A Logistics and operational analysis of the use of fast container vessels on longer distance(transatlantic)

컨테이너 화물량은 세계적으로 연간 9.2%씩 증가하고 있으며, 이는 컨테이너선의 많은 변화를 초래했다. 이와 같은 오늘날의 세계적인 컨테이너선의 변화는 초대형 컨테이너선과 고속 컨테이너선의 발달을 필요로 하게 되었다. 초대형 컨테이너선은 보다 경제적인 화물운임과 보다 효율적인 속도로 해상운송 서비스를 제공하고 있다. 컨테이너선의 발달로 고가의 화물(High value cargo)과 시간을 앞다투는 화물(Time sensitive cargo)등은 고속 컨테이너선을 통해 좀더 신속한 운송이 가능해진다. 이에 대한 수요로 인하여, 이미 여러 나라에서 고속선에 대한 연구가 이루어져 왔으며, 곧 상업화될 예정이다. 이에 본 논문은 고속 컨테이너선의 물류적인 측면의 분석과 운영적인 측면의 분석을 통하여 보다 효율적인 서비스 개시를 위한 방향을 제시하고자 한다.Table of Contents Abstract Introduction Chapter 1. Logistics Analysis 1.1. The Size of Transatlantic Market 1.1.1. Middle Market 1.2. Operating Characteristics of High Speed Sealift ship 1.2.1. FastShip Atlantic, Inc. 1.3. Competitors Situation and Response to HSS 1.3.1. Ocean Carriers 1.3.2. Maritime Ports 1.3.3. Air Carriers 1.3.4. Integrated Express Carriers 1.4. Terminal and Inland Operation 1.4.1. Conventional Terminal System 1.4.2. New Dedicated Terminal System for HSS 1.4.2.1. FastShip Atlantic Dedicated Terminal System 1.4.3. Comparison of Terminal System 1.5. Inland Interface and Transportation 1.6. Value-Added Services Chapter 2. Operational Analysis 2.1. HSS Operating Environment 2.2. Operating Cost Analysis 2.3. Risks of the FastShip Atlantic Inc. 2.4. Profitability Conclusions References Appendix A Abbreviations and Acronym

(the) effect of ketorolac and fentany1 on the emergence characteristics after sevoflurane anesthesia in children undergoing tonsillectomy and adenoidectomy

