Gene identification and characterization of enzymes involved in alkaloid and sesquiterpenoids biosyntheses in Polygonum tinctorium L. and Piper nigrum L.

학위논문 (박사)-- 서울대학교 대학원 : 농업생명과학대학 농생명공학부, 2018. 2. 김수언.PnNAT6 and 7). The genes were expressed in E. coli to obtain proteins for in-vitro assay. In addition, they were expressed in the engineered yeast and E. coli to directly produce the expected products or to effect bioconversion in-vivo. In particular, Part II fully describes sesqui-TPSs mentioned above. PnTPS1 produced caryophyllene as a major product and minor humulene, and thus was named caryophyllene synthase (PnCPS). Likewise, PnTPS2 and PnTPS3 were named cadinol/cadinene synthase (PnCO/CDS) and germacrene D synthase (PnGDS). PnGDS expression in yeast system yielded β-cadinene and α-copaene also found in pepper extract. They were verified as rearrangement products of germacrene D not found in pepper. Part III describes transcriptome-based gene mining for elucidation of piperine biosynthesis. At first, P. nigrum 3,4-methylenedioxycinnamic acid (MDCA) hydratase-lyase (PnMCHL) responsible for conversion of MDCA to piperonal, was identified and described. Piperonylic acid, possibly an oxidation product from piperonal in¬-planta, could undergo 2×C2 extension in the side chain to arrive at C6C5 carbon skeleton of piperic acid, as opposed to the common belief that piperic acid skeleton would be the results of one C2 extension from MDCA. Also described is 3,4-methylenedioxyphenyl-specific 4-coumaroyl-coenzyme A ligase (Pn4CL3) which converted piperic acid into piperoyl-CoA. Finally, two clones coding enzymes for transfer of piperoyl-CoA to piperidine are described.This thesis presents enzymes involved in biosynthesis of plant alkaloids, indigo and piperine from Polygonum tinctorium L. and Piper nigrum L., respectively, and those in sesquiterpene synthesis in P. nigrum. The first chapter presents indole synthase from P. tinctorium. Indigo is an old natural blue dye produced by plants such as P. tinctorium. The first key step in plant indigoid biosynthesis is the production of indole by indole-3-glycerol phosphate lyase (IGL). Two tryptophan synthase α-subunit homologs, PtIGL-short and -long forms on genome of the plant contained two genes each coding for IGL. The short and the long forms respectively encoded 273 and 316 amino acid residue-long proteins. The short form complemented E. coli ΔtnaA ΔtrpA mutant on tryptophan-depleted agar plate, signifying the production of free indole, and thus was named indole synthase gene (PtINS). The long form, either intact or without the transit peptide sequence, did not complement the mutant. It was tentatively named PtTSA. PtTSA is transported to the chloroplast as predicted by 42 amino acid residues of targeting sequence, whereas PtINS is localized in cytosol. Genomic structure analysis suggested that a TSA duplicate acquired splicing sites during the course of evolution toward PtINS so that the targeting sequence-containing pre-mRNA segment was deleted as an intron. PtINS had about two to five-fold higher transcript level than that of PtTSA, and treatment of 2,1,3-benzothiadiazole caused the relative