발사체 시스템의 하중경감 제어를 위한 받음각 및 옆미끄럼각 추정

학위논문 (석사)-- 서울대학교 대학원 : 기계항공공학부, 2015. 2. 김유단.In this thesis, methods to estimate the angle of attack and the sideslip angle of a launch vehicle using GPS/INS navigation data are proposed. Open-loop, closed-loop, and hybrid load-relief control algorithms are designed to reduce an aerodynamic load on the launch vehicle at ascent phase. From dynamics of the launch vehicle, the equations of the angle of attack and sideslip angle are derived. Kalman filter and sliding mode observer are designed to estimate the angle of attack and sideslip angle. Also, extended Kalman filter using the dynamics and kinematics of the launch vehicle is designed. Numerical simulation is conducted to evaluate performance of each estimator. Using the estimated angle of attack and sideslip angle, the closed-loop and hybrid load-relief control algorithms are proposed. A simple angle of attack controller and nonlinear controller are designed as the closed-loop control method. An attitude proportional-derivative controller is chosen as the open-loop load-relief control method for performance comparison. Nonlinear six degree of freedom model is used for Monte Carlo simulation to analyze the load-relief controllers.Table of Contents Abstract i Table of Contents ii List of Tables iv List of Figures v Chapter 1. Introduction 1 2. Modeling for Ascent Phase of Launch Vehicle 4 2.1 Kinematics of Launch Vehicle 4 2.2 Dynamics of Launch Vehicle 8 2.2.1 Gravitation 9 2.2.2 Thrust 10 2.2.3 Aerodynamics 11 2.2.4 Newton-Euler Equations 13 2.3 Dynamics of Angle of Attack and Sideslip Angle 15 2.4 Wind 17 3. Estimation of Angle of Attack and Sideslip Angle 19 3.1 Kalman Filter 19 3.1.1 Kalman Filter 20 3.1.2 Extended Kalman Filter 23 3.2 Sliding Mode Observer 29 3.3 Numerical Simulations 32 3.4 Summary 40 4. Load-relief Controller 41 4.1 Open-loop Load-relief Method 41 4.1.1 Trajectory Optimazation 41 4.1.2 Attitude Proportional-Derivative Controller 43 4.2 Closed-loop Load-relief Method 44 4.2.1 Angle of Attack Controller 44 4.2.2 Nonlinear Angle of Attack Controller 45 5. Numerical Simulations 50 5.1 Case Design 50 5.1.1 Gain Scheduling 51 5.1.2 Roll Angle Controller 54 5.2 Results 57 6. Conclusion 70 Bibliography 71 Abstract (Korean) 73Maste

Fluorinated Phenylene Unit as a Building Block for High Performance n-Type Semiconducting Polymer

학위논문 (석사)-- 서울대학교 대학원 : 재료공학부(하이브리드 재료), 2013. 2. 조원호.Intense research efforts have been devoted to the development of p-type semiconducting polymers for OFETs due to their synthetic accessibility, whereas n-type polymer semiconductors have been scarcely reported, although realization of air-stable and solution-processable n-channel polymers is important to the function of p-n junction diode, organic photovoltaics, and complementary organic circuits. Herein, we report the synthesis and n-channel transporting property of copolymers composed of diketopyrrolopyrrole unit and fluorinated phenyl unit, where the number of fluorine substitution varies. When the effect of the number of fluorine substitution on the n-channel transporting property is examined, it reveals that the polymer with four fluorine substitution exhibits the best n-type charge transporting behavior with an electron mobility of 1.71 cm2•V−1•s−1.Chapter 1 Introduction 1 Chapter 2 Experimental 5 2.1 Materials 5 2.2 Synthesis of monomers 5 2.3 Synthesis of polymers 9 2.4 Characterization 12 2.5 Device fabrication and measurements 13 Chapter 3 Results and Discussion 14 3.1 Synthesis and Characterization 14 3.2 Electrochemical properties 14 3.3 Optical properties 15 3.4 Calculated dipole moments of the polymers 15 3.5 Organic field effect transistors performances 24 3.6 Molecular orientation 32 3.7 Discussions 38 Chapter 4 Conclusions 41 Bibliography 42 Korean Abstract 47Maste

