬접속 다중 배터리 특성 측정시스템의 개발에 관한 연구이다. 또한, 직렬로 접속된 배터리 셀마다 전기화학적 분광법(Electrochemical Impedance Spectroscopy, EIS)에 의한 임피던스 측정을 위하여 각 단위 셀을 회로의 구조적인 변경 없이 순차적으로 미소교류 전류를 주입할 수 있도록 접지 분리형 회로를 가진 EIS 다중 배터리 측정시스템을 구성하였다. EIS 임피던스 측정법은 다양한 주파수의 미소 교류 신호를 중첩한 직류전원을 배터리에 인가하여 주파수별 임피던스를 측정하는 방법이다. 1KHz∼50mHz 주파수 범위의 전원공급에 따라 그려지는 임피던스 도의 저항 성분을 참조하여 노화 정도를 추정할 수가 있다. 또한, 전류 고조파가 노화에 어떻게 영향을 주는지 확인하기 위하여 인버터에 의한 부하 방전을 시키면서 배터리의 임피던스 값을 검출하여 배터리의 노화 상태를 비교·분석한다. |As a result of IMO regulations, environmental problems are emerging, and the number of vessels driven by electric propulsion system are getting increased. Induction motor for propulsion driven by AC voltage output from inverter that connected in each battery module connected in series with each other. Therefore, it is necessary to constantly manage the battery life or aging degree. If a problem occurs in each cell of the battery while the ship is in operation, the supply voltage may be reduced or the entire battery may be short-circuited to lead to a safety accident. Therefore, the voltage, current, and temperature of the battery should be detected and managed in a safe range. This paper is the development of a multi-battery characteristics measurement system that estimates the aging of the battery by measuring the equivalent resistance and reactance inside the battery connected in 2-3 level inverter load with different characteristics in harmonics. In addition, the EIS(Electrochemical Impedance Spectroscopy) multi-battery measurement system circuit is configured for the impedance measurement by the EIS method for each battery with grid-separated type per cell. The EIS impedance measurement method is that of measuring a frequency-dependent impedance by applying a direct-current power source which superimposes micro AC signals of various frequencies on a DC power source to a battery. The degree of aging can be estimated by referring to the resistance component of the impedance diagram drawn according to the power supply in the frequency range of 1 kHz to 50 mHz. In order to check how the current harmonics affect the aging, we measure the impedance value by driving the inverter loads, and compare and analyze the aging state each other.목 차 List of Figures iv List of Tables v Abstract vii 1. 서 론 1.1 연구 배경 및 필요성 1 1.2 연구 목적 2 2. 관련 이론 2.1 배터리 관리 5 2.2 배터리 열화 원인 7 2.3 유도전동기 벡터제어 8 2.3.1 2레벨 벡터제어 11 2.3.2 3레벨 벡터제어 14 2.4 전기화학적 분광법(EIS) 18 3. 다중 배터리 특성 측정시스템 3.1 하드웨어 22 3.1.1 EIS 회로 구성 23 3.1.2 다중 배터리 EIS 임피던스 측정시스템 구성 26 3.1.3 2-3 레벨 배터리 방전용 인버터 구성 29 3.2 소프트웨어 31 3.3 실험 및 고찰 35 3.3.1 다중 배터리 방전 부하 실험 36 3.3.2 다중 배터리 임피던스 측정 39 4. 결론 43 참고문헌 45 감사의 글 48Maste

집단상담 수퍼비전에 의한 초심 집단상담자의 자기대화와 지식구조 변화