transcript level of PtINS over PtTSA significantly enhanced in the plant. The second and the third chapter respectively focuses on sesquiterpene synthesis imparting characteristic peppery bouquet and piperine alkaloid biogenesis responsible for pungent taste of black pepper. The unripe peppercorn was submitted to transcriptome analysis utilizing the Illumina next-generation sequencing (NGS). Compared with gene cloning based on rapid amplification of cDNA ends (RACE)-PCR, NGS technology offers more cost-effective and time-saving alternative to identify specific gene by collecting massive sequencing data. Using Local tBLASTn routine against query genes with similar biochemical functions, I have found three full-length of sesquiterpene synthase (sesqui-TPS) clones (PnTPS1 through 3) and four kinds of enzymes putatively involved in piperine biosynthesis (PnMCHLPnPKS1 and 2Pn4CL3Part I: Isolation and functional studies of indole synthase from Polygonum tinctorium L. 1 Introduction 2 Polygonum tinctorium L. 2 Indole biosynthetic pathway 2 Indole synthase 6 The purposes of research 10 Materials and Methods 11 Plant material and growth conditions 11 Bacterial strains and culture media 11 Plasmids 11 Enzyme and chemicals 12 Oligonucleotides 12 Genomic DNA, total RNA isolation and cDNA synthesis 14 Isolation of IGL and UTR sequences 14 Complementation assay in E. coli ΔtrpA ΔtnaA 15 QRT-PCR 15 Determination of subcellular localization 15 Bioinformatics analyses 16 Results and Discussion 17 Cloning of IGLs 17 Analysis of UTR sequences 22 Complementation of E. coli ΔtnaA ΔtrpA by PtIGL-short 28 PtIGL transcript levels among plant organs 32 Change in IGL transcription upon BTH treatment 32 Intracellular localization of PtIGLs 38 Part II: Cloning and functional analysis of three sesquiterpene synthases identified by transcriptome sequencing of peppercorn 43 Introduction 44 Piper nigrum L. 44 Transcriptome sequencing 44 Black pepper sesquiterpenoids 44 The purposes of this study 45 Materials and Methods 46 Plant material and growth conditions 46 Bacterial, yeast strains and culture media 46 Enzyme and chemicals 47 Oligonucleotides 47 Total RNA isolation and cDNA preparation 49 Isolation of sesqui-TPSs 49 Yeast transformation and fermentation 50 Transient expression in N. benthamiana 50 Heterologous expression and in-vitro assay 50 Steady-state kinetics 51 GC-MS analysis 52 QRT-PCR 52 Bioinformatics analyses 53 Results and Discussion 54 Transcriptome analysis 54 Screening of sesqui-TPS 56 Analysis of sesquiterpenes in pepper fruit 62 Functional analyses of sesqui-TPSs 67 Kinetic parameters 74 Catalytic mechanism 74 Phylogenetic analysis 78 PnTPS transcript levels among pepper organs 82 Part III: Isolation of genes putatively involved in piperine biosynthesis in Piper nigrum L. 87 Introduction 88 The piperine 88 The purposes of this study 88 Materials and Methods 90 Bacterial, yeast strains and culture media 90 Enzyme and chemicals 90 Oligonucleotides 91 Isolation of genes putatively involved in piperine biosynthesis 94 Yeast PAD1, FDC1 disruption mutant 94 Heterologous expression and protein purification 95 In-vitro assay 96 In-vivo bioconversion assay by co-transformants 