'시적 화자-되기'를 활용한 한국 현대시교육 연구

학위논문 (석사)-- 서울대학교 대학원 : 국어교육과(한국어교육전공), 2015. 2. 윤여탁.본 연구는 외국인 고급 학습자를 위한 한국 현대시교육에서 시적 화자-되기를 활용한 교수-학습을 제안하고자 한다. 학습자는 시적 화자가 되어 공감함으로써 시적 화자의 발화 내용인 시 텍스트를 풍부하고 생생하게 체험하며, 자기 자신을 돌아볼 수 있다. 이를 시적 화자-되기라고 규정하고, 교육적으로 활용하는 방안을 모색하였다. 현재 한국어 문학 교육에서는 현대시를 학습 자료로 해서 수업이 이루어지고 있지만 학습자들을 수동적인 위치에 놓고 시의 내용을 전달하거나 시어를 학습하는 것에 그치는 경우가 많다. 그 결과 학습자들은 수업이 지루하다고 여기는 등 만족도가 높지 않은 편이다. 따라서 학습자들의 참여를 높이고 텍스트와의 연계를 강화하여 시에 대한 이해를 심화시켜줄 수 있는 활동 중심의 현대시 수업이 필요하다고 보았다. 특히 시 텍스트의 발화 주체인 시적 화자를 중심으로 시를 읽고 화자에게 감정이입하거나 거리를 두며 활동하는 것이 학습자 중심의 시적 체험을 심화시킬 수 있는 열쇠라고 여겼다. 시 텍스트를 발화라고 볼 때, 시적 화자는 발화의 주체로서 시 텍스트의 성격을 결정짓는 핵심적인 위치에 있다. 그러므로 시적 화자를 따라가면서 시 텍스트 전체를 이해할 수 있는 것이다. 또한 시적 화자-되기의 요소를 화자의 관점 취하기, 적극적으로 상상하기, 그리고 화자에게서 거리 두기로 제시하였다. 그리고 이를 토대로 대학원에 재학 중인 유학생 5명을 대상으로 1회의 예비조사를 실시한 뒤, 언어 교육원의 고급 학습자 약 20명을 대상으로 네 차례의 본 조사를 실시하여 시적 화자-되기의 가능성과 한계를 살펴보았다. 학습자들은 시적 화자의 정서와 의견을 재현하는 시적 화자 중심의 되기, 화자와의 대화를 통해 학습자의 상상으로 화자의 정서를 추론하거나 의견을 조정하는 대화 중심의 되기, 그리고 학습자 자신의 관점으로 화자를 판단하고 자신과 비교하여 자기에 대한 이해와 반성을 하는 학습자 중심의 되기로 그 양상을 분류할 수 있었다. 그리고 학습자의 시적 화자-되기의 특성과 한계점도 살펴보았다. 위의 시사점을 바탕으로 하여 시적 화자-되기를 활용한 한국 현대시 교수-학습의 내용과 방법을 구안하였다. 먼저, 시적 화자-되기에 적합한 텍스트는 1인칭 화자의 체험을 서술적으로 묘사한 시 텍스트였다. 또한 학습자가 텍스트를 벗어나 자의적인 상상이나 생략을 하지 않도록 시 텍스트의 내용을 충실하게 반영할 수 있도록 해야 한다는 것, 그리고 활동이 활발하게 일어날 수 있도록 언어적 수준이나 성격과 같은 개인적인 요인 등에 따른 학습자의 조건과 교사의 비계(scaffolding) 역할에 대한 고려도 필요하다는 것을 알게 되었다. 그리고 학습자가 텍스트와 관련을 맺어 화자를 개별적이고 독립적인 인물로 표상화하고 시적 화자와의 정서적 공유를 통해 시 텍스트 체험을 하며, 그것을 바탕으로 자기를 돌아보는 것을 교수-학습의 내용으로 제시하였다. 또한 외국어 문학교육에서 독자-반응 이론을 적용한 교수-학습 방안인 발전 모델을 참조하여 교수-학습 방법을 제시하였다. 이는 학습자가 시 텍스트를 꼼꼼히 읽음으로써 시적 화자를 파악하고 구체적인 인물로 설정하는 것, 시적 화자의 관점을 취하고 그와의 정서적 공명 가운데 시에 형상화된 화자의 느낌과 경험을 생생하고 빠짐없이 다시 발화하는 것, 그리고 더 나아가 시적 화자와 학습자를 비교함으로써 학습자 자신에 대해 숙고하는 것이다. 한국 현대시교육에서 외국인 학습자들이 수동적으로 시의 내용을 파악하는 수준에서 그쳤다면, 본 연구에서는 그들의 경험을 인정하고 그것을 적극 활용하여 외국인 학습자들이 주체적이고도 능동적으로 활동하는 수업이 가능하다는 것을 밝히고자 하였다. 이것은 시적 화자라는 인물에 주목하여 그의 상황, 느낌, 경험을 상상함으로써 학습자들이 보다 풍부한 시적 체험을 하고, 더 나아가 자기를 돌아보는 것에까지 이르도록 이끄는 한국어 문학 수업이 될 것이다. 이는 외국인 학습자를 대상으로 하는 한국 현대시교육에서 시적 화자를 활용하여 학습자 중심의 수업을 전개할 수 있는 가능성을 제시하고 교수-학습의 방법적인 틀을 마련했다는 점에서 의의를 지닌다.국 문 초 록 ⅰ 차 례 ⅲ Ⅰ. 서론 1 1. 문제 제기 및 연구 목적 1 2. 연구사 검토 3 3. 연구 대상 및 연구 방법 9 Ⅱ. 시적 화자-되기의 개념과 교육적 활용 15 1. 시적 화자-되기의 개념과 요소 15 (1) 시적 화자-되기의 개념 15 (2) 시적 화자-되기의 요소 21 ① 관점 취하기 22 ② 상상하기 23 ③ 거리 두기 25 2. 시적 화자-되기의 교육적 적용 방안 26 (1) 시 텍스트 이해에서 화자의 위상과 시적 화자-되기 26 (2) 시적 화자-되기를 위한 발전 모델의 개념과 적용 29 3. 한국 현대시교육에서 시적 화자-되기의 의의 34 (1) 주체적인 한국 시 감상 능력의 향상 35 (2) 화자와의 공감을 통한 시적 체험의 심화 36 (3) 화자의 타자성에 터한 자기 성찰 38 Ⅲ. 학습자의 시적 화자-되기의 양상 41 1. 시적 화자 중심의 되기 46 (1) 화자의 정서 재현 47 ① 특정 상황에 처한 화자의 정서 47 ② 시적 대상으로부터 촉발된 정서 50 (2) 화자의 의견에 대한 수긍과 재기술 56 2. 시적 화자-학습자간 대화 중심의 되기 59 (1) 화자의 정서와 상황에 대한 상상적 추론 60 (2) 화자의 발화에 대한 의미 분석과 조정 64 3. 학습자 중심의 되기 67 (1) 화자와의 비교를 통한 평가 68 (2) 문화적인 맥락에서의 검토 71 4. 학습자의 시적 화자-되기의 특성 및 한계 75 Ⅳ. 시적 화자-되기를 활용한 한국 현대시교육의 설계 85 1. 시적 화자-되기를 활용한 한국 현대시교육의 목표 85 2. 시적 화자-되기를 활용한 한국 현대시교육의 내용 87 (1) 화자의 표상화 87 (2) 화자 지향의 정서적 공명 89 (3) 화자와의 관계 검토와 재인식 90 3. 시적 화자-되기를 활용한 한국 현대시교육의 방법 92 (1) 시적 화자-되기를 활용한 교수-학습의 전제 92 ① 시 텍스트의 요건 93 ② 학습자의 조건과 교사의 역할 95 (2) 시적 화자-되기를 활용한 교수-학습의 방법 98 ① 텍스트 이해를 통한 화자의 탐색 99 ② 이미지 형성을 통한 화자의 구체화 101 ③ 경험 재구성을 통한 화자와의 소통 확대 103 ④ 상호 객관화를 통한 성찰적 자기이해 109 Ⅴ. 결론 113Maste