학위논문 (박사)-- 서울대학교 대학원 사범대학 교육학과, 2017. 8. 김창대.집단상담은 개인상담과는 다른 방식으로 사람을 치유하고 성장시킬 수 있는 잠재적으로 큰 힘을 갖고 있다. 하지만 집단상담은 다수의 집단원 개인 및 집단원 간의 상호작용과 매우 복잡한 역동이 발생하므로 집단 상담자의 전문성을 갖추기 위해서는 별도의 특화된 교육과 수련이 필요하다. 수퍼비전은 상담에 대한 이론적 지식과 실천적 경험을 통합시키는 과정으로써 상담자 훈련을 위해 가장 많이 활용되고 있는 교육방법 중 하나로 유능한 상담자가 지녀야 할 능력들을 개발하기 위한 필수 훈련 과정이며, 집단상담에서도 초심 집단상담자의 학습에 도움이 되는 것으로 제안되고 있다. 다양하고 복잡한 집단상담 상황을 효율적으로 운영하기 위해서 막대한 양의 정보를 처리하고, 통합하며 활용하는 능력인 인지 복잡성을 갖추는 것이 집단상담자의 핵심적인 역량으로 언급되고 있는데, 인지 복잡성이 발달한 숙련 집단상담자는 빠르게 집단원에 대한 개념화가 가능하여, 종합적 이해와 개입을 하지만, 초심 집단상담자는 인지 복잡성의 발달이 미흡하므로 집단상담 운영에 단조로운 개입과 어려움을 경험한다. 인지 복잡성과 상담자 경력은 정적 상관관계지만, 인지 복잡성의 변화를 확인하기 위해서는 장시간이 필요하고 양적인 측정이 가능한 도구 개발이 되어 있지 않고 개념 정의도 모호하기 때문에 집단상담 수퍼비전을 통해 인지 복잡성의 변화를 보기는 쉽지 않다. 인지 복잡성은 다양한 인지 구조들의 상호 복잡한 연결이므로 일부 선행연구들은 인지구조의 변화를 통해 인지 복잡성을 예측하고자 하였다. 집단상담에서는 인지구조 변화를 측정하기 위해서 그동안 의도, 개념화, 자기대화, 지식구조 등의 변화를 측정하였다. 그중 본 연구는 양적 비교를 통해 인지구조의 변화를 확인할 수 있는 자기대화와 지식구조 변화를 통해 초심 집단상담자들이 집단상담 수퍼비전을 참여하면 인지구조가 어떻게 변화하는지 탐색하고자 하였다. 초심 집단상담자 96명을 무처치 집단인 통제집단, 수퍼비전 동영상 1개를 시청한 실험1 집단, 수퍼비전 동영상 2개를 시청한 실험2 집단에 각각 32명씩을 무선으로 배치하여 실험하였고, 최종 90명을 분석대상으로 하였다. 실험은 사전검사 - 실험처치(집단상담 수퍼비전 동영상 시청) -사후검사 과정으로 진행하였으며, Hines(1993)의 집단상담자 자기대화 범주 기준을 사용하여 집단상담자 자기대화의 사전 사후의 변화를 분석하였고, 집단상담 지식구조 측정은 집단상담 질문지(GTQ)를 활용하여 패스파인더 네트워크 분석을 통해 초심 집단상담자의 사전 사후 변화와 숙련 집단상담자의 지식구조 유사성을 확인하고자 하였다. 연구 결과 집단상담 수퍼비전을 통해 초심 집단상담자에게 높은 비율로 나타나던 관찰 범주의 자기대화가 줄어들고 숙련 집단상담자에게서 높게 나타났던 해석, 질문, 개입 범주의 자기대화가 유의미하게 증가하였다. 또한, 집단과정' 차원의 자기대화도 유의미하게 증가함을 확인하였다. 초심 집단상담자 지식구조는 실험2 집단이 집단상담 수퍼비전 후 개입당 연결 수와 순환 패턴 수, 평균 거리의 유의미한 변화가 나타나 집단상담 수퍼비전을 받으면 초심 집단상담자의 지식구조가 더 복잡해졌다. 또한, 숙련 집단상담자의 지식구조와의 비교를 통해 사전 초심 집단상담자의 지식구조보다 집단상담 수퍼비전 사후 초심 집단상담자의 지식구조가 더 유사해짐을 확인하였다. 본 연구는 집단상담 수퍼비전을 통해 초심 집단상담자가 어떠한 인지구조 변화를 보이는지 구체적 변인을 통해 변화 내용을 검증하였다는 데 의의가 있다. 그 뿐만 아니라, 초심 집단상담자 교육에서 집단상담 수퍼비전의 중요성과 인지구조의 발달 방향을 제시하고, 집단상담자 발달의 효과성 측정의 새로운 도구인 집단상담 질문지와 분석 방법인 패스파인더 네트워크 분석을 소개하였다는 점에서도 의미 있는 시사점을 제공한다.Ⅰ. 서론 1 1. 연구의 필요성 및 목적 1 2. 연구문제 10 3. 용어의 정의 11 Ⅱ. 이론적 배경 14 1. 집단상담자 발달 14 1) 집단상담자 발달모형 14 2) 초심 집단상담자 특성 16 2. 집단상담 수퍼비전 18 1) 집단상담 수퍼비전의 개념 18 2) 집단상담 수퍼비전 연구 20 3. 집단상담자 인지구조 22 1) 상담자 인지 복잡성 22 2) 상담자 인지구조 26 3) 집단상담자 자기대화 29 4) 집단상담자 지식구조 32 Ⅲ. 연구방법 36 1. 연구 참여자 36 2. 연구절차 40 1) 연구절차 개관 40 2) 본 실험 절차 42 3. 실험조작 44 1) 조작도구개발 절차 44 2) 처치도구 구성내용 48 3) 조작확인 결과 50 4. 측정 도구 51 1) 집단상담자 자기대화 측정 51 2) 집단상담 지식구조 측정 54 5. 자료 분석 58 1) 패스파인더 네트워크 58 Ⅳ. 연구결과 61 1. 사전집단 동질성 검증 61 1) 집단상담자 자기대화 동질성 61 2) 집단상담자 지식구조 동질성 62 2. 본 실험 연구결과 63 1) 초심 집단상담자의 자기대화 변화 63 2) 초심 집단상담자의 지식구조 변화 67 Ⅴ. 논의 76 1. 집단상담자의 자기대화 특성 76 2. 집단상담자 지식구조 변화 79 3. 집단상담 수퍼비전의 필요성 82 4. 연구의 의의 83 5. 연구의 제한점 및 후속연구를 위한 제언 85 Ⅵ. 참고문헌 88 Ⅶ. 부록 108 Ⅷ. Abstract 140Docto

The effect of Ca-P coated bovine bone mineral on bone regeneration around dental implant in dogs.

Objectives: Recently the immediate implant placement is a widely accepted surgical procedure. The aim of this study is to evaluate the effect of Ca-P coated bovine bone mineral on bone growth around dental implant. Materials and Methods: Two mongrel dogs were used for this study. After 6 weeks after extraction, the surgical procedure including defect preparation and implant installation was performed. The circumferential peri-implant defect of 5mm depth & 7.5mm diameter was made using a trephine bur. After that, 3.5mm diameter and 15mm length of fixture was installed in the center of the defect. As a result, 2.0mm circumferential gap was made between implant fixture and the surrounding