体外突变新技术:DNA Shuffling技术

体外 DNA shuffling技术是一种快速、高效并且实用的分子定向进化技术。和以往的基因突变技术不同 ,它是一种高通量的突变筛选技术 ,可以对靶序列进行多次重组和选择 ,利用该技术建立的突变文库 (嵌合文库 )具有容量大、多样性好等优点 ,且更易于实现有益突变的积累。DNA shuffling技术已广泛应用于酶、药物蛋白及其它功能蛋白的改造 ,并取得了相当大的成功 ,显示了该技术在蛋白质改造和分子育种方面的潜在应用价

人表皮生长因子(hEGF)基因的合成、鉴定及植物表达质粒的构建

用 PCR方法合成了人表皮生长因子 ( h EGF)基因 ,构建了原核表达质粒 p2 0 T-h EGF,研究了原核表达的重组蛋白 h EGF的生物学活性 ,并构建了植物表达质粒 .研究表明 :无论是融合蛋白 GST-h EGF或纯化的h EGF蛋白 ,都有相当高的生物活性 ,h EGF蛋白对 Hela细胞的增殖有很好的促进作用 ,免疫小鼠亦能产生很高的免疫应答反应

Cloning and characterization of a thermostable superoxide dismutase from the thermophilic bacterium Rhodothermus sp XMH10

A superoxide dismutase (SOD) gene was cloned from the thermophilic bacterium Rhodothermus sp. XMH10 for the first time and highly expressed in Escherichia coli. The Rhodothermus sp. XMH10 SOD (RhSOD) gene encodes 209 amino acids with a putative molecular weight of 23.6 kDa and a pI value of 5.53. The recombinant RhSOD was detected to be an iron type SOD and existed as a dimer on its natural status. Experiments revealed that this RhSOD showed high activity at 50-70 degrees C and pH 5.0. Compared to SODs from other thermophiles, it was highly thermostable, maintaining more than 90% of its activity after incubation at 70 degrees C for 12 h, only totally inactivated after more than 4-h incubation at 80 degrees C. It also showed much higher resistance to KCN, NaN3 and H2O2 as compared to other SODs

重新认识“物理化学”课程的战略地位

鉴于当前某些高校化学系和生物学系在深化教改过程中对《物理化学》学科的性质、作用认识不足 ,以致于该课程面临被削弱、甚至被取消的境地 ,为此本文着重从理论高度和具体实践阐明该学科在经济振兴、科技腾飞、造才育帅中的战略地位

TT病毒与肝炎关系的临床流行病学研究

目的　对闽南地区各种肝炎患者、健康体检者、义务献血员和肝癌患者共480例从临床流行病学角度探讨TT病毒(TTV)的致病性及其与各种肝炎的关系。方法　采用巢式PCR检测血清TTVDNA、ELISA检测血清抗HAVIgM、HBsAg、抗HBcIgM、抗HCVIgG、抗HEVIgG,用EPIINFO60软件进行统计分析。结果　480名研究对象中TTVDNA的总检出率为23.96%。各种肝炎患者的TTV总阳性率为2394%,肝癌患者的TTV阳性率为2069%,而健康者的TTV阳性率为2484%,义务献血员的阳性率为3000%,均未见明显差别。从临床类型看,急性肝炎、慢性肝炎和重症肝炎的TTV阳性率都在25%左右;从病原类型看,非甲～戊型肝炎的TTV阳性率为2619%,并未见与相应健康者的2523%阳性率的差别;除HCV由于感染率太低而无法分析外,HAV、HBV、HEV阳性肝炎患者间TTV的阳性率分别为2000%、2314%、2179%,未见TTV与这些已知肝炎病毒的明显相关。对一个时期内的全部135例住院肝炎患者及153名健康者进行肝炎病原分析,HAV、HBV、HEV在肝炎患者中的阳性率都要明显高于健康人(P=00142),而TTV在肝炎患者中的阳性率与健康人没有明显差别(P=06021);对病毒的单独致病性进行分析,HAV、HBV、HEV在非重叠感染的肝炎患者中的阳性率都要明显高于健康人(P=00037),而TTV在非甲～戊型肝炎患者中的