Kants Theorie der Kausalitat

이란 철학적 주제는 철학사를 꿰뚫어 여러 영역에서 여러가지 방식으로 되풀이되어 온 주제이다. 전통적으로 형이상학의 한 주제였던 이 문제는 근세이후 자연과학의 발전 속에 자연과학과 밀접한 연관을 갖게 되었고 사회, 역사적인 영역에서까지 이란 문제로 정식화되었다. 칸트도 이 문제를 자기철학 전체를 통해 진지하게 탐구한 철학자 중의 한사람이다. 그는 제3안티노미에서 자연필연성과 자유를 어떻게 조화시킬 수 있을 것인가 하는 형태로 이 문제를 정식화 시킨다. 한편으로 뉴튼 자연과학이 자연필연성을 확고하게 확증했음을 부정할 수 없고, 다른 한편으로 인 도덕법칙의 존재를 부정할 수 없으며, 따라서 그 존재근거로서의 자유를 인정하지 않을 수 없는 칸트로서는 누구보다도 이 문제를 심각한 문제로 여긴다. 이 문제와 연관해서 칸트철학의 전체모습을 조망해 보면 크게 두가지의 중첩된 대립쌍들이 존재함을 어렵지 않게 알 수 있다

A Study on the Application of the First Sale Doctrine for the Resale of Digital Works

