水母雪莲高产细胞系的筛选及黄酮类化合物合成的调控

水母雪莲属菊科植物，为名贵中药材其主要活性成分为黄酮类化合物。为解决雪莲资源其中匮乏，本文开展了利用水母雪莲细胞培养生产黄酮类活性成分的可行性研究。 采用目视法从水母雪莲原始愈伤组织中筛选得到白色、黄色和红色3种细胞系，其中黄色系的黄酮含量最高。利用γ射线辐射处理从红色系得高产黄酮细胞系。 证明了多种理化因子对水母雪莲培养细胞中黄酮类合成的调控作用。研究发现，温度和光照对水母雪莲愈伤组织黄酮合成影响较大。25℃是最佳培养温度；红光促进愈伤组织生长，蓝光促进黄酮的合成；进一步研究表明：光调节黄酮代谢途径第一步所需酶苯丙氨酸裂解酶（PAL）活性，PAL活性被红光所抑制，被蓝光所促进。碳源、氮源、植物激素对愈伤组织生长和黄酮形成影响较为显著。对MS培养基成分进行调整得到M－13培养基，在M－13培养基上培养的愈伤组织生长量和黄酮产量比MS培养基分别提高33％和82％。 首次建立水母雪莲细胞悬浮培养体系。确定了水母雪莲细胞悬浮培养的最适培养条件和最适培养基成分组成。摇床转速 90～120 r/min、接种量 2.5～4.0gDW／L、接种物种龄 8～10 d 对黄酮合成有利。调整MS培养基成分得到适合于培养水母雪莲悬浮细胞的生长培养基G和黄酮合成培养基MP，从而使细胞生长量与黄酮产量分别长比MS培养基提高32％和70％。 应用2－L搅拌式生物反应器对水母雪莲细胞进行了悬浮培养。TLC和HPLC分析表明，水母雪莲细胞培养物能够形成2种黄酮活性成分金合欢素和高车前素。本论文对水母雪莲细胞培养生产药用活性成分作了基础性工作

水母雪莲愈伤组织培养和黄酮类化合物的形成

8种基本培养基对水母雪莲 (SaussureamedusaMaxim)愈伤组织生长和黄酮类形成影响不同 ,MS培养基较有利于愈伤组织生长和黄酮类形成。碳源、氮源、植物激素对愈伤组织生长和黄酮类形成影响较为显著。从MS培养基修饰得到的M - 13培养基培养的愈伤组织生长量和黄酮类产量比原培养基分别提高 33%和 82 % ,达到 2 1 0 0gDW /L和 1 89g/L。通过TLC和HPLC初步分析和鉴定 ,证明M - 13培养基上培养的愈伤组织能够形成 2种有效黄酮类成分金合欢素 (jaceosidin)和高车前素 (hispidulin) ,其含量分别占黄酮类的 2 2 %～ 2 4%和 0 15 %～0 17% ,这种百分率与MS培养基培养下的 2种黄酮没有明显差

水母雪莲愈伤组织培养和黄酮类化合物的形成

８种基本培养基对水母雪莲（Ｓａｕｓｓｕｒｅａ ｍｅｄｕｓａ Ｍａｘｉｍ）愈伤组织生长和黄酮类形成影响不同，ＭＳ培养基较有利于愈伤组织生长和黄酮类形成。碳源、氮源、植物激素对愈伤组织生长和黄酮类形成影响较为显著。从ＭＳ培养基修饰得到的Ｍ－１３培养基培养的愈伤组织生长量和黄酮类产量比原培养基分别提高３３％和８２％，达到２１．００ｇＤＷ／Ｌ和１．８９ｇ／Ｌ。通过ＴＬＣ和ＨＰＬＣ初步分析和鉴定，证明Ｍ－