bone. The autogenous particulate bone or Biocera?? were filled into the prepared defect. One animal was sacrificed 4 weeks later and the specimens were harvested to investigate. The other animal was sacrificed 8 weeks later and the specimens were harvested to investigate. Block biopsy was performed to evaluate histologic features. Results: Both group exhibited complete bone-fill clinically. On the autogenous bone graft (control) sites the average of bone-to-implant contact (BIC) was 28.2±19% at 4 week, the average of BIC was 44.9±9% at 8 week respectively. On the Biocera?? (test) sites the average of BIC was 34.6±27% at 4 week, the average of BIC was 27.6±23% at 8 week respectively. On the autogenous bone graft (control) sites the average of bone density was 39.7±21% at 4 week, the average of bone density was 41.7±11% at 8 week respectively. On the Biocera?? (test) sites the average of bone density was 32.7±25% at 4 week, the average of bone density was 37.4±17% at 8 week respectively. The mean percentage of the bone-to-implant contact and bone density were similar. Histologically, both autograft site and xenograft site were harmonized well with bone and showed similar healing appearance. There was no significant difference between autograft site and xenograft site(P>0.05). Conclusion: In case that there existed bone defect of 2mm in peri-implant, we concluded that it was filled with new bone in autograft and xenograft and the result was similar for both cases. The results suggest that Biocera?? can be used as a predictable bone substitute for autogenous bone to augment bony defect around implant fixture.ABSTRACT І. Introduction = 1 Ⅱ. Material and methods = 4 1. Surgical procedures = 4 2. Histologic examination = 7 3. Statistical Analysis = 7 Ⅲ. RESULTS = 9 1. Clinical evaluation = 9 2. Histological evaluation = 9 3. Histomorphometric analysis. = 13 Ⅳ. DISCUSSION = 14 Ⅴ. Conclusion = 18 References = 1

(THE) STUDY ON THE HISTOPATHOLOGIC URINARY BLADDER CANCER

방광이행세포암종은 병리조직학적으로 여러가지 인자들, 즉 병기, 분화도, 림프관 침습유무, 인접한 점막의 변화, 혈관 침습유무, 종양경계의 유형 및 염증반응 등이 환자의 예후에 관계되지만 그 중에서도 예후를 추정하는데 있어서 병기와 분화도가 가장 중요시되고 있으며 그밖에 새로운 방법들이 연구, 이용되고 있다. 그 가운데 증식세포 핵항원(proliferating cell nuclrear antigen; PCNA)과 핵소체 형성체 부위(nucleolar organizer regions; NORs)에 대한 염색 방법은 비교적 간단하고 신속한 방법으로 파라핀에 포매된 조직으로 시행 가능하여 널리 연구되고 있다. PCNA 및 AgNORs 염색은 여러 장기, 즉 피부, 유방, 림프계, 위장관 등의 암종에 적용하여 종양의 병기 및 조직학적 분화도와 비교하여 환자의 예후 추정에 이용 가능성이 있다. 또한 방광이행세포암종에서도 이에 대한 연구가 활발히 진행되고 있고 임상적 응용에 대한 제시를 언급한 보고가 있다. 저자는 1985년 1월부터 1992년 12월까지 이화여자대학 부속병원 비뇨기과를 방문하여 방광경 및 수술을 통해 얻은 조직을 관찰한 결과 방광이행세포 암종으로 진단받은 환자 중 1회 이상 재발한 환자 22명을 대상으로 조직 총 55 생검예를 연구재료로 하였다. 연구방법으로는 통상적인 조직표본에 대한 방광이행세포암종의 조직학적 분화도, 면역조직화학적 염색을 이용한 PCNA염색 및 조직화학적 염색에 의한 AgNORs 염색을 시행한 후 광학현미경적 검색을 하여 다음과 같은 결과를 얻었다. 1. 연속 생검을 시행한 22명의 환자에서 병리조직학적 분화도를 관찰한 결과 분화도의 변화가 없는 경우는 15예, 증가된 경우는 6예, 감소된 경우는 1예로 나타났다. 그 가운데 분화도가 증가된 경우는 등급 Ⅱ에서 Ⅲ로 변화된 경우만 5예 있었다. 1차 생검후 2차 생검된 기간은 총 22예에서 3개월부터 73개월 사이(평균 17개월)였고, 3회 생검한 12예 가운데 2차 생검에서 3차 생검 기간은 3개월부터 41개월 사이(평균 16.1개월)였다. 또한 5회 생검한 1예의 3차 생검에서 4차 생검 기간은 7개월, 4차 생검에서 5차 생검 기간은 4개월이었다. 