Dystonia Musculorum 與 SOD 小白鼠之形態與功能的研究(2/3)

本報告是Dystonia musculorum 與 SOD 小白鼠之形態與功能的研究 (2/3)的第二年中間報告。在今年的研 究過程中，我們發現一個問題即：如 何區分wild type, dt/+ 的表型與基因 型，及wild type, dt/+ 及 dt/dt mice 的基因型。這比我們原先的第二年計 畫工作更重要。 故我們利用可調溫的加熱盤設計 如圖2 所示的一種測試裝置，測試老 鼠在放入裝置後與其將前爪縮回並放 入口中用舌去舐之間的時間差，來區 分wild type 與 dt/+。 除檢查dt mice (including dt/+ and dt/dt) 之背根神經節、背根神經、 及脊神經內 neuronal intermediate filatment proteins, α-internexin 及 peripherin 的分佈外，同時也利用原位 雜交法監測在背根神經節及脊髓之神 經元內α-internexin 及 peripherin mRNA 的表現。結果發現在wild type mice, 蛋白質α-internexin 位於背根 神經纖維而其 mRNA 則表現於背根 神經節的神經元內，但在dt mice 則 無此現象；蛋白質Peripherin 則位於 wild type 及dt mice 的周邊神經。在 dt mice 背根神經纖維內無 α-internexin 的存在，暗示了在 BPAG1-缺損的小白鼠背根神經與周 邊神經感覺纖維的退化是經由不同的 機制所致

Dystonia Musculorum 與 SOD 小白鼠之形態與功能的研究(3/3)

肌無力Dystonia musculorum (dt)是突變小白鼠一種隱性遺傳的感覺神經病變(sensory neuropathy)，而缺失的bullous pemphigoid antigen 1 (BPAG1) gene 則是造成此突變的主要因 素。此病的主要特徵是：漸進式的運動不協調 ( progressive incoordination) – 約在出生後一 到二週之間即可見到。先前有關dt 突變鼠 (dt mutants) 的研究主要集中於周圍神經的退化 病變，(包括背根神經節的周邊突起的研究)，但在缺失的bullous pemphigoid antigen 1 (BPAG1) gene 對背根神經節的中央突起的研究則仍缺如。在本研究計畫中，我們 (1) 以免疫細胞化 學方法來觀察dt 突變鼠背根神經節的中央突起及周邊突起內神經中間絲蛋白的分布；(2) 以原位雜交in situ hybridization 及RT-PCR 來監測dt 突變鼠背根神經元內BPAG1， α-internexin 及 peripherin 的表現。. 我們的結果顯示：成體之dt 突變鼠，其背根神經元內BPAG1，α-internexin 均無表現； 而不論是雜合體(heterozygotes)或純種體 (homozygotes) 的 dt 突變鼠， 其背根神經節的中 央突起及周邊突起均可見到漸進式退化。本報告也首先採用行為學熱板測試(behavioral hot-plate test)，來區分雜合體(heterozygotes) dt 突變鼠或原種體 (wild type) 的正常鼠之外表 型。我們也對行為學熱板測試之結果，以原種體 (wild type) 的正常鼠、雜合體(heterozygotes) 或純種體(homozygotes) 的 dt 突變鼠之皮神經分布研究及神經退化之情形，加以印證。dt 突變鼠背根神經節的中央突起無α-internexin 及BPAG1 之表現， 可能表示：BPAG1 及 α-internexin 間的相互作用，是神經退化過程中主要的關鍵因素之一

Induction of neural differentiation in rat C6 glioma cells with taxol

Background: Glioblastoma is a common and aggressive type of primary brain tumor. Several anticancer drugs affect GBM (glioblastoma multiforme) cells on cell growth and morphology. Taxol is one of the widely used antineoplastic drugs against many types of solid tumors, such as breast, ovarian, and prostate cancers. However, the effect of taxol on GBM cells remains unclear and requires further investigation. Methods: Survival rate of C6 glioma cells under different taxol concentrations was quantified. To clarify the differentiation patterns of rat C6 glioma cells under taxol challenge, survived glioma cells were characterized by immunocytochemical, molecular biological, and cell biological approaches. Results: After taxol treatment, not only cell death but also morphological changes, including cell elongation, cellular processes thinning, irregular shapes, and fragmented nucleation or micronuclei, occurred in the survived C6 cells. Neural differentiation markers NFL (for neurons), beta III-tubulin (for neurons), GFAP (for astrocytes), and CNPase (for oligodendrocytes) were detected in the taxol-treated C6 cells. Quantitative analysis suggested a significant increase in the percentage of neural differentiated cells. The results exhibited that taxol may trigger neural differentiation in C6 glioma cells. Increased expression of neural differentiation markers in C6 cells after taxol treatment suggest that some anticancer drugs could be applied to elimination of the malignant cancer cells as well as changing proliferation and differentiation status of tumor cells