Sevoflurane은 최근 소아마취에서 사용이 증가하고 있으나 마취 후 각성 흥분(emergence agitation) 증상이 빈번히 발생하여 이에 대한 관리가 중요하게 되었다. 각성 흥분은 비교적 단시간 지속되며 보통의 경우 별다른 치료 없이 증상이 사라지나 심한 경우에는 사고 방지를 위해 진정제를 투여하게 되어 회복실에서의 퇴실이 지연된다. 현재까지의 연구에서 각성 흥분의 원인은 규명되지 않았으나, 각성 흥분의 발생을 감소시키기 위해 여러 방법이 시도되어 왔다. 본 연구에서는 3-10세 사이의 소아를 대상으로 편도와 아데노이드절제술을 위한 sevoflurane 전신 마취 중 ketorolac 0.5 mg/kg, fentanyl 1 ㎍/kg을 단독 혹은 병용으로 투여함으로써 마취 후 각성 흥분의 발생과 회복 시 미치는 영향을 알아보고자 하였다. 총 60명의 환자를 대상으로 연구하였으며, 마취전투약은 하지 않았고, 마취 유도를 위하여 thiopental sodium 5 mg/kg, rocuronium 0.6 mg/kg을 정주, 기관내삽관을 시행하고, 마취유지는 sevoflurane 1-3 vol%, 산소와 아산화질소를 각각 2 L/min으로 투여하였다. 무자위로 15명 씩 네 군으로 나누어 수술 시작 시 대조군(1군)은 어떠한 약물도 투여하지 않았고, 실험군 세 군에는 ketorolac 0.5 mg/kg(2군), fentanyl 1 ㎍,/kg(3군) 그리고 ketorolac 0.5 mg/kg와 fentanyl 1 ㎍/kg(4군)를 각각 투여하였다. 수술 종료 시 sevoflurane과 아산화질소 투여를 중단하고 100% 산소를 4 L/min으로 투여하였으며, 수술 종료 시점부터 첫 번째 기침반사가 나타날 때까지와 기관내관을 발관하기까지의 시간을 기록하였다. 회복실 도착 후 흥분 정도를 평가하고, 통증의 정도는 Objective Pain/discomfort Scale(OPS)과 Faces scale을 이용하여 평가했으며, 퇴실 시점까지의 시간을 기록하였다. 각 군에서 평균 연령, 성별, 평균 체중과 마취 시간에는 유의한 차이가 없었다. 각 군에서 수술 종료 시점부터 첫번째 기침, 기관내관 발관 그리고 회복실에서 퇴실 시점까지 걸린 시간은 유의한 차이가 없었다. 심한 흥분의 발생률은 각 군을 비교한 결과 2군, 3군, 4군 모두에서 1군보다 유의하게 낮았다. 심한 통증의 발생률은 각 군을 비교한 결과 3군과 4군에서 1군보다 유의하게 낮았다. 통증의 정도는 각 군의 Faces scale 점수를 비교한 결과 2군, 3군, 4 군 모두에서 1군보다 유의하게 낮았다. 결론적으로 본 연구에서 소아의 편도와 아데노이드절제술 시 ketorolac 과 fentanyl을 단독 혹은 병용 투여한 군에서 각성 흥분의 발생률이 감소하였으며, 수술 후 통증 조절에도 효과가 있음을 알 수 있었고, ketorolac과 fentanyl의 사용이 각성을 지연시키거나 회복실에서의 퇴실을 연장시키지 않았다.;The rapid emergence and recovery from general anesthesia provided by sevoflurane is associated with a frequent incidence of emergence agitation in children. In this study, we compared the emergence and recovery profiles of patient who received sevoflurane with or without intravenous ketorolac or/and fentanyl. By using a prospective, double blinded design, 60 children 3 to 10 year of age, scheduled for elective tonsillectomy and adenoidectomy were anesthetized with sevoflurane (1-3 vol%) in a 50% N_(2)O/O_(2) gas mixture. Patients were randomized to one of four groups (group 1: sevoflurane only, group 2: sevoflurane + ketarolac 0.5 mg/kg, group 3: sevoflurane + fentanyl 1㎍/kg, group 4: sevoflurane + ketorolac 0.5 mg/kg + fentanyl 1㎍/kg). A blinded observer evaluated each patient using the agitation scale, Faces scale and Objective pain/discomfort scale. There were no significant differences among the four groups regarding age, sex, weight, duration of anesthesia. Recovery and discharge times were not statistically different. The incidence of severe agitation and the scores of Faces scale in the post anesthesia care unit, were significantly less in the group 2, 3 and 4 as compared with the group 1( P < 0.05 >. The incidence of severe pain in the post anesthesia care unit, were significantly less in the group 3 and 4 as compared with the group 1( P < 0.05 ). We conclude that a dose of 0.5 mg/kg of ketorolac, 1㎍/kg of fentanyl or both of them were sufficient to prevent severe emergence agitation and pain in children undergoing tonsillectomy and adenoidectomy with sevoflurane anesthesia.목차 = ⅲ 논문개요 = ⅴ Ⅰ. 서론 = 1 Ⅱ. 연구대상 및 방법 = 3 Ⅲ. 연구결과 = 7 Ⅳ. 고찰 = 11 Ⅴ. 결론 = 17 참고문헌 = 19 Abstract = 2

Effects of Problem Presentation Methods in Elementary Student's Mathmetical Words Problem Saving

