构建MS2-RIP方法用于鉴定lncRNA DANCR在肿瘤细胞中的相互作用分子

目的为了探讨lncRNA DANCR在肿瘤细胞中的作用机制，本研究拟构建一种新的MS2-RIP方法用于鉴定DANCR的相互作用分子。方法利用MS2噬菌体衣壳蛋白可与噬菌体复制酶编码基因5’端一段由19个碱基组成的RNA茎环结构序列，即MS2结合位点（MS2 Binding Site，MS2 BS）高效结合的特点，构建串联表达MS2 BS和DANCR的过量表达质粒，通过MS2蛋白与MS2 BS的亲和作用，使DANCR得到富集，并且同步捕获与DANCR相互作用的分子，用于进一步分析鉴定。结果成功构建串联表达MS2 BS和DANCR的过量表达质粒用于MS2-RIP实验，该实验可显著富集DANCR以及作为阳性对照的DANCR结合蛋白EZH2。结论基于MS2蛋白与MS2结合位点的高效结合特性，我们针对lncRNA DANCR建立了MS2-RIP方法。该方法可有效富集DANCR以及与DANCR结合的生物活性分子，为研究DANCR的作用机制提供一种新的技术手段

DANCR在人胚胎干细胞向内胚层分化中的调控功能

目的探讨DANCR在人胚胎干细胞（hESC）向内胚层（DE）分化中的作用。方法建立体外诱导hESC向DE分化的体系，检测DANCR的表达水平与DE分化的相关性；利用慢病毒体系敲低hESC的DANCR表达水平，将敲低DANCR的hESC进行DE分化；用qPCR和Western blot方法检测DE分子标志物SOX17和FOXA2，以及原条分子标志物Brachyury （T），EOMES，MIXL1和GSC的表达水平；用Dual luciferase reporter assay和qPCR证明在DE分化过程中DANCR与WNT通路的相互作用。结果体外诱导hESC向DE分化的体系能够有效模拟体内DE分化，DANCR的表达水平随DE分化进程逐渐下降。建立敲低DANCR的hESC细胞株，DANCR表达水平相比对照组显著降低（P < 0.001）。干扰DANCR表达使分化早期的原条分子标志物Brachyury （T），EOMES，MIXL1和GSC，以及分化后期的DE分子标志物 SOX17和FOXA2 的mRNA表达水平相比对照组显著降低（全部P < 0.05）。并且，在DE分化过程中，敲低DANCR组的WNT通路的转录活性相比对照组显著降低（P < 0.05），表现为WNT通路下游基因FZD5，FZD8，SFRP1，FRZB和ANKRD6 mRNA表达水平明显减少（P < 0.05）。然而，敲低DANCR对TGFβ通路的SMAD2/3和p-SMAD2 蛋白表达水平没有显著影响（P > 0.05）。人为激活细胞内β-CATENIN蛋白活性，能够有效回补由于敲低DANCR导致的DE分化缺陷。结论DANCR在DE分化过程中逐渐下调并促进DE分化发生，DANCR可能通过与WNT通路相互作用参与调控hESC向DE分化

三种仪器测量中央角膜厚度的比较

[目的]探讨光学相干断层扫描仪（OCT）、超声波角膜测厚仪及OrbscanⅡ角膜地形图/角膜测厚系统（OrbscanⅡ系统）测量中央角膜厚度（CCT）的差异及测量的可重复性.[方法]分别用OCT、超声波角膜测厚仪和OrbscanⅡ系统测量近视患者34例（68只眼）的CCT并对测量值进行比较,用相关分析方法分析不同仪器间测量值的相关性;随机选择15例（30只眼）用三种仪器依次重复测量中央角膜厚度3次,采用方差分析方法分析3种仪器重复测量值的方差.[结果]OCT、超声波角膜测厚仪、OrbscanⅡ系统测得的CCT平均值分别为（515±33）μm、（535±35）μm和（534±44）μm,OCT的测量值比超声波角膜测厚仪与OrbscanⅡ的测量值小,差异有统计学意义（P值分别为0.004和0.003）,超声波角膜测厚仪与OrbscanⅡ的测量值差异无统计学意义（P=0.900）.OCT测量的CCT值与超声波角膜测厚仪（r=0.980,P＜0.001）和OrbscanⅡ系统（r=0.963,P＜0.001）测量的CCT值呈正相关.OCT、超声波角膜测厚仪、OrbscanⅡ系统CCT重复测量值的方差分别为（3.75±3.05）、（6.53±3.02）和（5.26±2.98）.OCT的方差与超声波角膜厚度测量仪比较差异有统计学意义（P=0.001）,与OrbscanⅡ系统比较差异无统计学意义（P=0.083）.[结论]OCT测量的CCT值最小;OCT与超声波角膜测厚仪和ObscanⅡ系统对CCT测量值的相关性较好;OCT测量CCT的可重复性较好,可以作为中央角膜厚度测量的工具

