인체 상피세포의 시험관내 증식에 관한 연구

의학과/박사[영문] [한글] 광범위한 피부결손이 발생한 중화상 환자의 이상적인 치료는 빠른 시일내에 자가피부 이식술을 시행하여 주는 것이 바람직하며, 임상적으로 이러한 환자에서 사용 가능한 공여 부의 부족으로 피부이식술의 시행에 제한을 받게된다. 여러 저자들에 의해 다양한 체외배 양법을 사용하여 작은 피부 절편으로부터 넓은 상피세포층을 얻기 위한 많은 연구가 행하 여 졌지만, 아직까지 효과적이며 일관성있는 배양방법이 충분하게 알려지지 않았다. 본 연구는 111명의 정상인에서 유래한 113개의 피부편을 사용하여 시험관내 배양을 시 행하여 가장 효과적인 상피세포의 배양법을 연구하고, 배양세포의 성장특성을 관찰하였으 며, 또한 여러 생물학적 혹은 화학적제재를 배양액에 첨가하여, 이들이 배양 상피세포의 증식과 성장에 미치는 영향을 조사하여 다음과 같은 결과를 얻었다. 1. 피부 미세절편을 0.25% trypsin-0.1% ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA)로 처 치한 배양에서 절편주변에 상피양 세포의 활발한 증식을 보였으나, 0.05% collagenase를 처치한 배양에서는 상피양 세포보다는 섬유아세포의 활발한 증식이 보였다. 효소를 처치 하지 않은 군에서는 세포의 증식을 거의 관찰할 수 없었다. 2. 배양세포의 성장 양상은 0.25% trypsin-0.1% EDTA로 처치한 배양 5일에 상피양 세포 의 활발한 증식을 보였으며, 배양 10∼14일에 더욱 증식되어 절편주위에 형성된 상피양 세포층을 관찰할 수 있었고, 이러한 상피양 세포층내에 산발적으로 불규칙적인 다세포층 이 이루어졌으며, 증식외곽부는 단층으로 이루어져 있었다. 배양용기 표면에 부착한 절편 의 위치가 서로 근접한 경우에는 절편에서 자라나온 상피양 세포가 융합하여 상호연결된 세포층을 형성하였다. 3. Keratin에 반응하는 특이항체를 이용한 면역효소 염색검사는 배양 증식된 상피양 세 포에서 양성반응을 보였으며, 이러한 양성반응은 대부분 다세포층의 상층에서 나타나 다 세포층이 층상화가이루어진 분화된 상피세포층임을 확인하였다. 4. Crude interleukin-6를 첨가한 배양에서 유의하게 높은 상피세포의 증식이 관찰되었 고,2-mercaptoethanol, cholera toxin, epidermal growth factor, recombinant interleuk in-1, recombinant tumor necrosis factor는 유의한 영향을 미치지 못하거나 약간 억제하 는 경향을 나타냈다. 5. 피부조직편의 해부학적 부위에 따른 시험관내 상피세포의 증식은 대퇴부 피부와 표 피에서 채취했을 경우 증식이 증가된 경향을 보였고, 피부 전층보다 얇은 부분층 피부로 배양했을 때 증식이 의의있게 증가하였다. 이상의 결과로, 인체 상피세포의 시험관내 배양의 최적조건은 피부 미세절편을 0.25% t rypsin-0.1% EDTA로 처치한 후 이들을 배양용기 표면에 근접하게 부착시켜 배양할 경우로 써, 이때에 세포증식으로 상호연결되어 면적이 확장된 상피세포층을 얻을 수가 있고, 특 히 crude interleukin-6의 사용으로 이와같은 인체 상피세포의 배양을 더욱 효과적으로 시행할 수 있으리라고 사료된다. Study on the Growth Charaeteristics of In Vitro Cultured Human Epidermal Cells Dong Chul Kim Department of Medical Science The Graduate School, Yonsei Uniuenity (Directed by Professor Young Ho Lee, M.D.) Skin autograft is an ideal procedure to resurface burn wounds of patients with extensive burns. However, since the availability of autogenous skin tissue is practically limited in such patients, many attempts were made by researchers to obtain expanded tissue or cell sheets from tiny skin fragments using various in vitro culture techniques. Nevertheless, the effective means for such cultures have not been fully established. The present study was undertaken to investigate the most effective procedures for in vitro cultivation of human epidermal cells using 113 skin fragments from 111 normal subjects. Growth characteristics of cultured cells as well as the effects of various biological and chemical agents on their growth were evaluated. The results were summarized as folluws: 1. Treatment of minced skin fragments with 0.25% trypsin-0.1% ethylenediaminetetraacetic acid(EDTA) resulted in an active proliferation of epithelioid cells around the fragments, whereas similar treatment with 0.05% collagenase showed an overgrowth of fibroblasts. In control cultures of the fragments not treated with enzymes, little growth of cells was observed. 2. In culture of skin fragments treated with 0.25% trypsin-0.1% EDTA, the outgrowth of epidermal cells from the edges of explants was observed at 5 days of culture, and thereafter rapidly multiplied and formed an extended cell layer which showed sporadic multilayered cell colonies at 10-14 days. In cases where the culture explants were attached closely, cells located in the periphery of the outgrown monolayers from each fragment formed bridges and ultimately the cell monolayers were fused together to form doubly expanded cell layers. 3. Detections of keratin in cultured cells, using an immunoperoxidase assay, have revealed that cells showing a typical pink-brown color as a positive reaction were located mostly in the upper portion of mutilayered cell colonies. 4. Crude interleukin-6 added in culture media significantly increased the proliferation of epidermal cells, whereas 2-mercaptoethanol, cholera toxin, epidermal growth factor, recombinant interleukin-1, and recombinant tumor necrosis factor had little or no effects. 5. Skin fragments from thigh or foreskin with thin split thickness showed relatively increased proliferations of epidermal cells. From these results, it can be concluded that the optimal in vitro culture condition to obtain expanded human epidermal cells was the seeding of the minced skin fragments closely following treatment with 0.25% trypsin-0.1% EDTA. This could be achieved more effectively by the addition of crude interleukin-6 in the culture medium.restrictio