학위논문 (석사)-- 서울대학교 대학원 : 법학과(지식재산전공), 2015. 8. 정상조.특허, 상표, 저작권 등 지적재산권 전반에서 인정되는 권리소진이론은 권리자의 배타적 권리 보장과 이용자의 공정한 활용 사이의 조화를 위하여 도입된 법리이다. 우리나라 저작권법에서는 명시적인 규정을 두어 저작물에 대한 저작권자의 배타적 권리에도 불구하고, 저작권자가 일단 판매에 동의한 저작물에 대하여는 더 이상 저작권자의 배포권이 미치지 않는다는 원칙을 인정하고 있다. 그런데 이러한 법리는 도입 당시의 상황에 비추어 볼 때, 유체물의 양도에 의한 거래를 전제로 하고 있어 인터넷 다운로드 등을 통한 디지털 저작물의 거래에 대하여도 그 적용을 인정할 수 있는지 문제된다. 디지털 저작물에 대하여, 유형적인 매체에 의한 권리이전방식에 대해서는 기존의 최초판매원칙을 그대로 적용하는 데에 대하여 이론의 여지가 없을 것이나, 비유형적인 매체에 의하는 경우 즉 인터넷상 전송 방식에 의한 거래에 대하여는 많은 논의가 있어왔다. 본 논문에서는 각국에서 인정되는 권리소진이론의 연혁과 적용요건 및 효과에 대하여 살펴보고 최신 판례를 통하여 디지털 저작물의 재판매에 대한 동 원칙의 적용가능성과 재판매시장에 대한 글로벌 기업들의 모색에 대하여 살펴본다. 최초판매원칙의 적용여부에 대하여 미국에서는 먼저 최초판매(first sale)이 진정으로 발생한 것인지, 즉 저작권자로부터 권리양수인으로의 제1 양도행위가 판매인지 라이센스 계약에 의한 것인지를 검토한 후 전자에 대하여서만 최초판매원칙이 적용된다고 하였다. 그런데 거래의 성격을 판매로 볼 것인지, 라이센스에 의한 권리이전으로 볼 것인지에 대하여 명확한 기준이 확립되어 있지 않은 관계로 이를 판단하는 법원의 입장도 일관되어 있지 않다. 만일 거래의 성격을 판매로 보아 first sale이라는 점이 인정되더라도 소진되는 권리는 배포권 뿐이므로, 저작물을 복제하여 그 복제물을 배포하는 행위는 저작권자의 권리를 침해하는 것이라고 보았다. 그리하여 인터넷상 다운로드 방식으로 일어나는 디지털 저작물의 거래의 경우에는 다운로드 당시 복제를 필히 수반하게 되고, 양도된 저작물은 원본이 아닌 복제물이 되는 것이고 이에 따라 판매자와 구매자의 저장장치에 저작물이 병존하게 되어 저작권자의 복제권과 배포권을 침해하는 결과가 발생하게 되는 것이다. 그런데 유럽에서는 인터넷을 통한 다운로드의 방식으로 거래되는 소프트웨어의 경우에 무제한의 기간 동안 이용자에게 라이센스를 주는 점, 대가 관계에 있는 점, 일회성 지불이라는 점을 들어, 당해 거래에서는 라이센스가 아닌 판매가 일어난 것으로 판단하였다. 이에 따라 저작권자의 권리는 소진된 것이고, 그 이후의 재판매에 대하여는 저작권자가 관여할 수 없다고 판시하였다. 이러한 미국과 유럽의 논의를 국내에 적용할 경우 현행 저작권법의 규정상 미국 법원의 견해와 결론을 같이 할 것으로 예상된다. 국내 저작권법 규정에 의하면 유형의 매체로 거래되는 디지털 저작물의 거래에 대해서는 배포의 개념을 적용하여 최초판매원칙을 적용할 수 있을 것이다. 이에 반해 유형의 매체 없이 온라인상 다운로드 방식으로만 거래되는 디지털 저작물의 경우는 전송에 해당되므로 최초판매원칙을 적용할 수 없게 된다. 그러나 이러한 기존의 최초판매원칙은 유형물에 고정된 형태로 거래되는 저작물을 대상으로 도입된 것이라는 연원에 매여, 디지털 전송 방식이 보편화되고 있는 거래환경을 외면한 채 원구매자가 합법적으로 구매한 디지털 저작물에 대한 동 원칙의 적용을 부정하여 재판매를 무조건 금지하는 것은 부당하다고 생각된다. 이는 유럽사법재판소의 결정과 배치되는 것으로 국제적인 조화와도 동떨어지는 결과를 초래할 것이다. 따라서 디지털 전송 방식으로 이루어지는 거래에도 최초판매원칙의 적용을 인정할 필요가 있다. 우리나라 현행 저작권법 제20조 단서 규정을 새겨볼 때, 디지털 전송에 의해 거래되는 저작물 파일이 해당 저작권자의 허락을 받아 판매 등의 방법으로 거래에 제공된 저작물의 원본이나 그 복제물 자체에 해당한다고 보기는 어렵다. 그러므로 모든 형태의 디지털 저작물 거래에 대하여 최초판매원칙을 인정하는 방향으로 해석하여야 한다는 견해도 의미가 있다고 본다. 한편 법리적으로 최초판매원칙에서 더 나아가, 현실에 부합하는 최초다운로드원칙을 인정할 필요성도 인정된다. 