关于“经济发展方式转变进程中的财税政策”的探讨(笔谈)

转变经济发展方式是当前中国的热门话题,而上海在城市发展中又肩负着率先转变的重要任务,在这一意义和背景下,2010年4月24日由上海金融学院学院主办、上海金融学院公共经济管理学院承办的“《中国城市财政发展报告2009/2010:促进‘两个中心’建设的上海城市财政》首发式暨‘经济发展方式转变进程中的财税政策’论坛“在我校举行。与会专家围绕经济发展方式转变进程中的财税政策的“趋势与目标“、“机遇和挑战“、“实施方略“和“地方实践“等四个专题进行研讨,各抒己见,智慧交锋。现将其真知灼见整理摘要与读者分享,以期待更多学者共同关注当前经济发展方式转变进程中的财税政策

应用双靶标CRISPR慢病毒载体在间充质干细胞中稳定敲除lncRNA DANCR基因

【目的】应用CRISPR/Cas9方法，构建特异性靶向长链非编码RNADANCR基因两端的双靶标慢病毒载体，稳定敲除间充质干细胞（MSC）中的DANCR基因，为研究DANCR的生物学功能奠定基础。【方法】首先设计靶向DANCR的5’和3’端的sgRNA（single-guideRNA），转染293FT细胞，提取293FT细胞基因组DNA，验证靶向序列的有效性。然后通过gateway和酶切连接的方法，将分别靶向5’和3’端的两条有效sgRNA序列连接至同一慢病毒CRISPR载体。最终使用293FT进行慢病毒包装，收获病毒感染MSC，检测MSC中DANCR敲除效率。【结果】在证明靶向DANCR基因两端的sgRNA序列均单独有效的基础上，将靶向5’和3’端的sgRNA进行组合，成功构建靶向DANCR的双靶标慢病毒载体。将载体进行慢病毒包装后感染MSC，成功获得DANCR敲除的MSC。【结论】应用CRISPR方法成功构建敲除DANCR的慢病毒载体，能高效稳定地敲除MSC中的DANCR基因

纳米硅薄膜光学性质的测定与研究

通过测定纳米硅薄膜的透射谱,建立计算模型计算得出薄膜样品的折射率、厚度、吸收系数和光能隙.计算结果表明这种半导体材料在620 nm波长附近的折射率约为3.4,计算得到的厚度与用台阶仪测量的结果吻合很好.在620 nm波长附近的吸收系数介于吸收系数较小的晶体硅与吸收系数较大的非晶硅之间,光能隙约为1.6 eV,两者都随晶态含量增大而呈减小趋势

高电导本征纳米硅膜及其缓冲层太阳能电池

通过PECVD法制备了纳米硅薄膜(nc-Si:H),采用Raman散射谱,AFM对样品的结构和形貌进行了测试,并测试了样品的室温电导率。结果表明:制备出的纳米硅薄膜,其电导率达到4.9S·cm-1。另外制备了本征nc-Si:H膜作缓冲层,结构为ITO/n+-nc-Si:H/i-nc-Si:H/p-c-Si/Ag的PIN型太阳能电池,其Voc达到534.7mV,Isc达到49.24mA(3cm2),填充因子FF为0.4228