Erythropoietic Potential of CD34+ Hematopoietic Stem Cells from Human Cord Blood and G-CSF-Mobilized Peripheral Blood

Red blood cell (RBC) supply for transfusion has been severely constrained by the limited availability of donor blood and the emergence of infection and contamination issues. Alternatively, hematopoietic stem cells (HSCs) from human organs have been increasingly considered as safe and effective blood source. Several methods have been studied to obtain mature RBCs from CD34+ hematopoietic stem cells via in vitro culture. Among them, human cord blood (CB) and granulocyte colony-stimulating factor-mobilized adult peripheral blood (mPB) are common adult stem cells used for allogeneic transplantation. Our present study focuses on comparing CB- and mPB-derived stem cells in differentiation from CD34+ cells into mature RBCs. By using CD34+ cells from cord blood and G-CSF mobilized peripheral blood, we showed in vitro RBC generation of artificial red blood cells. Our results demonstrate that CB- and mPB-derived CD34+ hematopoietic stem cells have similar characteristics when cultured under the same conditions, but differ considerably with respect to expression levels of various genes and hemoglobin development. This study is the first to compare the characteristics of CB- and mPB-derived erythrocytes. The results support the idea that CB and mPB, despite some similarities, possess different erythropoietic potentials in in vitro culture systems.ope

최찬식 문학 연구

학위논문 (석사)-- 서울대학교 대학원 : 인문대학 국어국문학과, 2019. 2. 김종욱.본 논문에서는 그동안 제대로 규명되지 않았던 신소설 작가 최찬식의 문학세계를 살펴보려고 한다. 최찬식은 1912년에 추월색으로 독자의 사랑을 한 몸에 받았고, 이어 금강문⋅안의 성⋅능라도⋅춘몽 등 많은 작품을 발표하였다. 그는 1927년까지 꾸준히 창작활동을 하였으며 신문계와 반도시론에서 기자로 활약하였다. 최찬식이 살아갔던 시대는 근대와 전근대가 충돌하고 외래의 것이 섞여 나타나는 시대적 격변기였다. 그렇기에 최찬식은 신소설의 흥망과 문단의 변천, 교체과정을 몸소 경험한 작가라고 할 수 있다. 지금까지 최찬식 연구의 주된 흐름은 친일성과 통속성의 이분법적 방법으로 평가하는 것이었다. 최찬식은 친일단체 일진회의 총무였던 아버지가 있다는 개인사적인 측면과 결부되어 부정적으로 평가되어 온 바 있다. 또한 작품의 통속성은 고전소설로의 퇴행이라는 저평가를 받게 된 원인으로 작용했다. 나아가, 최찬식의 작품을 유기적으로 연결하며 총체적인 측면에서 문학세계를 살핀 연구가 부족하다. 하지만 최찬식은 엄연히 이인직, 이해조 뒤를 이어 신소설 개척에 선구적인 역할을 한 작가이다. 이러한 연구적 한계들을 극복하기 위해 본 논문은 최찬식의 문학 세계를 보다 유기적으로 재조명하고자 한다. 우선 2장에서는 최찬식 연구에서 규명되지 못했던 최찬식의 생애와 문필활동을 밝힌다. 최찬식의 행적에 대해서는 충분히 밝혀져 있지 못한 상태이지만 그간 연구자에 의해 무비판적으로 인용되었다. 이에 최찬식의 생애를 복원하여 그의 교육과정을 진일보 분석 설명하고, 아버지 최영년과의 관계에 대한 새로운 해석을 시도한다. 그리고 그간 방치해두었던 작품과 새로 발견된 작품 등을 아우르는 체계적인 작품연보를 만들고자 한다. 3장은 1910년대에 발표한 소설과 신문계, 반도시론에 기자로 있으면서 발표한 기행문을 같이 살펴봄으로써 최찬식 초기의 문학 특징을 살펴본다. 최찬식은 처녀작 추월색에서 남다른 공간적 감각을 선보였으며 이후 기자로 재직하던 중 많은 명승고적을 여행하면서 기행문을 쓴 바 있다. 이 과정에서 조선의 명승지나 금수강산의 여행지가 소설의 무대로 적극적으로 재현되었다. 예컨대 금강문, 능라도가 있으며 지명으로 소설 제목을 명명하기도 한다. 흥미로운 것은 이러한 특정 공간을 통해 최찬식은 자신의 가치관을 내세우고 있었다는 점이다. 최찬식은 형제자매의 의리를 강조하며, 특히 혼인관계 속에서는 부부간의 신의를 강조하고 있음을 분석한다. 4장은 1920년대에 발표된 소설과 위인전을 집중적으로 분석한다. 1920년대의 소설에서 최찬식은 해외 공간-만주를 주요한 무대로 설정하였으며 만주의 명물-마적을 긍정적으로 부각했다. 반대로 최찬식이 부단히 해외공간을 모색하였다는 것은 당시 조선에서 안주할 수 없음을 암묵적으로 보여준다. 그럼에도 불구하고, 이 시기 최찬식은 현실에 주안점을 두고 실존 인물, 전기물에 관심을 표명하였으며 여러 편의 전기물을 출판한다. 지금까지 단편적으로 논의되어 왔던 최찬식 문학세계를 새롭게 조명하고, 최찬식에 대한 적극적인 재평가의 계기를 마련하고자 한다. 이러한 작업을 통해 최찬식의 문학세계에 대한 보다 풍부한 이해의 초석이 마련되기를 기대한다.1. 서 론 1 1.1. 문제 제기 1 1.2. 연구사 및 연구시각 2 2. 최찬식의 생애와 문필활동 10 2.1. 최찬식과 최영년의 거리 10 2.2. 신문 기자체험과 소설가로서의 활동 15 3. 1910년대 소설에 나타난 여행의 의미 23 3.1. 기행문 쓰기와 소설 쓰기의 관련성 23 3.2. 전통적 의리와 개인적 자유의 모순과 타협 34 4. 1920년대 비허구적 글쓰기의 전환 45 4.1. 만주 공간에 대한 관심과 마적의 형성화 45 4.2. 실존 인물을 다루는 새로운 글쓰기 56 5. 결론 67 참고문헌 69 부록1 75 부록2 82 Abstract 88Maste