96 Analysis of metabolites 100 GC-MS analysis 100 LC-MS analysis 101 QRT-PCR 101 Bioinformatics analyses 102 Results and Discussion 103 Metabolites profiling 103 Search for genes involved in piperine biosynthesis 106 Side chain extension of phenylpropenate 108 PnMCHL, an enzyme for 3,4-MDCA-specific side chain cleavage 114 Piperate:Coenzyme A ligation by Pn4CL3 126 Piperidine-piperoyltransferase 130 Conclusion 134 Supplementary Data 138 References 154 Abstract in Korean 160 Curriculum Vitae 162 Publications and Patents 163Docto

A Study on the Design and Analysis for Electric Power System of Drilling Rig using ETAP

As electricity has been used in ship's propulsion, it is necessary to increase the system voltage and current for the electrical distribution system. So it is required to improve the system safety and efficiency, the power stability, the efficiency of the generation through various analysis of ship's electric power system. In this paper, the electrical service reliability of the power distribution system of Semi Submersible Drilling Rigs(SSDRs) has been analysed and discussed using Electrical Transient Analysis Program(ETAP). In the case of Semi Submersible Drill Rigs that are being used in most of the deepwater drilling operations, it can move by thrusters with Dynamic Positioning System(DPS), and has equipped a drilling packages like pumps, pipes and drills. The electrical distribution system of Drilling rigs is quite similar to typical redundancy system of electric propulsion ships made for transportation. However it is required the electrical distribution system of 2 to 4 split bus or more because of the severe marine environment, the hazards of fire and explosion, 24-hours operation, the standards and regulations related to oil and gas drilling. There are some more difficulties in design and engineering of the off-shore plants electric power system because it is required more severe and strict conditions. In this paper, to verify the stability of designed power system, the power system of SSDRs is modeled at first and load flow is analysed on each operational mode and also analysed on transient characteristics due to start/stop action between generators and loads. On the basis of the analysis the voltage variation in the distribution feeder is discussed. As a result, the load flow analysis shows the resonable result with appropriate load distribution and the capacity of generators and transformers are enough to feed the maximum load. The capacity of generators and transformers have an acceptable margin for future load and emergency load.1. 서 론 1 1.1 연구배경 및 동향 1 1.2 연구목적과 구성 1 2. 석유시추선의 전력계통 3 2.1 전력계통의 구성 3 2.1.1 시추선의 기준 모델 5 2.2 부하의 구성 6 2.3 운전 모드 6 2.3.1 이동 모드 7 2.3.2 시추 모드 1 7 2.3.3 시추 모드 2 8 2.3.4 리밍 모드 8 3. 전력계통의 해석 9 3.1 전력조류방정식 9 3.2 뉴턴-랩슨(Newton-Raphson)법 15 3.3 발전기 모델 17 3.3.1 여자기(Exciter) 20 3.3.2 조속기(Governor) 23 3.3.3 발전기 운전정보 26 3.4 변압기 모델 33 3.4.1 2권선 변압기 34 3.4.2 3권선 변압기 35 3.4.3 변압기 운전정보 37 3.5 전동기 모델 41 3.5.1 유도전동기 41 3.5.2 유도전동기 운전정보 45 3.6 Lumped load 47 4. 전력조류 시뮬레이션 및 결과 49 4.1 분석조건 및 기준 49 4.1.1 분석조건 49 4.1.2 분석기준 49 4.2 분석결과 50 4.2.1 모선의 운전전압 50 4.2.2 변압기 여유율 52 4.2.3 운전 모드별 전력조류 53 5. 비상시 전력계통해석 58 5.1 발전기 및 부하의 탈락 59 5.1.1 추진부하의 탈락 59 5.1.2 발전기 1대의 탈락 69 5.1.3 발전기 2대의 탈락 76 5.1.4 고압모선의 3상 단락 80 5.2 단락전류계산 85 5.2.1 단락전류계산 85 5.2.2 고장유형 88 6. 결 론 9