최초다운로드원칙은 디지털 환경의 기술적인 측면을 고려하며 다운로드 시점과 소유권의 관계를 명확히 하여 디지털 시대에 적합한 법리적 기준을 제시할 수 있다. 디지털 저작물에 최초다운로드원칙을 적용하는 것은 저작권자로부터 전송받은 자가 제3자에게 재전송하는 것은 허용하되, 저작물을 제3자에게 전송하는 동시에 저작권자로부터 처음 전송받은 자의 저장 장치로부터 디지털 저작물을 삭제하도록 하는 규정을 요한다고 할 것이다. 이러한 기술적, 법제적인 뒷받침과 더불어 저작권자와 이용자 모두의 조화로운 이익을 위하여 ReDigi의 비즈니스모델 뿐만 아니라 Amazon과 Apple의 재판매시장 구축을 위한 특허 등에 의한 새로운 시도를 적극 인정하고 이에 대한 규제를 도모하는 것이 바람직한 방향일 것이라 생각한다.제 1 장 서론 제 1 절 연구의 목적 제 2 절 연구의 범위 제 2 장 권리소진이론 제 1 절 권리소진이론의 개념 및 근거 Ⅰ. 개념 Ⅱ. 이론적 근거 1. 독일에서의 전통적 논의 2. 미국에서의 논의 및 검토 제 2 절 각국에서의 이론발전과정 Ⅰ. 독일의 권리소진이론 1. 입법의 배경 2. 적용 요건 3. 효과 Ⅱ. 미국의 최초판매원칙 1. 입법의 배경 2. 관련 주요 판례 3. 적용 요건 4. 효과 Ⅲ. 한국의 권리소진이론 1. 입법의 배경 2. 적용 요건 3. 효과 Ⅳ. 소결 제 3 절 디지털 시대의 도래와 기존 이론의 문제점 Ⅰ. 디지털 저작물의 개념 및 특성 1. 디지털 저작물의 개념 2. 디지털 저작물의 특성 3. 디지털 환경에서의 저작권 보호방향 Ⅱ. 디지털 저작물의 재판매에 대한 기존 이론의 문제점 1. 유형의 매체로 거래되는 디지털 저작물의 경우 2. 유형의 매체로 거래되지 않는 디지털 저작물의 재판매 가능성 제 3 장 디지털 저작물에 대한 권리소진이론의 적용에 관한 유럽 및 미국의 입장 제 1 절 유럽의 지침과 최신 판례의 동향 Ⅰ. 유럽연합 2001년 저작권지침 및 2009년 컴퓨터프로그램 보호지침 Ⅱ. 유럽사법재판소의 Oracle 사건 판결 1. 사건의 개요 2. 법원의 판단 3. 본 판결의 의의 및 향후 전망 제 2 절 미국의 입법례와 최근 판결의 동향 Ⅰ. 미국의 1998 DMCA 및 디지털 최초판매원칙 도입에 대한 논의 1. 디지털 밀레니엄 저작권법의 제정 2. 유형의 매체로 거래되는 디지털 저작물에 대한 최초판매원칙의 인정 문제 3. 유형의 매체로 거래되지 않는 디지털 저작물에 대한 디지털 최초판매원칙 도입에 대한 논의 Ⅱ. Vernor 사건 판결 1. 사건의 개요 2. 법적 쟁점 3. 법원의 판단 4. 본 판결의 의의 Ⅲ. ReDigi 사건 판결 1. 사건의 개요 2. 법적 쟁점 3. 법원의 판단 4. 본 판결의 의의 제 3 절 유럽 법원 및 미국 법원의 판례 비교 Ⅰ. 유럽 법원의 태도 Ⅱ. 미국 법원의 태도 Ⅲ. 양자의 비교 제 4 절 디지털 최초판매원칙의 국내 적용가능성 Ⅰ. 국내에서의 디지털저작물에 대한 최초판매원칙의 적용 가능성 1. 저작권법상 배포 개념에 대한 연혁 2. 구별 개념 3. 배포의 개념 4. 제20조 단서에 의한 배포권의 소진 5. 디지털 저작물의 거래에 대한 현행 국내법규 적용의 한계 Ⅱ. 디지털 최초판매원칙과 새로운 해석의 필요성 1. 디지털 전송을 배포 개념에 포함하자는 해석론 2. 디지털 환경을 반영한 새로운 해석의 필요성 3. 검토 제 4 장 디지털 환경에서 권리소진이론 적용의 확장 및 발전방향 제 1 절 디지털 저작물 재판매 문제의 해결방안 Ⅰ. 법리적 검토 1. 최초다운로드원칙의 도입 2. 일시적 저장의 문제 Ⅱ. 경영상의 대안 1. 이익배분의 문제 2. 가격기준의 제공 및 차별화 Ⅲ. 기술적 보호조치의 강화 1. 디지털 저작권 관리 시스템 2. 워터마킹 및 포렌식 워터마킹 기술 3. 동기화 기술에 의한 전송물의 삭제 조치의 가능성 4. 신뢰 컴퓨팅 환경 구축 제 2 절 디지털 저작물 재판매 시장을 대비한 각 기업의 새로운 시도 Ⅰ. 다운로드 방식에서 클라우드 스트리밍 방식으로 1. 새로운 플랫폼의 출현-디지털 음원 스트리밍 시장 경쟁 2. 클라우드 스트리밍 서비스의 장점 Ⅱ. 디지털 저작물의 재판매시장 구축을 위한 모색 1. 아마존의 특허출원 2. 애플의 특허출원 3. ReDigi 2.0 ? 클라우드 기반의 재판매방식 도입 4. 소결 제 3 절 디지털 저작물 재판매 시장의 발전방향 제 5 장 결론 참고문헌 AbstractMaste