Restoration of cardiac function using ex vivo expanded endothelial progenitor cells and mesenchymal stem cells derived from human umbilical cord blood in rats with acute myocardial infarction

Dept. of Medical Science/박사[한글] 급성 심근경색증은 심혈관계 질환에서 가장 중요한 질환의 하나이다. 최근 그 유병률과 발병률이 증가하고 있으며 심근경색을 치료하기 위해 많은 치료법이 소개되고 있다. 최근에는 심근경색증에 줄기세포를 이용한 새로운 시도가 이루어지고 있으며, 전세계적으로 다른 장기에 비해 비교적 많은 연구가 진행되고 있으나 임상적용은 자가골수세포나 자가단핵구세포를 이식하는 정도에 국한되고 있다. 그러나 아직 동종세포이식에 따르는 면역거부반응이 해결되지 않았고 골수에 존재하는 골수세포를 심장조직에 이식하였을 때 어떻게 심장기능 재생에 기여하는지에 대한 기전이 정확히 규명되지 않은 상태이기 때문에 임상적용 확산에는 한계가 있고 아직도 많은 동물 실험을 통한 선행연구가 필요한 상태이다. 심근경색 후 심 기능 회복에는 혈류개선이 중요한데 이를 위해 단순한 골수세포 이식보다는 골수세포 유래 내피기원세포와 중간엽줄기세포로 분화시켜 이식하는 것이 좀더 효과적일 것이라는 가설로 심장 세포치료분야의 새로운 세포 원으로 시사 되고 있다.또한 많은 환자를 대상으로 한 세포치료제라 함은 동종세포 이식이 가능해야 한다. 제대혈은 이미 골수 이식에서 확인된 바 있듯이 다른 세포 공급원에 비해 미성숙의 줄기세포가 풍부함과 동시에 여러 가지 세포로 분화할 수 있는 능력과 면역거부반응이 골수세포에 비해 낮다. 따라서 본 연구에서는 치료 세포 공급원으로 제대혈을 이용하여 1) 제대혈로부터 내피기원세포와 중간엽줄기세포를 분리 배양하는 기술을 확립하였고 2) 이들 세포를 유세포분석법, 면역조직화학염색법 등을 이용하여 그 특성을 확인하였다. 3) 그 다음 단계로 분리한 내피기원세포와 중간엽줄기세포를 급성심근경색 SD 쥐 모델에 이식하여 이식 후 4주 뒤에 심 초음파 검사로 기능을 평가한 후 희생하여 면역조직화학검사로 심 조직 기능개선을 평가하였다. 연구 구성은 각 세포의 조직 재생을 보기 위해 혈관재생에 관여하는 내피기원세포 이식군, 심근의 재생을 기대하는 중간엽줄기세포 이식군과 두 세포의 상승효과를 기대하기 위해 두 세포를 동시에 이식한 혼합 이식군으로 나누어 실험을 진행하였다.본 연구 결과 인간 제대혈 유래의 내피기원세포와 중간엽줄기세포는 급성심근경색 쥐 모델에서 심근경색부위 두께를 증대 시키고 심근경색의 면적과 좌심실의 수축기말 용적을 줄여주고 박출 계수가 증가된 효과를 확인할 수 있었다. 또한 제대혈 유래의 내피기원세포와 중간엽줄기세포는 모두 대조군에 비해 심근경색의 치료에 기여하고 심장 기능을 개선해줄 수 있음을 확인하였다. 그러나 두 세포를 동시에 이식한 군이 내피기원세포나 중간엽줄기세포 만을 단독으로 이식한 경우보다 심근기능의 상승효과가 적었는데 이는 두 세포 이식의 상승효과보다는 세포농도를 맞추기 위해 단독 투여군에 비해 세포수를 반씩 이식하였던 점, 또는 상승효과보다는 두 세포 사이의 경쟁유도에 의한 거부반응효과 등을 예측할 수 있으나 이에 대한 확인 실험은 진행하지 않았다. 다만 제대혈 유래의 내피기원세포가 다른 군에 비해 가장 효과적인 치료 결과를 나타낸 것은 본 연구에서 선택한 동물모델이 급성 심근경색 모델이었기 때문으로 혈류개선이 기능회복에 가장 중요한 역할을 했을 것으로 평가하였다. 또한 본 연구는 사람의 제대혈유래 세포를 쥐에 이식한 이종간 이식이었으나 면역억제제를 사용하지 않았음에도 불구하고 면역거부반응이 관찰되지 않음을 확인할 수 있었다.결론적으로 본 연구에서는 제대혈 유래 내피기원세포나 중간엽줄기세포 이식은 면역거부반응을 보이지 않았으며, 심 기능 재생에 우수한 효과가 있음을 보여주었다. 특히 체외 증폭한 내피기원 세포의 이식으로 발달된 모세혈관 생성이 급성 심근경색 중에서 가장 효과적인 세포치료법임을 확인하였다. [영문] Background: Many researchers have made lots of attempts, in order to restore the heart function from cardiac infarction. Recently, a kind of novel cell therapy has become an acceptable source of treatment methods for cardiac functional disorder and endothelial progenitor cells (EPC) and mesenchymal stem cells (MSC) especially represent a promising tool for new clinical concepts in cellular