세대 조절효과를 중심으로

학위논문(석사) -- 서울대학교대학원 : 행정대학원 공기업정책학과, 2022. 8. 김봉환.In Korea, the flexible working system was sent to a Public institutions by the Ministry of Government Administration and Home Affairs in 2010 as part of an innovation in the working method of employees in public institutions. However, until the mid-2010s, the performance was poor. Obstacles to the implementation of the flexible working system in public institutions include disadvantages in personnel and remuneration from adopting the flexible working system, restrictions due to rigid and collective organizational culture, transfer of work to colleagues, and inconvenience to customers and partner organizations, etc. This problem has been pointed out. This situation has been changed because of the social demand for work-family balance, the change of perception according to the rapidly changing times such as the full-scale social advancement of the MZ generation, and the spread of COVID-19 in the private and public sectors. The flexible working system, which allows workers to directly select working hours and places to perform work due to activation, etc., is expected to become the new normal. The flexible working system is receiving attention as an important alternative for improving the quality of life, such as improving productivity and working conditions, in terms of work labels for members of the organization. Many efforts are being made to improve productivity and improve quality of life. In a changing environment where the flexible working system is important to both organizations and individuals, it was confirmed that a number of studies mainly deal with the antecedent factors of policies for work-life and work-family balance in a wide range. Several studies have shown that it provides opportunities for workers to improve their quality of life as well as develop their own abilities, and has positive effects on the overall organization, such as enhancing work efficiency, boosting employee morale, reducing turnover, and improving customer service. appearing in the paper. In this study, the flexible working system shows various positive effects. A questionnaire was conducted to determine whether the degree of flexible working use had a positive effect on the job satisfaction of Corporation I employees or whether it had a significant effect on intergenerational job satisfaction according to the degree of use of flexible working. Let's take a look through it. A brief summary of the survey results is as follows. First, as a result of examining the main effect of the independent variable, it was found that the more telecommuting was used in the frequency of use by type of flexible work, which is an independent variable, the insignificant positive (+) effect on job satisfaction (working environment) was found. In the sense of being more satisfied with job satisfaction (work environment), it was confirmed that employees were more satisfied with the work environment at their home than at the office, which supported the existing research