2. 연속생검을 시행한 22명의 환자(총 55 생검예) 중 17명(40 생검예)에서 PCNA 표지지수 결과 증가된 경우는 12예, 감소된 경우는 4예, 변화가 없는 경우는 1예로, 분화도와 관계없이 증가되는 예가 더 많았다. 3. 연속생검을 시행한 22명의 환자(총 55 생검예) 중 18명(42 생검예)에서 AgNORs 수를 관찰한 결과 수가 증가된 경우는 10예, 감소된 경우는 8예로, 분화도와 관계없이 다소 증가되는 경향을 보였다. 4. 각 분화도에 따른 PCNA와 AgNOR의 차이는 등급 Ⅱ와 Ⅲ간에서 비교 가능하였고, 이때 PCNA는 증가하여 통계적으로 유의하였으나, AgNORs의 변화는 별 차이가 없었다. 5. 조직학적 분화도가 증가된 예는 모두 등급 Ⅱ에서 Ⅲ로 변화된 예로 경과된 기간은 평균 29개월이었고 PCNA 표지지수와 AgNORs 수가 모두 증가된 소견을 보였다. 이상의 결과를 종합하여 보면 방광이행세포암종의 재발에 따른 연속생검 결과 상당수가 병리조직학적 분화도의 변화가 없으나, 증가된 경우에 있어서는 AgNORs 수와 PCNA 표지지수가 증가되는 소견을 보임으로써, 이는 세포의 증식이 진행되어 계속 재발의 여지가 있음을 시사해주며 방광이행세포암종의 재발여부 및 예후를 측정하는데 있어서 병리조직학적 등급과 더불어 PCNA 표지지수와 AgNORs 수에 대한 결과가 도움이 된다는 결론을 얻었다. 그러나 더 많은 예로 장기간 추적 관찰하여 더욱 신뢰성 있는 연구가 필요할 것이다.;The prognosis of transitional cell carcinoma of the urinary bladder is related to many histopathologic parameters; stage, lymph node involvement, grade, abnormalities of the remaining mucosa, presence of vascular invasion, presence of lymphatic invasion, type of the tumor margin, and inflammatory response. The stage and grade are most important prognostic determinators among them, and the other new methods have been studied. Information about the cell proliferation rate in paraffin sections can be obtained by the immunohistochemical assessment of various nuclear proteins, such as proliferating cell nuclear antigen (PCNA) and nucleolar organizer region (NOR) number. Previous studies have shown that PCNA and AgNORs scores are correlated with histopathologic grade and clinical stage in the urinary bladder cancer, and related with the prognosis of the patient (Skopelitou et al; 1992, Park; 1993). This study is purposed for evaluation of the histopathologic grading, PCNA and AgNORs stainings in the sequential biopsies of the recurrent transitional cell carcinoma of the urinary bladder. The present study used total 55 sequential biopsy specimens of 22 cases in recurrent transitional cell carcinoma of the urinary bladder. The histologic assessment was performed, and immunostaining for PCNA (PC-10) was performed using avidin-biotin complex method. The demontration of NORs was applied to the colloid silver staining. The results were as follows; 1. The change of histopathologic grade in 22 cases, recurred transitional cell carcinoma and biopsied sequentially showed 15 cases with no change, 6 cases with increase, and I case with decrease. Among them, increased cases of grade were 5 cases, from grade Ⅱ to grade Ⅲ. 2. PCNA count in 17 cases out of 22 cases showed 12 cases with increase, 4 cases with decrease, and 1 case with no change. Therefore PCNA count was tend to increase independently to the grade. 3. The number of AgNORs in 18 cases out of 22 cases showed 10 cases with increase, and 8 cases with decrease. And also AgNORs scoring was tend to increase independently to the grade. 4. The comparison between PCNA count and AgNORs scoring according to the histopathologic grade was possible between grade Ⅱ and grade Ⅲ, and the changes of PCNA count was increased and statistically significant. But the change of AgNORs scoring was not so different as to statistically significant. 