therapy. Human umbilical cord blood (hUCB) not only contains abundant immature stem/progenitor cells more than other adult stem cell source, but also have a remarkable capacity of differentiating into many types of tissue cells. To examine whether hUCB derived EPC and MSC restore the cardiac function in acute myocardial infarction (AMI), we isolated, expanded and characterized the hUCB derived EPC and MSC in vitro and performed in vivo animal experiments given cell transplantation.Methods: The hUCB was collected in sterile blood bags containing CPDA-1 from normal full-term deliveries. Mononuclear cells (MNC) were isolated using Ficoll-Hypaque, and plated MNC on the fibronectin coated six well culture dishes. Among adherent cells we isolated and ex vivo expanded the EPC and MSC. The characterization of cells was performed by flow cytometric analysis and immunohistochemical stains. hUCB derived EPC, MSC and combination of both (1:1) in endothelial cell basal medium were directly intramyocardially transplanted into the scar of a 1 hour old myocardial infarction in Sprague-Dawley rat at 5x106 cells/50 µl each group. The same volume of cell free medium was used as control. After 4 weeks, their effect on left ventricular (LV) ejection fraction and other related parameters were assessed using echocardiography. Then all the rats were sacrificed for histological and immunochemical examinations 4 weeks post AMI, including measurement of capillary density, infarct area and wall thickness.Results: Transplantation of hUCB derived EPC and MSC can increase the thickness of the infarct area and LV stroke volume, decrease LV end-systolic volume, and improve LV ejection fraction in a rat model of AMI. Interestingly, we found that hUCB derived EPC and MSC all can significantly contribute to the repair of infarcted myocardium and improve the heart function compared to control group. The transplantation of ex vivo expanded EPC to the infarcted myocardium showed significantly better recovery compared to the MSC or EPC/MSC combined cell injection group. In addition, the effect of MSC injection is better than the EPC/MSC combined cell injection group.Conclusion: We have isolated EPC and MSC from hUCB and successfully transplanted in animal experiments. Our results demonstrate that the ex vivo expanded EPC recruitment and blood supply might play a critical roles in the early restoration of heart function in AMI of rat.prohibitio