results on a number of flexible working systems. Second, it was found that the 20s/30s among the generations strengthened the positive (+) effect on job satisfaction (work satisfaction) in the working time selection type and job satisfaction (working environment) in the childcare shortening type, than the 40s/50s. In other words, it was confirmed that the more the working hours selection and the shortening of child care were used, the more positively the job satisfaction of 20/30s was strengthened. It was confirmed that employees in their 20s/30s were more active in using the system to invest in themselves, such as self-development by selecting working hours, and this had an effect on job satisfaction. It can be confirmed that the results show a result that further strengthens the positive (+) effect on job satisfaction. The limitation of this study is that it is difficult to generalize the results of this study because it is a study targeting only the employees of Corporation I. It is necessary to increase external validity by broadening the scope of the target, such as other institutions and public officials. Second, as a limitation of research through a survey, it has the disadvantage that the contents of the survey questions are limited. In order to solve this problem, it is necessary to supplement the shortcomings caused by the survey by conducting additional in-depth research through the interview method.우리나라 유연근무제도는 공공기관 종사자들의 근무방식 혁신의 일환으로 2010년 행정자치부에서 유연근무제 운영지침을 송부하였고 2011년부터는 공공기관에 확산하기 위하여 공기업과 준정부기관을 대상으로 시행을 독려해 왔었으나 2010년대 중반까지는 실적이 저조한 상황이었다. 특히 공공기관에서의 유연근무제 확대 시행의 장애요인으로는 유연근무제를 선택할 때 오는 인사 및 보수의 불이익, 경직적이고 집단적 조직 문화로 인한 제약, 동료에게 업무 전가, 고객 및 협력기관 불편 야기 등이 문제점으로 지적되어왔다. 이러한 상황이 바뀌게 된 것은 일·가정 양립에 대한 사회적 요구, MZ세대의 본격적인 사회진출 등 급변하는 시대의 흐름에 따른 인식의 변화, 민간부문과 공공부문 전반에 걸쳐서 COVID-19 확산에 따른 재택근무의 활성화 등으로 근무시간, 근무장소 등을 근로자가 직접 선택하여 업무를 수행할 수 있도록 하는 유연근무제도는 뉴노멀(New Normal)이 될 전망이다. 유연근무제도는 조직 구성원들에게 워라벨 측면에서 생산성 향상, 근무여건 개선 등 삶의 질 향상을 위한 중요한 대안으로 주목받으면서 민간 기업을 필두로 하여 정부, 지자체 공공기관으로 확대되어 가는 상황이며 공공기관에서도 생산성 향상과 삶의 질을 높이기 위하여 많은 노력을 기울이고 있다. 유연근무제가 조직과 개인 모두에게 중요하고 변화하는 환경에서 다수의 연구가 넓은 범위에서 일과 삶, 일과 가정 양립을 위한 정책의 선행요인을 주로 다루고 있는 것을 확인할 수 있었고 다양한 유연근무제 활용으로 주요 공공기관들은 근로자들의 삶의 질 향상은 물론 자기 능력개발을 할 수 있는 기회를 제공하고 있으며 또한 업무 효율성 제고, 구성원의 사기 진작, 이직율 감소, 고객서비스 향상 등 조직 전반에 긍정적인 효과가 있는 것으로 여러 연구 논문에서 나타나고 있다. 본 연구는 이러한 유연근무제가 다양한 긍정적인 효과를 나타내고 있는데 유연근무제 활용 정도가 I공사 직원들의 직무만족도에 긍정적인 영향을 미치는지 유연근무제의 활용 정도에 따라 세대간 직무만족도에 유의미한 효과를 나타내는지 설문을 통하여 살펴보고자 하였다. 설문 결과를 간단히 요약하면 다음과 같다. 첫째, 독립변수의 주효과를 검증한 결과 독립변수인 유연근무제 유형별 활용 횟수에서 재택근무를 사용하면 할수록 직무만족(근무환경)에 미미한 정(+)의 영향을 미치는 것으로 나타났는데 이는 재택근무를 통하여 직무만족(근무환경)에 더욱 만족한다는 의미로 직원들에게는 사무실보다는 자기 집에서의 근무환경에 더 만족한다는 사실을 확인할 수 있었으며 이는 다수의 유연근무제에 대한 기존 연구 결과를 지지하였다. 둘째, 세대 중 20/30대가 40/50대 보다 근무시간 선택 유형에서는 직무만족(업무만족)을 자녀돌봄 단축 유형에서는 직무만족(근무환경)에 정(+)의 영향을 강화하는 것으로 나타났다. 즉 근무시간 선택 및 자녀돌봄 단축 유형을 사용하면 할수록 20/30대의 직무만족도에 정(+) 방향으로 강화한다는 것을 확인할 수 있었다. 이것은 20/30대 직원들은 근무시간 선택을 통하여 자기 개발 등 자신에게 투자하기 위한 제도 활용에 더욱 적극적이며 이것이 직무만족도에 영향을 미치는 것으로 확인할 수 있었고 자녀 돌봄 단축 제도 또한 40/50대 보다는 20/30대에게 직무만족도에 정(+)의 영향을 더욱 강화시키는 결과를 나타낸다는 것을 확인할 수 있다. 본 연구의 한계는 첫째 I공사 직원만을 대상으로 한 연구이므로 연구결과를 일반화하기 어려운 한계가 있다. 타 기관과 공무원 등 대상의 범위를 넓혀 외적타당성을 높일 필요가 있다. 