본 연구는 국민학교 아동이 수학문장제 문제를 해결하는데 있어서 문제제시방법이 미치는 영향을 알아보는데 그 목적이 있다. 따라서 문장제 해결력을 높이는데 도움을 준다고 밝혀진 그림과 문맥개인화를 이용한 두가지 문제제시방법을 국민학교 2,4,6학년 아동에게 제시하여 각 변인간의 주 효과를 측정하였다. 본 연구를 통하여 밝히고자 하는 문제는 다음과 같다. 국민학교 아동의 수학문장제 해결능력은 문제제시방법 (일반형, 그림형, 개인화형) 에 따라 차이가 있는가 ? 첫째, 국민학교 2학년 아동의 경우에는 어떠한 차이가 있는가 ? 둘째, 국민학교 4학년 아동의 경우에는 어떠한 차이가 있는가 ? 세째, 국민학교 6학년 아동의 경우에는 어떠한 차이가 있는가 ? 위의 연구를 위하여 서울시내의 한 공립 국민학교에서 2학년 2개학급, 4학년 2개학급, 6학년 2개학급 씩 모두 6개학급을 표집하였고 이들 중 180명을 선정하여 각기 다른 9개의 집단에 20명씩 배치하였다. 실시된 과제는 문장제 해결과제였으며 검사도구는 학년별로 일반형, 그림형, 개인화형의 세가지로 총 9개가 쓰였다. 문장제 해결능력 성취도 검사를 통해 얻어진 결론은 다음과 같다. 첫째, 국민학교 2학년 아동의 경우, 문맥의 개인화를 이용한 문제제시방법이 가장 효과적이었으며 (p<0.05) 일반형, 그림형, 개인화형 집단의 순서로 평균점수가 높아지는 경향을 보였다. 둘째, 국민학교 4학년 아동의 경우, 문제제시방법에 따른 문장제 해결능력에는 차이가 없었으나 (p>0.05) 일반형, 그림형, 개인화형 집단의 순서로 평균점수가 높게 나타나는 경향을 보였다. 세째, 국민하교 6학년 아동의 경우, 문제제시방법에 따른 문장제 해결능력에는 차이가 없었으나 (p<0.05) 일반형, 그림형, 개인화형집단의 순서로 평균점수가 낮아지는 경향을 보였다. 따라서 수학문장제 해결능력은 국민학교 저학년 아동일수록 새로운 문제제시방법이 효과적이며 국민학교 고학년으로 올라갈수록 익숙한 형태의 문제제시방법이 효과적임을 알 수 있다.;This Study was to investigate the effect of problem presentation methods in elemantary student's mathematical word problem solving. The major purpose of the study were to investigate the effect of problem presentation methods (standard context. Use a drawing, graph, or a diagram. personalized context) in grade 2, 4, 6. Subject (N=180) were second, fourth, sixth grade students from Seoul urban elemantary school assinged to one of nine treatement condition. The independent variables, the problem presentation methods, consisted of the three levels : standard context. using a drawing, graph, or a diagram. presonalized context. The dependent variables were scores on the prefomance test. In the study using mathematical word problems, results of analysis of variables (ANOVA) on perfomance test scores showed 1) that the presentation of conext personalization method was significantly effective in grade 2. (p<0.05) 2) that the problem presentation methods were ineffective in grade 4. (P>0.05) 3) that the problem presentation methods were ineffective in grade 6. (p>0.05)목차 = ⅲ 논문개요 = ⅴ Ⅰ. 서론 = 1 A. 연구의 필요성 및 목적 = 1 B. 연구문제 = 3 C. 용어의 정의 = 4 Ⅱ. 이론적 배경 = 5 A. 문장제 헤결능력 = 5 B. 문장제 문제 제시방법 = 15 Ⅲ. 연구 방법 = 24 A. 연구대상 = 24 B. 검사도구 = 28 C. 연구절차 = 32 D. 자료 분석 = 33 Ⅳ. 결과 및 해석 = 34 Ⅴ. 결론 및 제언 = 41 A. 요약 및 결론 = 41 B. 논의 및 제언 = 43 참고문헌 = 46 부록 = 49 영문초록 = 8

Research on Digital Video Stabilization Algorithm for CMOS Image Sensor

Maste

(A) Study on Fantastic Expression with Special Reference to Illustration for Children