붉은색 동충하초 (Cordyceps militaris) 유래 sn-1 specific triacylglycerol lipase의 cDNA클로닝 및 발현

학위논문 (석사)-- 서울대학교 대학원 : 농생명공학부, 2014. 8. 장판식.Lipase(triacylglycerol acylhydrolase, EC 3.1.1.3)는 triglyceride의 ester 결합의 가수분해 및 합성을 촉매하는 효소로서 생물 산업에서 주목 받고 있는 효소 중 하나이다. 선행연구로부터 동충하초 유래 lipase를 분리 및 정제하여 특성을 규명한 결과 triacylglycerol의 sn-1 위치에 특이적으로 작용하는 위치특이적 효소임을 규명하였다. 자연계에 거의 발견되지 않은 sn-1 specific lipase를 산업적으로 적용 시 다양한 생리활성을 지닌 재조합 유지를 고순도로 개발할 수 있을 것이며, 유지를 구성하는 지방산을 규명하는 등 학문적으로 중요한 가치를 지닌다고 할 수 있다. 그러나 분리?정제된 lipase의 수율이 2% 대로 매우 낮아 본 연구에서는 cDNA 클로닝을 통한 E. coli 및 베큘로바이러스 발현 시스템을 이용하여 동충하초 유래 lipase를 발현하고자 하였다. 정제된 효소의 단백질을 ESI-MS/MS를 통하여 동정한 결과, 동충하초 유래 extracellular lipase의 genome sequence와 높은 상동성을 가지는 것으로 확인하였으며, 이를 통해 동충하초 내 lipase gene을 예상하였다. Total RNA추출을 통해 cDNA를 합성을 진행하였으며, T-vector에 subcloning을 진행함으로써 동충하초 유래 extracellular lipase의 cDNA서열을 확보할 수 있었다. PCR 결과 1,743bp 부근에서 lipase의 유전자가 증폭됨을 확인할 수 있었다. 증폭된 lipase 유전자를 3가지 벡터 (1) pET-29b(+) (2) pET-26b(+) (3) pColdⅢ 에 삽입하였으며, 단백질 발현을 위해 다음과 같은 4종의 Strains (1) BL21(DE3) (2) C41(DE3) (3) C43(DE3) (4) Origami(DE3)을 사용하였다. 그 결과 단백질 발현이 된 E. coli system의 경우 상당수가 insoluble 형태로 존재하였으며, Western blot을 통해 soluble 형태로 일부 발현이 되는 것을 확인하였다. 그러나 활성 측정 결과, 활성을 나타내지 않는 것으로 판명되었다. 동충하초 유래 lipase의 경우, eukaryotic lipase로서 E. coli 발현시스템에서 활성형으로 발현되기에는 많은 제약점을 가지고 있는 것으로 판단된다. 따라서 eukaryotic lipase의 발현에 보다 적합한 진핵 생물 발현계인 베큘로바이러스 발현시스템을 이용하여 단백질을 발현시키고자 하였다. 전이벡터로는 pDualBac을 사용하였으며 동충하초 lipase유전자를 삽입함으로써 재조합 전이벡터를 구축하였다. 재조합 바이러스를 Sf9 세포에 접종시킨 후 발현 양상을 확인하였으며, p-NPP assay를 통해 wild type의 AcMNPV ((-)control)와 비교 시 활성을 갖는 것으로 확인하였다. 발현된 단백질의 특성을 분석하고자 kinetic parameter를 측정하였으며, 그 결과 Vmax, Km, kcat 값은 각각 0.934 μmol?min-1?mg-1, 0.162 mM, 0.79 min-1 로 나타났다. 촉매효율상수 (kcat/Km)는 4.87 min-1?mM-1로 확인되었다.In the preliminary study, it was revealed that a lipase from Cordyceps militaris possesses a sn-1 positional specificity. Few lipases are active at the only sn-1position of the triglyceride structure, whereas most lipases act preferentially on ester bonds at the sn-1,3 or random position. Sn-1 positional specific lipase is significant in the academic and industrial aspects. In this study, cDNA cloning and searching for an optimal expression system of sn-1 positional specific lipase from Cordyceps militaris is the objective to solve a low level of protein yield (2.47%) from a purification of native Cordyceps militaris. The ESI-MS/MS analysis was applied to identify the purified lipase from Cordyceps militaris. As a result, it was found out a high level of homology with extracellular lipase from Cordyceps militaris. Total RNA extraction from Cordyceps militaris was followed by the synthesis of single-stranded cDNA. A gene of Cordyceps militaris lipase (CML) was amplified with an approximate size of 1,743 bp by PCR and used for subcloning to obtain a cDNA sequence of Cordyceps militaris lipase (CML). Amplified CML gene was inserted into plasmids (1) pET-29b(+) (2) pET-26b(+) (3) pColdⅢ to construct recombinant plasmids, and recombinant plasmids were transformed into E. coli strains BL21(DE3), C43(DE3), C41(DE3) and Origami(DE3) for protein expression. However, it was shown that the expression level of the target protein was very high in some cases, but the recombinant protein was overproduced in the form of inactive inclusion bodies in most cases. Although the soluble form of recombinant protein was detected using western blotting analysis, no enzymatic activity was shown. To overcome this drawback, baculovirus system was introduced for the eukaryotic lipase (CML) expression. pDualBac was used as a transfer vector and the CML gene was fused under the control of polyhedrin promoter. After generation of the recombinant baculovirus, lipase activity was shown compared to wild type AcMNPV in p-nitrophenyl palmitate assay. Kinetic parameters