둘째, 설문조사를 통한 연구의 한계로써 설문 문항의 내용이 한정되어 있다는 단점을 가진다. 이를 해결하기 위해서는 면접법 등을 통해 심층적인 연구를 추가적으로 진행하여 설문조사로 인한 미비점을 보완할 필요가 있다.제 1 장 서 론 1 제 1 절 연구의 목적과 필요성 1 제 2 절 연구대상 및 범위 3 제 3 절 연구방법 6 제 2 장 이론적 논의와 선행연구 검토 8 제 1 절 이론적 논의 8 1. 유연근무제 8 2. 직무만족 15 3. 세대 20 제 2 절 선행연구 24 1. 유연근무제에 관한 선행연구 24 2. 직무만족에 관한 선행연구 28 3. 세대에 관한 선행연구 32 4. 선행연구에 대한 비판적 검토 35 제 3 장 연구설계 36 제 1 절 연구모형 및 가설의 설정 36 1. 연구 모형 36 2. 가설의 설정 37 제 2 절 변수의 조작적 정의 및 측정도구 38 1. 변수의 조작적 정의 38 2. 측정 도구 40 제 3 절 자료의 수집 및 분석 41 1. 자료 수집 41 2. 분석 방법 41 제 4 장 연구결과와 논의 42 제 1 절 인구통계학적 특성 및 주요변수 42 1. 인구통계학적 특성 42 2. 주요변인 기술통계 43 제 2 절 직무만족도 요인 분석 44 제 3 절 측정도구의 신뢰도 분석 46 제 4 절 주요변수간 상관관계 분석 47 제 5 절 가설의 검증 및 연구결과 분석 49 1. 독립변수의 주효과 검증(가설1) 49 2. 조절변수의 상호작용효과 검증(가설2) 54 제 5 장 결론 및 시사점 68 제 1 절 연구결과 요약 68 제 2 절 연구의 의의 및 시사점 70 제 3 절 연구의 한계 71 참고문헌 72석

PET 필름 제조 공정상 종방향연신에 관한 연구

학위논문(박사)--서울대학교 대학원 :기계항공공학부,2003.Docto

A study on figural pattern generalization -Focusing on microworld building blocks patterns-

학위논문 (석사)-- 서울대학교 대학원 : 수학교육과, 2012. 8. 조한혁.패턴의 일반화는 대수 도입의 중요한 경로로서 대수적 사고의 근본이 된다. 우리나라 교육과정에서도 초등학교에서 규칙성과 함수 영역을 중심으로 패턴의 규칙성을 찾는 활동이 이루어지고 있다. 또한 고등학교의 수열 영역에서 수 패턴을 다루고 있다. 그러나 패턴의 일반화의 중요성에 비해 초등학교에서 중학교로의 연결이 잘 이루어지지 않고 있으며 초등학교에서도 일반화의 관점 보다는 규칙성을 찾는 데에 초점이 맞추어져있다. 고등학교에서도 수 패턴에만 집중되어 있어 패턴의 일반화 보다는 오히려 형식적인 알고리즘에 의한 기계적인 계산 위주의 학습이 이루어지고 있다. 따라서 본 연구는 초등학교에서부터 고등학교까지 교육과정과 연계하여 수직적으로 이어갈 수 있는 패턴의 개발과 이를 위한 연구가 필요하다는 문제의식에서 출발하였다. 쌓기나무는 유아기의 유희 놀이 대상으로서 쉽게 접할 뿐만 아니라 초등학교에서도 다루어지는 소재로서 학습자들에게 매우 친숙하다. 따라서 본 논문에서는 시각적 패턴의 하나인 쌓기나무 패턴의 일반화에 관한 연구를 하였다. 실제로 쌓기나무 패턴은 그 중요성에도 불구하고 아직 거의 연구된 바가 없다. 이에 본 연구는 쌓기나무 패턴 과제를 개발하고 이를 영재와 일반 학생들에게 제공하여 쌓기나무 패턴의 일반화 과정에서 나타나는 현상을 분석하며, 이를 토대로 마이크로월드 기반 쌓기나무 패턴 활동 설계를 통해 학습자의 학습 환경을 개선함으로써 그 변화를 관찰하는데 목적이 있다. 이를 위해 먼저 수학사에서 중요한 개념인 도형수에서 아이디어를 얻고 이를 쌓기나무 패턴으로 표현하여 패턴 과제를 개발하였다. 더불어 이 쌓기나무 패턴이 교육과정에서 초, 중, 고등학교를 거쳐 어떠한 영역과 연계될 수 있는지를 검토하였다. 또한, 쌓기나무 패턴 과제를 가지고 영재와 일반 학생들에게 사전검사를 실시하여 그들의 쌓기나무 패턴의 일반화 과정에서 나타나는 현상을 일반화 전략과 일반화 수준 측면에서 분석하였다. 한편, 마이크로월드 기반 쌓기나무 패턴 활동에 대한 설계를 통해 이를 영재와 일반 학생에게 적용하여 그 변화를 살펴보았다. 그 결과 쌓기나무 패턴은 초, 중, 고등학교의 여러 영역과 수직적으로 연계할 수 있을 뿐만 아니라 그 영역 내에서도 수평적으로 기초부터 심화까지 다룰 수 있음을 확인할 수 있었다. 또한 영재와 일반 학생들은 쌓기나무 패턴 과제를 해결하는데 다양한 일반화 전략을 사용하였으며 여러 일반화 수준에 분포되어 있었고 영재와 일반 학생 간의 차이도 확인할 수 있었다. 한편, 마이크로월드 환경은 영재와 일반 학생에게 유의미한 변화를 주었을 뿐만 아니라 쌓기나무 패턴 과제를 해결하기 위한 수단이 아닌 목적으로 작용함을 알 수 있었다. 본 연구 결과는 쌓기나무 패턴의 일반화에 관한 초기 연구로서 앞으로 쌓기나무 패턴에 대한 더 많은 개발과 마이크로월드 기반 쌓기나무 패턴 활동 설계를 발전시키는데 밑바탕이 될 것이다.Pattern generalization is considered one of the prominent routes for introducing students to algebra and root of algebraic thinking. In elementary school curriculum, it suggests that students do a activity finding a rule of patterns focusing on 'regularity and function' domains. Also pattern generalization considers in 'number sequences' domain of high school curriculum. Nonetheless importance of pattern generalization, it isn't connected from elementary school to middle school and even focused just finding a rule of pattern rather than considering generalization in elementary school. Moreover it is focusing just number pattern in high school and so students learn patterns by algorithmic calculation. Therefore we have a critical mind that we need a