Childhood is time when sensibility is most severe and strong and for the curiosity about all the things, children ask questions contituously and experience many things so that they can easily acquire much wisdom. Children have mostly self-centered idea and for the poential persecution mania (awareness of damage) produced by the discontent of the realities of life and by the sence of estrangement from the feeling of discomfort, they keep thinking of unrealistic ideas. Therefore, they intend to be compensated for their discomfort mostly by fantasy or imagenation and such illogical forms of idea are a superior privilege which can be procssed only by children. So, when such illogical procession of children's idea is applied to the illustrations for children, understanding on the side of childrens' situation can be acquired. Accordingly with their potential factors for fantastic expression being analised, a new direction towards their sound ideas can be searched and foulud out. A 'fantastic disposition of children' is the very important element that shoud be mostly considered in the several features that should be decorated in the illustrations appeared in fairy tales. It is not the simple descriptive expression in the process of visualizing the contents of a certain story concretely, however it is a very important tonic that is to present illustrations with those combined elements such as proper omission and tension, the atmosphere corresponding to the contents of the original text, the reader's age, creative expression, media, etc.. Such fantastic art is what is based on a spiritual state and to research into the imagination world and specially spontaneous and irrational features of imagination and be concerned about the fantastic composition and expression on the canvas, rather to be a certain particular style. Also, its is considered to be originated from the confidence that the imaginary power as a series of style which appears as being mutually related not only from re-emergence in reality to unrevibable style - l.e., 'the internal eyes' is more important than the real value of existence. Such a style of fantastic(illusionary) art had blossomed in the time of surrealism whose typical masters were Joan Miro, Rene Magritte, etc., and such masters helieved that there is more valuable thing in surrealism than in commonly accepted reality. The most part of their main sources by which they expressed something had come from the dreams and the fantastic atmosphere of childhood or mythological elements or superstition or folkway-like religion, and since such things have a considerabe part of common elements, it is considered that such things will settle children's contradiction in the realities of life or sense of estrangement from discomfort and will improve their potential imagination purely functionally. Therefore, studies on the illusion of illustration for children will be a 'passage of senses' and the 'rings of linkage' which connect between the special world that only children have and the real world of the adult.;아동기는 감수성이 가장 강한 때이며 모든 사물에 대한 강한 호기심 때문에 끊임없이 질문하고 또 체험함으로서 많은 지혜를 습득하게 되는 시기이다. 