5. The cases of increasing histopathologic grade were all those of change from grade Ⅱ to grade Ⅲ, and the duration of changes was 29 months in average. And all of these cases showed increased PCNA count and AgNORs scoring.목차 Ⅰ. 서론 = 1 Ⅱ. 연구 대상 및 방법 = 3 1. 연구 대상 = 3 2. 연구 방법 = 3 A. 병리조직학적 분화도 = 3 B. PCNA 및 AgNORs 계산 방법 = 4 C. PCNA 및 AgNORs 계산 방법 = 4 Ⅲ. 연구 결과 = 6 1. 연속생검에 따른 방광이행세포암종의 병리조직학적 분화도의 변화 = 6 2. 연속생검에 따른 방광이행세포암종의 PCNA 표지지수의 변화 = 7 3. 연속생검에 따른 방광이행세포암종의 AgNORs 수의 변화 = 8 4. 방광이행세포암종에서 병리조직학적 분화도에 따른 PCNA 표지지수와 AgNORs 수간의 비교 = 10 5. 연속생검을 시행한 방광이행세포암종에서 시간경과에 따른 병리조직학적 분화도, PCNA 표지지수 및 AgNORs 수간의 비교 = 11 Ⅳ. 고찰 = 12 Ⅴ. 결론 = 16 참고문헌 = 18 ―ABSTRACT― = 2

Development of an Music Listening Worksheet Linked to the Principles of Constructivist Teaching and Learning : With a focus on seventh graders

Music appreciation does not mean the acquirement of actual and objective information about a musical piece. One should try to recreate the meanings inherent in the artistic piece by getting exposed to the composer's creative spirit through the performer's artistic expressions. One needs to have spiritual sympathy with the performer and composer to construct his or her own subjective meanings. You cannot say it's an activity of appreciation just to open your ears without mentally preparing to really listen to the piece. In order to appreciate a piece in true senses, you should not only listen to what the composer is trying to say, but catch the concerned clear goals, musical formats, methods of harmony connections and tone colors of the instruments used. Therefore, music appreciation learning goes beyond merely playing music and passing out information about the piece, encouraging the students to listen to all those things mentioned above, sympathize with the performer and composer actively in the process, and construct their own independent meanings out of the piece. Evaluations of the students' acquirement of objective knowledge about the piece and its composer after the class, however, totally fail to encourage the kind of appreciation learning described earlier and result in memory-oriented learning. Although it's true that putting some knowledge into the head is helpful to appreciation, it cannot be the goal of appreciation activities. The goal should be active and aggressive appreciation itself. Independent and active learner-based teaching and learning provides an orientation across all the subjects including music. The Sixth Curriculum first introduced constructivist teaching and learning, which focuses on the students constructing their own knowledge. Over the several revisions of the curriculum, the constructivist teaching and learning gradually expanded itself and received more emphasis in the revised 2007 Music Curriculum, where the area of "Making it a part of everyday life" was added. Those changes have affected the evaluation methods and given birth to performance evaluations, which assess the learning