were determined to characterize the recombinant protein, CML. The values of Vmax, Km and kcat of the recombinant CML lipase expressed in the baculovirus were 0.934 μmol?min-1?mg-1, 0.162 mM, and 0.79 min-1, respectively. The catalytic efficiency (kcat/Km) was calculated at the value of 4.87 min-1?mM-1.Abstract ················································································· Contents ············································································· ··· List of tables········································································· V· List of figures ······································································ V·· Ⅰ. Introduction ····································································· 1 Ⅱ. Materials and Methods ························································ 5 1. Identification of lipase from Cordyceps militaris ·························· 5 2. Construction of recombinant plasmids in E. coli system ················· 8 2.1. Strains, plasmids, and media ············································ 8 2.2. Total RNA extraction & cDNA synthesis ···························· 8 2.3. cDNA cloning of gene encoding a Cordyceps militaris lipase ·········································································· 9 2.3.1. Subcloning ························································· 9 2.3.2. Sequencing of the Cordyceps militaris lipase gene ·········· 9 2.4. Construction of expression plasmids in E. coli system ········ 10 2.4.1. Construction of plasmids pET29-CML-C6His, pET29-CML MBP ········································································· 10 2.4.2. Construction of plasmids pET26-CML-C6His, pET26-CML-MBP ········································································· 11 2.4.3. Construction of plasmids pColdⅢ-CML-C6His, pColdⅢ-CML-MBP ································································· 12 2.5. Expression of the Cordyceps militaris lipase in E. coli system ··· ··············································································· 15 3. Construction of a recombinant baculovirus ······························· 16 3.1. Insect cells and baculovirus ··········································· 16 3.2. Total RNA extraction & cDNA synthesis ··························· 16 3.3. Construction of a recombinant baculovirus ························· 17 3.3.1. Construction of a baculovirus transfer vector containing CML gene·········································································· 17 3.3.2. Generation of a recombinant baculovirus ······················ 18 4. SDS-PAGE ···································································· 18 5. Western blot analysis ························································ 19 6. Determination of lipase activity ············································ 19 Ⅲ. Results and Discussion ······················································ 21 1. Protein identification ························································ 21 2. Cloning and sequencing of the CML gene ······························· 26 3. Expression of the CML in E. coli system ·································· 32 3.1. Plasmid pET29-CML-C6His and pET29-CML-MBP ············· 32 3.2. Plasmid pET26-CML-C6His and pET26-CML-MBP ············· 33 3.3. plasmid pColdⅢ-CML-C6His, pColdⅢ-CML-MBP ············· 34 4. Construction of a recombinant baculovirus ······························· 41 5. Characterization ······························································ 45 5.1. Determination of kinetic parameters ································ 45 Ⅳ. References ····································································· 47 국문초록 ··········································································· 51Maste