development of pattern tasks to connect from elementary school to high school vertically. Building blocks is familiar playing tool for a child and it provide to elementary school learner as a teaching aid. So in this paper we study on building blocks pattern generalization as one of the figural patterns. Actually there is just a fewer study about building blocks pattern generalization even if its importance. In this paper we develop a building blocks pattern tasks and make gifted and general students solve the problem as a pretest. Then we analyze it and design a building blocks pattern activity based on microworld environment. Finally we observe student's change through designed pattern activity. We purpose that improve student's learning environment of pattern generalization. To this, first we get a figurate number in math history as a subject matter of building blocks pattern. Plus we review all curriculum concerning building blocks patterns directly and indirectly. Then we pretest to gifted and general students and analyze their generalization strategies and generalization level. Finally through designing of microworld based building blocks pattern activity, we observe and explore their positive and negative change. As a result building blocks pattern connects many domains in elementary, middle, and high school curriculum vertically and horizontally. Also, gifted and general students use different generalization strategies to solve the given pattern tasks and distribute different generalization level. Lastly Microworld environment not only provides meaningful changes to gifted and general students but also works not means but purposes for building blocks patterns tasks.Ⅰ. 서론 1 1. 연구의 필요성 및 목적 1 2. 연구문제 4 3. 용어 정의 5 Ⅱ. 이론적 배경 7 1. 패턴의 일반화 7 2. 패턴과 마이크로월드 21 3. 패턴과 도형수 31 Ⅲ. 연구 방법 및 절차 45 1. 연구 설계 45 2. 연구 대상 46 3. 연구 절차 47 4. 검사도구 48 5. 자료의 수집 및 분석 54 Ⅳ. 마이크로월드 기반 쌓기나무 패턴활동 설계 57 1. 설계 내용 57 2. 설계 특징 71 Ⅴ. 쌓기나무 패턴과 교육과정 73 1. 패턴활동과 교육과정 73 2. 쌓기나무 패턴과 연계된 교육과정 검토 83 Ⅵ. 패턴의 일반화 전략과 수준 분석 95 1. 쌓기나무 패턴에서 나타난 오류 및 경향 95 2. 쌓기나무 패턴의 일반화 전략 99 3. 쌓기나무 패턴과 일반화 수준 108 Ⅶ. 교수설계 적용 및 결과분석 116 1. 일반화 전략 측면 116 2. 일반화 수준 측면 129 Ⅷ. 요약 및 결론 147 1. 요약 147 2. 결론 및 제언 150 참고문헌 154 부록 160 Abstract 174Maste

Role of HGF/c-Met in invasion and metastasis of hypopharyngeal squamous cell carcinoma

의학과/박사[한글](연구배경) 간세포성장인자(Hepatocyte Growth Factor, 이하 HGF)는 간세포 뿐아니라 체내 다양한 세포와 종양에서 증식, 분산, 이동 및 침습에 관여하며 종양주위의 신생혈관을 생성하는 것으로 알려져 이에 관한 많은 연구가 진행되고 있다. 본 연구는 두경부 종양 중 주변조직으로의 침습과 전이를 잘 하는 하인두암에서 HGF와 c-Met의 발현에 따른 임상적인 의의를 알아보고 HGF가 하인두암의 증식, 이동과 침습에 있어 어떠한 역할을 하는지를 알아보고자 하였다. (대상 및 방법) 하인두암으로 수술받은 40예의 시료를 이용하여 HGF와 c-Met의 면역조직화학적 염색을 시행하였고 5예의 하인두 정상과 암조직을 이용하여 RT-PCR과 Western blotting을 시행하였다. 하인두암 세포주인 FaDu(ATCC)을 이용하여 RT-PCR과 Western blotting을 시행하였다. HGF의 농도(10, 30ng/ml)에 따른 종양세포의 증식, 분산을 측정하고 wound healing assay와 Transwell chamber를 이용한 종양세포의 이동과 침습을 분석하였다. 또한 FaDu에서 MMP-2와 9의 발현과 활성도를 보기위해 RT-PCR과 Zymogram를 시행하였고 하인두암에서 분비되는 HGF 분비유도물질의 존재여부를 확인하기 위해 사람의 섬유아세포(MRC-5)를 이용하였다./(결과) 면역조직화학적 염색상 HGF는 77.5%, c-Met는 70%에서 양성을 보였고 HGF는 림프절 전이와 종양의 임상적 병기의 증가에 따라 통계적으로 유의한 차이를 보였다. c-Met의 경우 임상적 병기의 증가에 따라 통계적으로 유의한 차이를 보였다. 