어린이들은 대단히 강한 자기중심적인 사고를 갖고 있는데 그것들은 결국 현실에 대한 불만이나 욕구의 괴리감들에서 생기는 잠재적 피해의식으로 늘 현실적이지 못한 사고를 계속하게 된다. 그러므로 이들은 주로 공상이나 상상으로 그러한 불만족을 보상 받고자하며 그와같은 비논리적인 사고의 행태는 아동들만이 진행할 수 있는 매우 탁월한 특권인 것이다. 이러한 비논리적인 사고의 진행이 아동을 위한 일러스트레이션에 적응되어질 때 대단히 아동적인 이해를 얻게됨으로, 환상적 표현을 위한 그 잠재요인들을 분석하여 새로운 방향을 모색하여야 한다. '환상성'이란, 그림동화책에 나타나는 일러스트레이션이 갖추어야 할 몇가지 특성중에서 가장 고려되어져야 할 요소이다. 그것은 글의 내용을 구체적으로 시각화하는 과정에서 단순한 서술적 묘사가 아니라 적절한 생략과 긴장, 원문의 내용에 부합되는 분위기, 독자의 연령, 창조적 표현 그리고 매체등의 복합적 요소들과 함께 일러스트레이션을 연출시키는 매우 커다란 활력소이다. 환상적이라는 것은 현실적으로 있을 수 없고 또 예기치 않는 것에 대한 연상적 표현이다. 인간의 주관이 배제된 무의식의 세계와 관련하여 꿈과 현실, 합리와 불합리 등과 같이 서로 다른 이질적 이미지를 높은 차원에서 통합하여 신비롭고 즐거운 환상적 세계를 표현하려는 인류의 끝없는 노력은 그것을 하나의 ism으로 형성하게 하였다. 이 환상미술이란 어떠한 특정 양식이라기 보다는 정신상태에 바탕을 둔것으로 상상력의 세계, 특히 상상력의 자발적/비합리적 특질을 탐구하며 화면의 환상적 구성과 표현에 중요한 관심을 갖는 것이다. 또한 사실적 재현 뿐만이 아니라 비재현적인 양식에 이르기까지 상호 관련되어 나타나는 일련의 스타일로서 상상력 즉, 내면의 눈이 실제적 존재가치 보다 더욱 중요하다는 확신으로 부터 비롯되어진 것이다. 이러한 환상미술의 양식은 현실적 체험을 상상하여 표현한 낭만주의로부터 신화적이고 신비주의적인 해석되어질 수없고 단지 상상되어질 수있는 것만을 표현한 상징주의를 거쳐 인간의 주관이 배제된 무의식의 세계나 꿈과 환상에 대한 탐구를 전폭적으로 기대하여 무한한 상상력의 확장을 주장하고 그 방법론적인 탐구를 요구하는등 꿈과 환상이 실제로 구성적인 지속성을 갖고 있다는 사실을 인정하여 예술을 그 만큼 위대한 영역으로 까지 확대시키려한 초현실주의에 이르러 꽃을 피우게 되는데 그들은 프로이드의 이론에 힘입어 아동의 예술적 표현을 지배하고 있는 심리구조의 퇴행을 즐겨 했는데 이렇게 아동의 심경에 접근하므로써 무의식으로의 접근을 용이하게 이루려 하였다. 결국 초현실이라는 것은 통념적인 현실보다 더욱 참된 가치가 존재한다는 것인데 그들이 표현하는 주된 주제는 대부분 꿈과 어린시절의 환상적 분위기나 신화적 요소 또는 미신, 토속적 신앙을 차용하고 있고 이것은 아동 일러스트레이션과 상당 부분 공통적 요소를 갖고 있으므로, 어린이의 현실적 모순이나 욕구의 괴리를 해소하며 그들의 잠재적 상상력을 순기능적으로 향상시킬 수 있을 것이다. 이렇게 예술에 있어서 외형적인 형태나 창조적 착상등에서 고정되지 않는 유연성을 지니고 있는 환상은 인간의 영혼적 실제와 관련되어 끊임없이 영속되고 변용하는 존재로서 오늘날에는 이전의 것에 대한 새로운 시도(Homage)의 형식으로 표현되어 그 중요성이 뿌리깊게 맥을 이어오고 있다. 인간의 내면세계와 관련되어 끊임없이 영속되어온 이러한 환상성이 부여되는 표현이란 아동을 위한 상상적 이미지의 공간 형성에 보다 효과적일 수 있으므로 본 연구에서는 다소 그 제한영역이 모호한 환상에 대한 표현을 주관적인 원근이나 예기치 않은 개체들의 결합 크기나 색조의 변화와 대비, 모순된 상황설정, 왜곡등으로 정의하여 표현함으로써 새로운 시각의 경험을 통하여 결과적으로 환상력의 증대로 인한 창조적 사고의 발달을 유도해 낼 수 있으므로 아동 일러스트레이션의 환상에 관한 연구는 매우 중요한 가치를 지니고 있으며 앞으로도 깊이를 지닌 끊임없는 연구의 필요와 인식을 요구한다.논문개요 = ⅷ Ⅰ. 서론 = 1 A. 연구목적 = 1 B. 연구방법 및 범위 = 2 Ⅱ. 어린이의 내면적 특성 = 4 A. 어린이의 인지발달 과정 = 4 B. 어린이의 자기중심적 세계 = 5 C. 어린이의 환상세계 = 8 Ⅲ. 아동일러스트레이션과 환상 = 10 A. 아동일러스트레이션의 일반적 의의 = 10 B. 아동일러스트레이션의 역할 = 12 C. 아동일러스트레이션의 환상적 표현 = 13 Ⅳ. 환상적 이미지의 표현 특성 = 16 A. 환상성의 잠재요인 = 16 B. 환상미술과 초현실주의 = 25 C. 환상적 표현의 퇴행적 특성 = 31 D. 환상적 이미지의 표현 = 39 Ⅴ. 환상적 아동일러스트레이션의 작품연출 = 54 A. 작품개요 및 배경 = 54 B. 작품분석 = 56 Ⅵ. 결론 = 77 참고문헌 = 80 ABSTRACT = 8