Korean Construction Company Advancing into the Chinese Market -Analyzing the cause of decreasing Investment-

학위논문 (석사)-- 서울대학교 대학원 : 건축학과, 2014. 2. 이현수.한국기업들은 국내 경제성장의 둔화와 치열한 경쟁 등의 경제 환경 변화에 직면하면서 이에 대처하기 위한 하나의 방안으로 해외에 대한 투자와 진출을 모색하기 시작하였다. 건설업 또한 대내적으로 발주량 감소, 그리고 이에 따른 수주경쟁 과열 및 수익성 감소 등의 어려운 환경을 맞이하여 해외시장 개척을 강화하였다. 그 중 지정학적으로 조건이 제일 유리한 나라인 중국에 대한 투자와 진출을 시작하여 미국을 능가하는 한국의 제1위 투자대상국으로 부상하고 투자 초기에 비해 15배정도 증가하여 63억 달러의 최고의 수준을 기록하기도 하였다. 그러나 중국 건설시장에서의 호황기를 누렸던 한국은 최근 들어 중국 건설시장에 대한 투자와 진출의 추세가 점점 줄어들고 있으며 심지어 기존 진출했던 기업들마저 철수 하거나 현지 사무실만 남겨 놓은 상태이다. 중국은 매년 7%~8%의 경제성장률을 유지하면서 건설시장에 대한 투자도 확대하고 있는 상황이며 2020년 이전에 세계1위 건설시장으로 될 것이라는 업계의 전망이다. 이런 상황에서 한국 건설기업의 중국 건설 시장 투자 감소 현상에 대한 진단이 필요하고 체계적인 분석과 적절한 대응책이 수립되어야 한다. 따라서 본 연구에서는 한국 건설기업의 對 중국 투자 감소의 원인을 분석하고 이에 따라 한국 건설기업의 중국 진출에 있어서의 방향성과 대응방안을 제시하는데 목적을 두고 진행하고자 한다. 본 연구에서는 해외투자 관련 이론과 투자결정요인에 관련된 선행연구 및 문헌과 해외건설업이 가지고 있는 특성을 토대로 투자 감소에 영향을 주는 요인을 도출하여 연구모형을 설계한 다음 가설을 세웠다. 그리고 수집된 설문데이터를 이용하여 선형회귀분석과 AHP기법을 실시하여 중국시장 진출에 있어서 영향을 주는 요인별 중요도를 도출하였다. 분석결과를 보면 다음과 같다. 첫째, 기업특유요인에 속한 경영. 관리능력, 기술경쟁력, 가격경쟁력과 재무능력은 모두 중국시장 투자 감소에 영향을 주는 것으로 분석되었다. 둘째, 이론적 기반이 없이 설정된 가설5는 연구모형에 유의성을 가지고 있지 않아 기각이 되었지만 해외투자에 영향은 주는 것으로 나타났다. 셋째, 시장 환경요인에 대한 즉 시장성장 가능성, 원가, 정치. 정책의 규제 그리고 프로젝트 변수는 모두 투자 감소의 원인이 되고 영향을 주는 것으로 분석되었다. 넷째, 채택된 가설 요인들의 중요도를 분석함으로써 중국 건설시장 투자 감소에 있어서 가격 경쟁력, 원가, 정치. 정책의 규제 변수가 비교적 높은 중요도를 가지고 있는 것으로 나타났다. 본 연구의 마지막에는 연구결과에 의한 한국 기업의 對 중국건설시장 진출에 있어서의 방향성과 대응방안을 제시하고 연구의 한계점 및 향후 연구방향을 제시하였다.제 1 장 서 론 1 1.1 연구의 배경 및 문제점 1 1.2 연구의 범위 및 방법 4 제 2 장 선행연구 6 2.1 기업의 해외투자에 관한 이론 및 문헌고찰 6 2.1.1 해외직접투자 이론 및 결정요인 6 2.1.2 해외투자 철수에 관한 결정요인 12 2.2 중국건설시장의 특성 및 문헌고찰 14 2.2.1 건설업의 특성 14 2.2.2 중국 건설시장의 특성 및 현황 15 2.2.3 중국건설시장 진출에 대한 선행연구 19 제 3 장 투자 감소의 영향요인 도출 및 분석 22 3.1 연구의 모형 설계 22 3.1.1 투자 감소의 영향요인 도출 22 3.1.2 요인별 가설 설정 24 3.2 가설에 대한 검정 29 3.2.1 표본의 특성 및 분석방법 29 3.2.2 신뢰도 분석 31 3.2.3 연구가설의 검정 33 제 4 장 중국건설시장 진출방안 38 4.1 요인별 중요도 도출 38 4.2 진출 대응방안 41 제 5 장 결 론 48 5.1 연구결과의 요약 48 5.2 한계점 및 향후 연구방향 50 참 고 문 헌 52 59 66 67 ABSTRACT 68Maste