植物细胞培养生产黄酮类化合物研究进展

黄酮类化合物是中药的一种主要有效成分 ,本文综述了利用植物细胞培养方法合成黄酮类化合物的研究状况和各种环境条件对植物细胞生长和黄酮类化合物合成的影响

碳源和氮源对水母雪莲悬浮培养细胞生长和黄酮合成的影响

在ＭＳ培养基上进行水母雪莲（ＳａｕｓｕｒｅａｍｅｄｕｓａＭａｘｉｍ）细胞悬浮培养时研究了碳源和氮源的影响。结果表明碳源以蔗糖最适合，蔗糖浓度则以４０ｇ／Ｌ较好，细胞生长量干重为１８１２ｇ／Ｌ，总黄酮合成量达到１４２３２５ｍｇ／Ｌ。在培养过程中，水母雪莲细胞能够快速将蔗糖水解为葡萄糖和果糖，并首先利用葡萄糖。氮源总浓度（包括ＮＨ＋４和ＮＯ－３）为６０～１２０ｍｍｏｌ／Ｌ，ＮＨ＋４／ＮＯ－３比例为２０／４０有利于雪莲细胞生长和黄酮合成。用ＨＰＬＣ检测显示４′，５，７三羟基３′，６二甲氧基黄酮（Ｊａｃｅｏｓｉｄｉｎ）和４′，５，７三羟基６甲氧基黄酮（Ｈｉｓｐｉｄｕｌｉｎ）２种黄酮的含量分别达到细胞干重的１４６％和００１０％

碳源和氮源对水母雪莲悬浮培养细胞生长和黄酮合成的影响

在ＭＳ培养基上进行水母雪莲细胞悬浮培养时研究了碳源和氮源的影响。结果表明碳源以蔗糖最适合，蔗糖浓度则以４０ｇ／Ｌ较好，细胞生长量干重为１８．１２ｇ／Ｌ，总黄酮合成量达到１４２３．２５ｍｇ／Ｌ

水母雪莲悬浮培养细胞生长和黄酮类活性成分合成

在ＭＳ培养基上进行水母雪莲（ＳａｕｓｕｒｅａｍｅｄｕｓａＭａｘｉｍ．）细胞悬浮培养，研究了摇床转速、接种量、培养液初始ｐＨ、碳源等的影响。结果表明，摇床转速为９０～１２０ｒ／ｍｉｎ，接种量为５０～８０ｇＦＷ／Ｌ，培养液初始ｐＨ５．５～６．０，对水母雪莲悬浮培养细胞生长和黄酮合成最有利。碳源以蔗糖最适合，蔗糖浓度则以４０ｇ／Ｌ较好，此时细胞生长量为１８～１９ｇＤＷ／Ｌ，总黄酮合成量可达１４２３．２５ｍｇ／Ｌ。用ＨＰＬＣ检测显示４′，５，７三羟基３′，６二甲氧基黄酮（ｊａｃｅｏｓｉｄｉｎ）和４′，５，７三羟基６甲氧基黄酮（ｈｉｓｐｉｄｕｌｉｎ）的含量分别达到总黄酮含量的２２．１１％和０．１５％

植物细胞培养生产黄酮类化合物研究进展

黄酮类化合物是中药的一种主要有效成分，本文综述了利用植物细胞培养方法合成黄酮类化合物的研究状况和各种环境条件对植物细胞生长和黄酮类化合物合成的影响

水母雪莲悬浮培养细胞生长和黄酮类活性成分合成

在ＭＳ培养基上进行水母雪莲（ＳａｕｓｕｒｅａｍｅｄｕｓａＭａｘｉｍ．）细胞悬浮培养，研究了摇床转速、接种量、培养液初始ｐＨ、碳源等的影响。结果表明，摇床转速为９０～１２０ｒ／ｍｉｎ，接种量为５０～８０ｇＦＷ／Ｌ，培养液初始ｐＨ５．５～６．０，对水母雪莲悬浮培养细胞生长和黄酮合成最有利。碳源以蔗糖最适合，蔗糖浓度则以４０ｇ／Ｌ较好，此时细胞生长量为１８～１９ｇＤＷ／Ｌ，总黄酮合成量可达１４２３．２５ｍｇ／Ｌ。用ＨＰＬＣ检测显示４′，５，７三羟基３′，６二甲氧基黄酮（ｊａｃｅｏｓｉｄｉｎ）和４′，５，７三羟基６甲氧基黄酮（ｈｉｓｐｉｄｕｌｉｎ）的含量分别达到总黄酮含量的２２．１１％和０．１５％