cAMP 신호전달계가 폐암 세포주에서 HDAC6의 발현을 조절하는 분자기전

학위논문 (박사)-- 서울대학교 대학원 : 의과대학협동과정 종양생물학전공, 2016. 2. 전용성.Stress conditions are correlated with tumor growth, progression and metastasis. Epinephrine signaling is activated during stress conditions. Isoproterenol, an epinephrine analog, binds and activates -adrenergic receptor to stimulate cAMP production and regulate various cellular metabolism and gene expression. -Tubulin is deacetylated by histone deacetylase 6 (HDAC6), which affects the microtubule dynamics to regulate cell migration. This study investigated the mechanism for stress signals to modulate the migration of non-small cell lung cancer cells via regulation of HDAC6 expression. Treatment of H1299 lung cancer cells with isoproterenol decreased the acetylation level of -tubulin and stimulated cell migration. Isoproterenol treatment also increased the expression of HDAC6. Isoproterenol-stimulated cell migration was blocked by knockdown of HDAC6. Treatment with N6-phenyl-cAMP, a selective activator of protein kinase A (PKA), and 8-pCPT-2-O-Me-cAMP (8-pCPT), a selective activator of exchange protein activated by cAMP (Epac), increased HDAC6 expression. Isoproterenol and 8-pCPT increased Rap1 activity, which acts downstream of Epac. Constitutively active Rap1A increased HDAC6 expression and the knockdown of Rap1A decreased isoproterenol-induced HDAC6 expression. Isoproterenol inhibited External signal-activated kinase (ERK) in H1299 cells. Inhibition of ERK increased HDAC6 levels, and the expression of constitutively active MAPK kinase (MEK1) decreased isoproterenol-induced HDAC6 expression. It is concluded that isoproterenol increases HDAC6 expression via PKA/Epac/ERK-dependent pathway, and isoproterenol-induced HDAC6 expression increases the migration of lung cancer cells. This study suggests that stress signal can stimulate the migration of cancer cells by increasing the expression of HDAC6.Introduction 1 Purpose 18 Material and Methods 19 Results 25 Discussion 68 Conclusion 75 References 76 국문초록 81Docto

Drying-Mediated Self-Organization of Inkjet-Printed Soluble Acene on Surface-Modified Dielectrics for High-Performance organic Transistor

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살모넬라 타이피뮤리움을 숙주로 하는 박테리오파지로부터 분리된 엔도라이신의 생물학적 제재로서의 특성 연구