Neural stem cells modified by a hypoxia-inducible VEGF gene expression system improve cell viability under hypoxic conditions and spinal cord injury

STUDY DESIGN: An in vitro neural hypoxia model and rat spinal cord injury (SCI) model were used to assess the regulation of therapeutic vascular endothelial growth factor (VEGF) gene expression in mouse neural stem cells (mNSCs) by the EPO (erythropoietin) enhancer or RTP801 promoter. OBJECTIVE: To increase VEGF gene expression in mNSCs under hypoxic conditions in SCI lesions but avoid unwanted overexpression of VEGF in normal sites, we developed a hypoxia-inducible gene expression system consisting of the EPO enhancer and RTP801 promoter fused to VEGF or the luciferase gene, then transfected into mNSCs. SUMMARY OF BACKGROUND DATA: On the basis of the ischemic response in the injured area, poor cell survival at the transplantation site is a consistent problem with NSC transplantation after SCI. Although VEGF directly protects neurons and enhances neurite outgrowth, uncontrolled overexpression of VEGF in uninjured tissue may cause serious adverse effects. To effectively improve NSC survival in ischemic sites after transplantation, we evaluated mNSCs modified by a hypoxia-inducible VEGF gene expression system in an SCI model. METHODS: Hypoxia-inducible luciferase or VEGF plasmids were constructed using the EPO enhancer or RTP801 promoter. The effect of these systems on targeted gene expression and cell viability was evaluated in mNSCs in both hypoxic in vitro injury and a rat SCI model in vivo. RESULTS: The gene expression system containing the EPO enhancer or RTP801 promoter significantly increased the expression of the luciferase reporter gene and therapeutic VEGF gene under hypoxic conditions. The Epo-SV-VEGF plasmid transfection group had significantly fewer apoptotic cells in vitro. This system also augmented cell viability in the in vivo SCI model. CONCLUSION: These results strongly suggest the potential utility of mNSCs modified by a hypoxia-inducible VEGF gene expression system in the development of effective stem cell transplantation protocols in SCI.ope

Neuroprotective effect of combined hypoxia-induced VEGF and bone marrow-derived mesenchymal stem cell treatment

PURPOSES: To avoid unwanted adverse effects of higher doses of single treatment of stem cells and gene therapy and increase the therapeutic efficacies, we hypothesized the combined therapy with stem cells and gene therapy. This study assessed the neuroprotective effects of combined gene therapy and stem cell treatment under ischemic hypoxia conditions using hypoxia-inducible vascular endothelial growth factor (VEGF) and bone marrow-derived mesenchymal stem cells (BMSC). METHODS: Experimental groups included the control which was N2A cells transfected with empty vectors, the transfection only group which was N2A cells treated with pEpo-SV-VEGF alone, the BMSC only group which was N2A cells transfected with empty vectors and cocultured with BMSCs, and the combined treatment group which was N2A cells treated with pEpo-SV-VEGF and cocultured with BMSCs. Each group was transfected for 4 h and cultured at 37 degrees C and 5% CO2 for 24 h. Each group was then cultivated under hypoxic conditions (1% O2) for 12 h. Neuroprotective effects were assessed by reverse transcription polymerase chain reaction, annexin V, and cytotoxicity assay. RESULTS: Neurons exposed to hypoxic conditions exhibited neuronal apoptosis. Compared to single treatments, the combined hypoxia-inducible VEGF and BMSC treatment demonstrated a significant increase in VEGF expression and decreased neuronal apoptosis. CONCLUSIONS: These results suggest that combined pEpo-SV-VEGF and BMSC treatment is effective in protecting neurons against hypoxic ischemic injury.ope