하인두암 조직의 RT-PCR 결과 HGF와 c-Met의 발현이 정상 조직에 비해 암조직에서 유의하게 증가되었으며 FaDu에서는 HGF의 발현은 없었고 c-Met의 발현만 확인되었다. Western blotting에서는 1예를 제외하고 4예에서 정상에서는 c-Met의 발현이 거의 없었으나 하인두암에서는 c-Met의 발현이 강하게 나타났으며 FaDu에서도 c-Met의 발현이 강하게 나타났다. 하인두암 세포주의 증식, 분산, 이동과 침윤검사에서 HGF를 처리한 경우가 대조군에 비해 증식, 분산, 이동과 침윤이 유의하게 증가하였고 이는 HGF의 농도에 비례하였다. MMP-2, 9의 RT-PCR에서 MMP-2, 9의 발현이 확인되었고 30ng/ml의 HGF로 처리한 경우에 MMP-2의 발현이 증가되었다. Zymogram상 FaDu에서는 MMP의 활성도가 나타나지 않았으나 FaDu의 배양액에서는 MMP-2의 발현이 강하게 나타났는데 HGF를 처리한 경우에 활성도가 증가되었다. FaDu의 배양액을 MRC-5에 넣어준 경우와 넣지 않은 경우에 HGF의 분비를 ELISA검사를 통해 확인한 결과 FaDu의 배양액을 넣은 경우 통계적으로 유의하게 HGF의 분비가 증가된 것을 확인할 수 있었다. (결론) HGF와 c-Met의 발현이 하인두암의 림프절 전이와 진행에 관련이 있으며 HGF가 하인두암의 증식, 분산, 이동과 침습을 증가시키는 것으로 확인되었고 하인두암의 침습에 있어 MMP-2가 역할을 하고 이에 HGF가 일부 영향을 주는 것으로 나타났으며 하인두암에서 분비되는 HGF 분비유도물질에 의해 섬유아세포에서의 HGF 분비가 유의하게 증가됨을 알 수 있었다. [영문]Hepatocyte growth factor (HGF), a potent stimulator of hepatocyte growth, stimulates motility, invasiveness, proliferation, and morphogenesis of epithelium, and it may be involved in physiologic and pathologic processes such as embryogenesis, wound healing, organ regeneration, inflammation, and tumor invasion. So we examined the role of the HGF/c-Met on invasion and metastasis of hypopharyngeal squamous cell carcinoma(SCC). We performed immunohistochemical stains on 40 normal mucosas and 40 SCCs of hypopharynx with HGF antibody and c-Met antibody. For RT-PCR and Western blot, fresh normal tissues and cancer tissues in hypopharynx obtained from five patients and hypopharyngeal cell line(FaDu) were used. To find proliferating effect of HGF, the number of viable cells was estimated by the proliferation assay according to the concentration of HGF(0, 10, 30 ng/ml). Tumor cell migration and invasiveness were assessed by wound healing assay and the membrane invasion assay(using Transwell chamber). To examine the role of the matrix metalloproteinases(MMP) and the relation between HGF and MMP in invasion of hypopharyngeal cancer, RT-PCR and zymography were performed in FaDu cells. And we examined enhancement of HGF production in human fibroblast(MRC-5) by putative inducer secreted from FaDu cells. The positive rates of HGF and c-Met expression in hypopharyngeal SCC were 77.5% and 70%, respectively. HGF staining was significantly correlated with lymph node metastasis and pathologic stage (p<0.05). c-Met staining was only significantly correlated with lymph node metastasis (p<0.05). The increased expresssion of c-Met mRNA(RT-PCR) and protein (Western Blot) were detected in hypopharyngeal cancer tissue and cancer cell line. Exogenous HGF significantly enhanced the growth of FaDu in a dose-dependent manner (p<0.05). HGF stimulated dispersion and markedly enhanced the migration and invasion of cancer cells in a Transwell invasion chamber in a dose-dependent manner(p<0.05). The expression of MMP was detected in hypopharyngeal cancer cells and exogenous HGF slightly enhanced the induction of MMP-2 activity in zymogram analysis. HGF produced by stromal fibroblast(MRC-5) was increased through certain inducer originated from FaDu cells (p<0.05)./These results suggest that HGF may plays an important role in progression of hypopharyngeal cancer through the enhancement of proliferation, migration and invasion.ope