학위논문 (박사)-- 서울대학교 대학원 : 농생명공학부, 2012. 8. 유상렬.항생제 내성균의 출현과 관련하여 박테리아 감염을 저해할 수 있는 항생제 대체재의 개발이 각광받고 있다. 엔도라이신은 박테리오파지의 용균 생활사의 마지막 단계에서 숙주의 세포벽을 분해하기 위해 박테리오파지에 의해 만들어지는 효소이다. 박테리오파지 SPJ2 및 iEPS5의 DNA 라이브러리로부터 세 가지 용해 단백질이 발견되었다. 세 개의 단백질 모두 알려진 단백질과는 상동성이 없으며, 홀린과 함께 작용할 때에 강한 용해 활성을 보였다. 하지만 단백질 발현 정도가 너무 낮거나 대부분이 불용성 상태로 있었으므로 순수분리가 어려워 더 이상의 특성 분석은 되지 않았다. 박테리오파지 SPN1S의 유전자 서열로부터 박테리오파지의 용해 단백질인 홀린, 엔도라이신 및 보조 단백질 Rz/Rz1와 유사한 유전자를 발견하였다. 이 단백질들의 숙주 세균 용해능을 측정한 결과 일반적인 용해 단백질의 특성과 달리 홀린과 엔도라이신의 발현만으론 숙주가 용해되지 않고 세 개의 단백질 모두가 발현되거나 엔도라이신과 보조 단백질 Rz/Rz1가 함께 발현될 때에만 숙주의 성장이 저해되었다. 엔도라이신의 N- 말단에 히스티딘 태그가 붙도록 재조합 단백질을 발현시키고 친화 크로마토그래피를 통해 순수 분리 하였다. SPN1S 엔도라이신은 라이소자임 유사 계열의 superfamily 도메인을 가지고 있으며, 라이소자임 보다 훨씬 큰 용균 활성을 보였다. 외부 막 투과성을 증가시키기 위해 EDTA(에틸렌다이아민 테트라 아세트산)와 같은 킬레이트 물질이 사용됐을 때 SPN1S 엔도라이신의 용균 작용은 크게 증가하였다. 항균 활성은 넓은 산도 및 온도 범위에서 안정하게 유지되었고, 산도 7과 10.5 사이의 범위와 온도 25℃에서 45°C 사이의 범위에서 가장 큰 항균 활성을 보였다. SPN1S 엔도라이신은 측정된 균주 중 대부분의 그람 음성 세균에 대해 항균 활성을 보였지만, 그람 양성 세균에는 효과가 없었다. SPN1S 엔도라이신의 작용 지점은 세포벽의 당 결합 부위이며 라이소자임과 같은 뮤라미다아제의 활성을 보였다. 단백질의 C- 말단에 나선 구조를 가지도록 재조합된 SPN1S 엔도라이신은 외부 막 투과율을 증가시키기 위한 물질 (EDTA) 없이도 항균 활성을 보였다. SPN9CC 박테리오파지의 유전체 분석 결과, P22 계열 박테리오파지 ST104와 대장균 K-12의 프로파지 DLP12의 라이소자임과 상동성을 보이는 엔도라이신을 찾을 수 있었다. SPN9CC 엔도라이신의 C- 말단에 올리고 히스티딘 택이 붙은 재조합 단백질을 분리 정제하였으며, EDTA로 외부 막 투과성을 높인 대장균에 처리하였을 때 강한 용균 활성을 확인할 수 있었다. 37도에서 2시간 동안 처리하여도 SPN9CC 엔도라이신의 활성은 안정하게 유지되고, 넓은 범위의 온도 조건에서 용균 활성을 보였으며 특히 50도에서 가장 높은 활성을 보였다. 중성과 약염기 조건에서 용균 활성을 보이며 최적 산도는 7.5에서 8.5 사이였다. SPN1S 엔도라이신과 유사하게 SPN9CC 엔도라이신은 세포벽의 당 결합 부위를 잘라 세포벽을 분해시키며, 그람 음성 세균에 대해서만 용균 활성이 나타났다. SPN9CC 엔도라이신은 막 투과성을 변화시키지 않은 대장균 대해서도 용균 활성을 보였으며, EDTA와 함께 처리할 때 증가된 용균 활성을 나타냈다. 이상의 결과들은 SPN1S 엔도라이신과 SPN9CC 엔도라이신의 그람 음성 세균의 제어를 위한 항생제 대체 물질로의 발전 가능성을 보여준다.Concerns over drug-resistant bacteria have stimulated interest in developing alternative methods to control bacterial infections. Endolysin, which is phage-encoded enzyme that breaks down bacterial peptidoglycan at terminal stage of phage reproduction cycle, is reported to be effective for the treatment of bacterial infectious diseases. From the DNA libraries of bacteriophage SPJ2 and iEPS5, three different lysis proteins were screened. All three proteins did not have any homology to known proteins, but they showed very strong lysis activity when they were expressed with holin. However, they could not be characterized further because the expression levels were too low or most of them were insoluble, finally they could not be purified. Then, two additional endolysins could be obtained from bioinformatic analyses of the full genome sequences of the newly isolated bacteriophages. The full genome sequence of bacteriophage SPN1S contains genes encoding homologues of holin, endolysin, and Rz/Rz1-like accessory proteins, four phage lysis proteins. The ability of these proteins to lyse an Escherichia coli host cell when overexpressed was evaluated. In contrast to other endolysins, expression of holin and endolysin did not cause lysis, but expression of endolysin and the Rz/Rz1-like proteins, or coexpression of all three proteins was sufficient to cause lysis. The endolysin was tagged with oligo-histidine at the N-terminus and purified by affinity chromatography. The endolysin has lysozyme-like superfamily domain, and its activity was much stronger than that of lysozyme from chicken egg white. The chelating agent, ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA) was used to increase outer membrane permeability and it greatly enhanced the lytic activity of SPN1S endolysin. The antimicrobial activity of endolysin was stable over broad pH and temperature ranges, and was active from pH 7.0 to 10.5 and from 25°C to 45°C. The SPN1S endolysin could kill most tested Gram-negative bacteria, but Gram-positive bacteria were resistant. SPN1S endolysin, like lysozyme, showed muramidase activity that cleaves the glycosidic bond of peptidoglycan.When extra sequences for helix structure was added to C-terminus of SPN1S endolysin, the recombinant protein showed antimicrobial activity against intact DH5α. Similar to SPN1S endolysin, bioinformatic analysis of SPN9CC genome revealed a putative endolysin which had homology with lysozyme of P22-like phage ST104 and E. coli K-12 DLP12 prophage. SPN9CC endolysin was purified with C-terminal oligo-histidine tag. The antimicrobial activity of SPN9CC endolysin was stable at 37°C for two hours, and it was active over broad temperature ranges (from 24°C and 65°C) showing maximal activity at 50°C. At neutral and basic pH, SPN9CC endolysin showed lytic activity and its optimum pH range were from pH 7.5 to pH 8.5. SPN9CC endolysin showed antimicrobial activity against only Gram-negative strains like SPN1S endolysin by cutting glycosidic bond of peptidoglycan. Interestingly, SPN9CC