process of knowledge construction. Emerging as a new popular evaluation method in recent years, performance evaluations adopt no conventional approaches to evaluation around the results and try to assess the entire process of learning in an ongoing and accumulative manner. One of the representative performance evaluations, portfolio evaluations make an ongoing and comprehensive evaluation of the students' developmental processes by assessing their series of tasks and results overall. Responding to those recent trends, they have researched and developed a variety of evaluation tools. One of the important portfolio tools in appreciation is a music listening worksheet, whose proper uses can contribute to evaluations and appreciation learning. A music listening worksheet can serve as a guide to self-leading appreciation learning by showing the goals and various musical elements for the students to focus on. It should be accompanied by the activities of constructivist teaching and learning, which seek after active and aggressive learners, so that it can fulfill its goals in respect to self-leading appreciation learning. First developed to target young children, a music listening worksheet has been extended to be applied to elementary school students and then to middle and high school students, claiming more and more grounds for research. But there is an absolute shortage of researches in secondary school. Thus this study set out to develop a music listening worksheet for effective appreciation learning and evaluation targeting seventh graders. Chapter 1 reviewed the goals, contents, procedures, and limitations of the study along with the plans. In Chapter 2, the investigator conducted literature study about music appreciation, the principles of constructivist teaching and learning, and portfolio evaluations and then set up the theoretical foundation upon which to develop a teaching and learning instruction plan and music listening worksheet note based on the principles of constructivist teaching and learning. In Chapter 3, I chose three Western pieces from the appreciation area of the nine music textbooks used by the seventh graders and developed an instruction plan of constructivist teaching and learning and music listening worksheet based on the results of Chapter 2. After those developments, I analyzed the problems by asking a group of incumbent music teachers in secondary school to assess them, supplemented and revised the teaching and learning activities and music listening worksheet according to their assessment, and accordingly raised the level of their perfection. Finally, Chapter 4 provided the conclusions from the literature study and the development of the teaching and learning instruction plan and music listening worksheet. The research findings led to the following conclusions: First, since constructivist teaching and learning pursues the knowledge construction by individuals according to their contexts, the constructivist teaching and learning activities can induce the students to engage in more active