Inorganic mineral and vascular promoting microenvironments for neo-bone formation

학위논문 (석사)-- 서울대학교 대학원 : 화학생물공학부, 2016. 2. Nathaniel S.Hwang (황석연).Various strategies have been explored to stimulate a prospective process of new bone formation including angiogenic stimulations and inorganic materials treatment. Neovascularization during the endochondral ossification process is one of the most crucial factors in providing sufficient nutrients and bone forming minerals. In this respect, various applications utilizing human vascular endothelial growth factors (hVEGF) have shown to promote blood vessel formation and enhance bone formation. Recently, whitlockite (WH), a novel phase of calcium phosphate, has been synthesized as a novel inorganic biomaterials for bone tissue engineering applications. In this study, our aim was to explore the potential use of hVEGF and whitlockite for bone formation. Our study demonstrated that hVEGF and WH synergistically stimulated osteogenic commitment of human tonsil-derived mesenchymal stem cells (hTMSC) both in vitro and in vivo.Chapter 1. Introduction 6 1.1 Biomaterials for bone scaffolds 6 1.2 3D porous structures for bone scaffolds 7 1.3 Osteoinductive materials for bone tissue engineering 9 Chapter 2. Inorganic mineral and vascular promoting microenvironments for neo-bone formation 12 2.1 Introduction 12 2.2 Materials and methods 14 2.3 Results 20 2.4 Discussion 41 Chapter 3. Conclusion 45 Reference 46 요약 (국문초록) 50Maste

칸트의 인과 이론에 대한 연구 : 「순수 이성 비판」의 `제2유추의 원칙`을 중심으로

학위논문(박사)--서울대학교 대학원 :철학과 서양철학전공,1998.Docto