一种高效、稳定的分泌型原核表达载体的构建及应用

以本室构建的原核表达载体pTO-T7为基础载体,PCR合成ompT引导序列,插入该载体多克隆位点上游,构建了分泌型原核表达载体pTO-OT。将2个外源基因克隆至pTO-OT,2个重组质粒在大肠杆菌中均得以高效表达,表达量为25％-30％。Western印迹分析证实了重组蛋白在大肠杆菌中表达后可被信号肽酶有效识别,切割后的重组蛋白具有良好的免疫学活性。对重组表达菌株的连续传代实验证实了该表达载体具有良好的遗传稳定性,显示了该原核表达载体在基因工程中的应用价值

一种高效、稳定的分泌型原核表达载体的构建及应用

以本室构建的原核表达载体pTO-T7为基础载体,PCR合成ompT引导序列,插入该载体多克隆位点上游,构建了分泌型原核表达载体pTO-OT。将2个外源基因克隆至pTO-OT,2个重组质粒在大肠杆菌中均得以高效表达,表达产量在25％～34％之间。Western blot分析证实了融合蛋白可被大肠杆菌信号肽酶有效地切割,并具有良好的免疫学活性。对重组表达菌株的连续传代实验证实了该表达载体具有良好的表达稳定性,显示了其在基因工程中的应用价值

闽南地区TT病毒的变异及经输血传播的初步证据

TT virus(TTV)DNA was tested by nested-PCR from sera of hepatitis patients and volunteer blood donors in Minnan area. The amplified segment was a 189 base pair region in TTV ORF2. A total of six sequences were obtained from three non-A to G hepatits patients and two from volunteer blood donors. The sequences were found to be with 82.9% to 99.3% homology to TTV Japanese strain and Chinese strain. The divergence of sequence in these six segments varied from 0.7% to 17.1%, which indicated that the TTV had been existing for a long time in this area. In the serum of a non-A to G hepatitis patient who was negative for TTV DNA in the 14th day of disease course turned to be positive in the 30th day, two TTV sequences were obtained which showed 92.1% nucleotide homology. It indicated that different TTV strains can co exist in the same person. This patient's blood had been transfused ten times between the collection of his TTV negative sample and his positive serum sample. Seven of the blood donors were traced an..

中国HTLV-Ⅰ env基因的克隆及Ⅰ+Ⅱ型嵌合基因的原核表达与抗原活性检测

为尽快研制出国产HTLV抗体诊断试剂 ,首先从福建HTLV流行区 1名HTLV感染者外周血细胞中克隆出HTLV Ⅰ的全长膜基因 (env) ,继而结合文献报道、PSA软件的亲疏水性分析和EPI软件的B细胞表位分析数据 ,选择了gp46中段开始延伸至 gp2 1N端 2 12个氨基酸 (aa185～aa396 )的基因 ,并在 3′端通过 (GlySer) 2 与人工合成的HTLV Ⅱ型的型特异性表位区基因嵌合 ,插入原核表达载体 pRSET ,在 E .coli中得到了高效表达 ,目的蛋白产量约占菌体总蛋白的 30 %。通过Triton X10 0洗涤 ,低浓度尿素逐步变性处理 ,8mol/L尿素溶解后纯度在 75 %左右 ,经电泳洗脱纯化 ,最终纯度可达 95 %左右 ,纯蛋白得率约 40 %。经Westernblotting检测 ,该蛋白对 4份HTLV Ⅰ型和 2份HTLV Ⅱ型血清均有较强反应 ,而对 4份阴性血清无反应 ,从而有可能用于研制HTLV抗体诊断试剂盒

应用噬菌体随机肽库技术筛选戊型肝炎病毒中和表位模拟肽

以识别戊型肝炎病毒 (HEV)构象依赖性中和表位的单克隆抗体 8C11、8H3作为固相筛选分子 ,对噬菌体随机 7肽库进行 4轮筛选后 ,随机挑取单克隆噬菌体进行测序。合成优势 7肽序列基因 ,将其插入HBcAgAA78 83位置之中 ,进行原核表达 ,所获重组蛋白经蛋白印迹实验证实可与相应单抗结合 ,电镜下可见重组蛋白能形成与HBcAg相似的类病毒颗粒。化学合成单抗 8H3筛选出的优势 7肽 ,所获 7肽经生物传感器结合实验证实与单抗8H3结合。这些结果提示用噬菌体 7肽库可以筛选出部分模拟构象性表位的短肽 ,为亚单位疫苗的研制提供了新的思路