and aggressive learning. Secondly, it's critical for the teachers to provide a constructivist environment in constructivist teaching and learning activities so that the students can take active and aggressive part in the activities. Finally, a music listening worksheet presents the essential points the students should pay attention to such as the characteristics and musical elements of the piece and making it a part of everyday life as well as the cognitive information about the piece. It also guides the students through the process, helps them with their appreciation learning process, and evaluates them, thus being a guide to self-leading appreciation learning.;음악 감상은 감상곡에 대한 사실적이고 객관적인 정보의 습득이 아니다. 연주가의 예술적 표현력을 통해서 작곡자의 창조적 정신에 접함으로써 그 예술 작품이 지닌 함축된 의미를 재창조하는 것으로, 감상자가 연주가와 작곡가와의 정신적 교감을 통해 감상자만의 주관적 의미를 구성하는 활동이다. 들으려는 마음의 준비 없이 귀만 열어놓는 것은 감상이라 할 수 없다. 진정한 의미의 감상을 위해서는 작곡가가 무엇을 말하는가에 귀를 기울일 뿐 아니라 그것과 관련하여 들어야 할 뚜렷한 목표, 음악의 구성양식과 화음연결의 방식 및 악기의 음색 등을 모두 들어야 한다. 따라서 감상학습은 음악을 들려주고, 곡에 대한 정보를 전달하는 데서 그치지 말고, 앞서 언급한 모든 것을 듣고 그 과정에서 연주가·작곡가와 적극적인 교감을 이루어 자신만의 주체적인 의미를 구성할 수 있도록 해야 한다. 그러나 수업이 끝난 후에 이루어지는, 감상곡과 작곡가에 대한 객관적 지식 습득 평가는 앞서 언급한 감상학습을 전혀 유도하지 못하고 암기 위주의 학습으로 귀결된다. 머리로 지식을 아는 것은 감상활동에 도움이 되기는 하지만, 그것이 감상활동의 목표가 되어서는 안 된다. 그것은 적극적이고 능동적인 감상 그 자체가 되어야 한다. 주체적이고 능동적인 학습자 중심의 교수-학습은 비단 음악과만의 지향이 아니다. 제 6차 교육과정부터 학습자가 지식을 구성한다는 구성주의적 교수-학습관이 도입되어 교육과정의 개정을 거치면서 점차 확대되어 왔고, 2007 개정 음악과 교육과정은 ‘생활화’라는 영역을 추가함으로써 이를 더욱 강조하였다. 이는 새로운 방식의 평가방법에도 영향을 끼쳐, 지식 구성이 이루어지는 학습의 과정을 평가하는 수행평가를 대두시켰다. 수행평가는 최근 각광받고 있는 새로운 방식의 평가로, 결과를 평가하던 전통적 평가방법에서 벗어나 학습의 전 과정을 지속적이고 누가적으로 평가하고자 한다. 수행평가의 대표적 평가방법인 포트폴리오 평가는 학생들의 발달과정을 지속적·합법적으로 평가하고자 일련의 학습 과업 수집물을 총체적으로 평가하는 것으로써, 역시 이러한 최근의 경향에 발맞추어 다양한 평가도구가 연구·개발 중이다. 감상영역의 중요한 포트폴리오 도구 중 하나로 감상학습지를 들 수 있다. 감상학습지는 적절한 사용에 평가와 동시에 감상학습을 도와줄 수 있다. 감상학습지는 감상을 하면서 들어야 할 목표와 다양한 음악요소를 제시함으로써 자기 주도적인 감상학습의 안내자가 될 수 있다. 자기 주도적인 감상학습을 위한 감상학습지가 제 몫을 다하려면 능동적이고 적극적인 학습자관을 추구하는 구성주의적 교수-학습 활동과 함께 이루어져야 할 것이다. 감상학습지는 처음에 유아를 대상으로 개발되기 시작하여 초등학생 대상으로 확산되었고, 중·고등학생 대상으로 점차 연구의 저변이 확대되고 있으나, 아직 중등 이상에서는 연구가 턱없이 부족한 형편이다. 따라서 본 연구는 중등 1학년(7학년)을 대상으로 하여 효과적인 감상학습 및 평가를 위한 감상학습지를 개발하고자 하였다. 1장에서는 연구의 목적과 내용 및 절차, 제한점을 통해 본 연구의 계획을 밝혔고, 2장에서는 음악 감상과 구성주의 교수-학습 원리, 포트폴리오 평가에 대해 문헌연구를 진행하여 구성주의 교수-학습 원리에 기초한 교수-학습 지도안과 감상학습지에 개발을 위한 이론적 기초를 마련하였다. 3장에서는 7학년 9종 교과서의 감상영역 서양 제제곡 중 3곡을 선정하여 2장의 내용을 바탕으로 구성주의적 교수-학습 지도안과 감상학습지를 개발하였다. 교수-학습 지도안과 감상학습지의 개발 후에는 현직 중등학교 음악교사의 평가를 통해 문제점을 분석하고, 이를 보완해 교수-학습 활동과 감상학습지를 수정하여 완성도를 높이고자 하였다. 마지막 4장에서는 문헌연구와 교수-학습 지도안·감상학습지 개발 과정에서 얻은 결론을 제시하였다. 본 연구를 통해 얻은 결론은 다음과 같다. 첫째, 구성주의적 교수-학습관은 개인의 맥락에 따른 지식의 구성을 추구하고 있기 때문에 구성주의적 교수-학습 활동은 학습자의 보다 적극적이고 능동적인 학습을 유도할 수 있다. 둘째, 구성주의적 교수-학습 활동에서는 교사가 학습자로 하여금 교수-학습 활동에 능동적이고 적극적인 주체로 참여할 수 있도록 구성주의적 환경을 제공하는 것이 중요하다. 셋째, 감상학습지는 감상곡의 인지적 정보 외에도 곡의 특징, 음악 요소, 생활화 등 감상을 하며 들어야 할 주안점을 제시하고 그 과정을 안내함으로써 평가와 동시에 감상학습과정을 도와 자기 주도적인 감상학습의 안내자가 될 수 있다.Ⅰ. 서론 = 1 A. 연구의 목적 = 1 B. 연구의 내용 및 절차 = 3 C. 연구문제 및 용어정의 = 4 D. 연구의 제한점 = 5 Ⅱ. 이론적 배경 = 6 A. 음악 감상 = 6 1. 음악 감상의 정의 및 방법 = 6 2. 음악 감상교육의 필요성 = 8 3. 2007 개정 음악과 교육과정에서 감상영역 = 9 B. 