endolysin can lyse intact E. coli, and moreover lysis rate was enhanced in the presence of EDTA as outer membrane permeabilizer. These results suggested that SPN1S endolysin and SPN9CC endolysin have potential as therapeutic agents against Gram-negative bacteria.Abstract ..................................................................................................I Contents...............................................................................................IV List of Figures ................................................................................... VII List of Tables ........................................................................................X I. Introduction.................................................................................１１ Antibiotic resistance and bio-control agents ............................１１ Bacteriophage and endolysin....................................................１３ II. Materials and Methods .............................................................１７ 1. Putative endolysins from phage libraries .........................１７ Bacteriophage propagation and extraction of phage DNA .１７ Phage library construction and screening of lysis genes.....１８ Lysis gene confirmation by sub-cloning .............................１９ Lysis protein overexpression...............................................２２ Lysis protein purification ....................................................２４ 2. SPN1S endolysin .................................................................２５ Bioinformatic analysis.........................................................２５ DNA manipulation ..............................................................２６ Lysis gene confirmation ......................................................２８ SPN1S endolysin purification .............................................２９ Antimicrobial activity assay................................................３０ Effects of pH and temperature on SPN1S endolysin enzymatic activity.................................................................................３１ Antimicrobial spectrum of SPN1S endolysin .....................３２ Target site identification......................................................３３ SPN1S endolysin improvement for introduction into the bacterial cell ...........................…３６ 3. SPN9CC endolysin...............................................................３７ Bioinformatic analysis.........................................................３７ SPN1S endolysin purification .............................................３８ Antimicrobial activity assay................................................４０ Effects of pH and temperature on SPN9CC endolysin enzymatic activity…............................４１ Antimicrobial spectrum of SPN9CC endolysin ..................４３ Target site identification................................４４ III. Results .......................................................................................４７ 1. Putative endolysins from phage libraries .........................４７ Establishment of lysis protein screening system.................４７ Phage DNA library construction and lysis gene screening .４９ Lysis proteins from SPJ2 bacteriophagesub-cloning ........５０ Lysis protein from SPJ2 bacteriophageoverexpression.....５７ Lysis protein from iEPS5 bacteriophagesub-cloning........６１ Lysis protein from iEPS5 bacteriophageoverexpression...６５ 2. SPN1S endolysin ............................７０ Lysis genes of SPN1S bacteriophage ..................................７０ Enzymatic lysis activity of purified endolysin....................７７ Conditions for enzyme function..........................................８２ Antimicrobial spectrum.........................................８４ Target site identification......................................................８６ Endolysin improvement for introduction into the bacterial cell ..................................９０ 3. SPN9CC endolysin.......................................９４ Expression and purification of SPN9CC endolysin ............９４ Lysis activity of SPN9CC endolysin...................................９６ pH and temperature conditions for SPN9CC endolysin ..９９ Antimicrobial spectrum of SPN9CC endolysin ..............１０２ Target site identification...............................１０４ IV. Discussion ..............................................................................１０８ V. References ...............................................................................１１４ 초록 ..............................................................................................１２６Docto

촉진성 GTP 결합 단백질이 HDAC6의 발현에 미치는 영향과 분자기전

학위논문 (석사)-- 서울대학교 대학원 : 협동과정 종양생물학전공, 2011.2. 전용성.Maste

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