중등체육 축구단원에 적용된 이해중심게임수업 사례연구

학위논문(석사)--서울대학교 대학원 :체육교육과,2004.Maste

요오드가 도핑된 폴리아세틸렌의 홀효과와 자기저항 연구

Thesis (master`s)--서울대학교 대학원 :물리학과,1998.Maste

기업의 은행과 비은행 금융기관 차입금 이용에 관한 연구

학위논문(석사)--서울대학교 대학원 :경제학부 경제학전공,1999.Maste

신경조절이 백서 피부판 생존에 미치는 영향에 대한 실험적 연구

의학과/석사[한글] 피부판 생존은 성형외과 영역에서 중요한 문제의 하나로 피부판 생존을 증진시키기 위 하여 많은 연구가 행하여 졌다. 신경조직이 피부에서 혈류의 조절과 분포에 중요한 역할 을 하고 있으나 피부판 생착에 미치는 기능적 신경지배 효과에 대하여는 확실히 밝혀져 있지 않다. 미세혈류 순환에 미치는 내인성 신경조절(endogenous neural regulation)의 소실이 피부판 괴사 원인의 하나로 추정된 이후 Jonsson등(1975), Finseth와 Adelberg (1 978)등의 여러 저자가 신경종말기 (neural receptor )에 약물적인 처리를 하여 피부판 생 착의 증진을 시도하여 왔으나 그 기전은 충분히 밝혀지지 않고 있다. 피부판 생존에 미치 는 내인성 신경조절의 효과에 대한 연구는 피부판 생존 증대에 쓰여질 외인성 신경조절(e xogenous neural regulation)의 발달을 유도할 것이다. 이 실험에서는 백서의 배부에 2× 10㎝ 크기의 신경지배가 제거된 임의형 피부판(denervated random pattern flap)과 신경 지배를 유지한 임의형 피부판(innervated random pattern flap)을 작성하여 수술후 7일에 생존면적을 비교 관찰하며, 교감신경 차단제인 guanethidine 과 부교감신경 차단제인 at ropine 을 전신적으로 투여하여 피부관 생존에 미치는 효과를 관찰하여 다음과 같은 결과 를 얻었다 첫째, 신경지배 피부판은 80.9 %의 평균생존율을 보인 반면 비신경지배 피부판은 58.3 %의 평균생존율을 보여주어, 내인성 신경조절 (endogenous neural regulation)의 소실이 _피부판 괴사에 중요한 역할을 하는 것으로 나타났다. 둘째, 신경지배 피부판에 교감신경차단제인 guanethidine을 전신적으로 투여한 경우에 서 피부판의 평균생존율은 69.5 %이었고, 부교감신정차단제인 atropine을 전신적으로 투 여한 경우에서 피부판의 평균생존율은 59.0%로 나타나, 대조군의 신경지배 피부판의 생 존면적에 비하여 각각 현저한 피부판의 손실을 보였다. 따라서 피부판 괴사를 초래하는 내인성 실경조절의 소실에 교감실경조절(adrenergic regulation)과 부교감신경조절 (chol inergic regulation) 두가지 모두가 관여하고 있음을 보여 주었다. [영문] Numerous pagers concerning improved flap survival have been published in the field of Plastic Surgery. With the suggestions that loss of endogenous neural regulation accounts for flap necrosis , many authors attempted to improve flap survival with pharmacological treatment on neural receptor sites. It would be expected that investigation for effects on functional endogenous neural regulation to flap survival mar further advance exogenous neural manipulation for improvement of flap survival. In this study, the effects of functional neural regulation on flap survival was observed on the experimentally made innervated and denervated flaps in rats . Also observed was the effects on flap survival by administration to sympathetic neuronal blocking agent (Guanethidine) and parasympathetic postganglionic blocking agent (Atropine). In results, the innervated flaps were survived significantly more than the denervated flaps. The blocking of sympathetic innervation showed flap necrosis more than the innervated flaps and so as the parasympathetic blocking did the same results . In conclusion, the loss of the endogenous neural regulation on flap survival is directly related to flap necrosis, and adrenergic regulation as well as cholinergic regulation have a significant role in flap survival.restrictio