구성주의에 입각한 교수-학습의 원리와 형태 = 10 1. 구성주의적 교수-학습관 = 10 2. 구성주의적 교수-학습의 기본 전제조건 및 주요 교수-학습 원리 = 11 3. 구성주의에 입각한 교사의 역할 = 14 4. 구성주의적 평가의 특성 = 16 5. 구성주의의 한계 = 16 C. 포트폴리오 평가 = 19 1. 포트폴리오 평가의 목적과 특성 = 19 2. 음악교과에서의 포트폴리오 평가 = 21 D. 선행연구 = 24 Ⅲ. 교수-학습 지도안 및 감상학습지 개발 = 28 A. 감상곡 선정 = 28 B. 교수-학습 지도안 및 감상학습지 = 31 1. 교수-학습 지도안 및 감상학습지 개발 계획 = 31 2. 비발디, ≪사계≫ 중「봄」 = 31 3. 베토벤, 교향곡 제9번 「합창」4악장 = 36 4. 슈베르트, 가곡 「마왕」 = 40 C. 현직교사 평가 = 45 D. 수정 교수-학습 활동 = 50 Ⅳ. 결론 및 논의 = 68 참고문헌 = 71 부록 = 76 Abstract = 11

Long-Range Lattice Engineering of MoTe2 by a 2D Electride

Doping two-dimensional (2D) semiconductors beyond their degenerate levels provides the opportunity to investigate extreme carrier density-driven superconductivity and phase transition in 2D systems. Chemical functionalization and the ionic gating have achieved the high doping density, but their effective ranges have been limited to similar to 1 nm, which restricts the use of highly doped 2D semiconductors. Here, we report on electron diffusion from the 2D electride [Ca2N](+)e to MoTe2 over a distance of 100 nm from the contact interface, generating an electron doping density higher than 1.6 x 10(14) cm(2) and a lattice symmetry change of MoTe2 as a consequence of the extreme doping. The long-range lattice symmetry change, suggesting a length scale surpassing the depletion width of conventional metalsemiconductor junctions, was a consequence of the low work function (2.6 eV) with highly mobile anionic electron layers of [Ca2N](+)e . The combination of 2D electrides and layered materials yields a novel material design in terms of doping and lattice engineering

미세 배열 비교 유전체 부합법에 의한 위암 유전체 프로파일링

학위논문(박사) --서울대학교 대학원 :의학과 병리학 전공,2007.Docto

Lifshitz Transition and Non-Fermi Liquid Behavior in Highly Doped Semimetals

The classical Fermi liquid theory and Drude model have provided fundamental ways to understand the resistivity of most metals. The violation of the classical theory, known as non-Fermi liquid (NFL) transport, appears in certain metals, including topological semimetals, but quantitative understanding of the NFL behavior has not yet been established. In particular, the determination of the non-quadratic temperature exponent in the resistivity, a sign of NFL behavior, remains a puzzling issue. Here, a physical model to quantitatively explain the Lifshitz transition and NFL behavior in highly doped (a carrier density of ≈1022 cm−3) monoclinic Nb2Se3 is reported. Hall and magnetoresistance measurements, the two-band Drude model, and first-principles calculations demonstrate an apparent chemical potential shift by temperature in monoclinic Nb2Se3, which induces a Lifshitz transition and NFL behavior in the material. Accordingly, the non-quadratic temperature exponent in the resistivity can be quantitatively determined by the chemical potential shift under the framework of Fermi liquid theory. This model provides a new experimental insight for nontrivial transport with NFL behavior or sign inversion of Seebeck coefficients in emerging materials. © 2020 Wiley-VCH Gmb