Effects of transfection with acidic fibroblast growth factor by electroporation on skeletal muscle satellite cells

背景:课题组早期研究表明体外一定剂量酸性成纤维细胞生长因子对骨骼肌卫星细胞增殖有促进作用。目的:进一步验证电穿孔转染酸性成纤维细胞生长因子基因对骨骼肌卫星细胞生长、增殖及分化的影响。方法:原代培养、纯化骨骼肌卫星细胞,将带有酸性成纤维细胞生长因子基因的质粒P SECTAg-gfP-A fgf通过电转染的方法转染大鼠骨骼肌卫星细胞,荧光显微镜观察绿色荧光蛋白的表达情况并计算转染率,以流式细胞仪分析转染后细胞周期,绘制细胞生长曲线,观察转染后肌管形成情况,WESTErn blOTIng检测酸性成纤维细胞生长因子基因的表达。结果与结论:1免疫细胞化学检测:骨骼肌肌动蛋白呈阳性表达。2转染效率:P SECTAg-A fgf质粒电转染12 H后即可看见散在发绿色荧光的卫星细胞,72-96 H达高峰,阳性表达率约90%。3细胞周期检测:电转染后S期所占的百分比明显多于未转染对照组(P<0.05)。4细胞生长曲线检测:电转染细胞接种后第3天进入对数生长期,第5天后开始减少。5分化能力观察:电转染组肌管较未转染对照组明显减少,老化细胞较少。6WESTErn-blOT:酸性成纤维细胞生长因子基因在转染骨骼肌卫星细胞中表达。结果表明,通过电穿孔法可以将酸性成纤维细胞生长因子基因转染进骨骼肌卫星细胞并获得高效持久的表达,并有促进骨骼肌卫星细胞增殖及抑制分化为肌管的作用。BACKGROUND: Previous studies have shown that a certain dose of acidic fibroblast growth factor can promote skeletal muscle satellite cell proliferation in vitro.OBJECTIVE: To investigate the effects of transfection with acidic fibroblast growth factor by electroporation on growth, proliferation and differentiation of skeletal muscle satellite cells.METHODS: Skeletal muscle satellite cells were cultured and purified, and then transfected with plasmid p Sectag-GFP-a FGF by electroporation.The expression of green fluorescent protein was observed under fluorescence microscope, and the transfection efficiency was calculated.After transfection, cell cycle was analyzed by flow cytometry to draw the growth curve of skeletal muscle satellite cells.Western blot assay was employed to measure protein level of acidic fibroblast growth factor.RESULTS AND CONCLUSION:(1) Immunocytochemistry detection: The skeletal muscle satellite cells were positive for a-sarcomeric actin.(2) Transfection efficiency: At 12 hours after transfection with p Sectag-a FGF, several cells showed green fluorescence, and the green fluorescent expression reached the peak at 72-96 hours after transfection with a positive rate of about 90%.(3) Cell cycle: After electrotransfection, the proportion of cells at S phase in the electroporation group was higher than that in the control group(P < 0.05).(4) Cell growth curve: At 3 days after electrotransfection, the cells entered logarithmic growth phase but the proliferation slowed down at 5 days.(5) Differentiation capacity: There were fewer myotubes and aging cells in the electroporation group than the control group.(6) Western blot assay: Acidic fibroblast growth factor protein was highly expressed in the cells transfected with target gene detected by western blot assay.These findings indicate that by using electroporation method, acidic fibroblast growth factor can be transferred into skeletal muscle satellite cells and have a high-efficiency and long-term expression, which can promote the proliferation of skeletal muscle satellite cells and inhibit formation of myotubes

新时代一流本科教育的重建(笔会)

继\"双一流\"建设正式实施,建设一流本科教育成为我国高等教育发展的又一重要任务。一流本科教育的概念具有历史性、时代性、国别性和普遍性。\"以本为本\"的提出重在强调本科教育的最基础地位、本科教学的最基本职能、本科教育的最基本特质。建设一流的本科教育首先需要有先进的教育理念,明确其基本定位、指导思想、主要内涵与实施路径。提高本科教育质量的关键在于结构化育人模式,而通过学生课程学习经历调查可以评估本科教与学的质量。在建设一流本科教育中,还要重视学业考核制度建设,推进教育评价改革,构建良好的师生关系。对于一流研究型大学,要凸显一流本科的特色,处理好本科教育与学科发展的关系。国家社科基金“十三五”规划2017年度教育学重大招标课题“‘双一流’建设背景下高校学科调整与建设研究”(项目编号:VIA170003)的阶段性研究成果;;教育部人文社科重点研究基地重大项目“中国特色的大学内部治理结构与质量保障机制建设研究”(项目编号:18JJD880005)的阶段性研究成果;;国家社科基金(管理学)一般项目“管办评分离背景下大学社会评价体系和机制研究”(项目编号:16BGL172)的阶段性研究成果;;中国高教学会“中国高等教育改革发展重大理论实践问题研究”之“一流大学建设与一流本科教育的研究”(项目编号:2017ZD02)的阶段性研究成果

Effects of soil water content on biomass and water consumption characteristics of wild jujube(Zizyphus jujuba Mill var.Spinosus(Bunge) Hu ex H.F.Chou)

【目的】通过盆栽试验研究酸枣生物量与耗水特性的关系,为酸枣的生产管理提供参考。【方法】以1年生酸枣为研究对象,用称质量控水法控制土壤水分含量,设重度胁迫(SD,含水量为田间持水量的35%)、中度胁迫(MD,含水量为田间持水量的55%)和适宜水分(CK,含水量为田间持水量的75%)3个水分处理,测算不同水分处理条件下酸枣的耗水量、单株生物量、组织含水量、叶片数及叶面积,分析酸枣生物量与耗水特性的关系。【结果】不同土壤水分条件下,酸枣耗水量差异很大,土壤水分含量越高,酸枣耗水量越大;适宜水分条件下酸枣的平均耗水强度为0.1178kg/(株&middot;d);土壤越干旱,酸枣组织含水量越低,在中度和重度胁迫水分条件下,酸枣的平均耗水强度分别为0.0868和0.0723kg/(株&middot;d);酸枣的全年耗水量高峰出现在7月底到8月中旬。3个水分条件下,酸枣生物量和组织含水量均表现为CK&gt;MD&gt;SD,叶片数和叶面积最大值表现为CK&gt;MD&gt;SD,叶片数最大值的出现时间以SD早于MD和CK。【结论】水分供应越少酸枣组织含水量越低,而且即使在适宜的水分条件下,酸枣的组织含水量也低于700g/kg;生长后期落叶,叶片对气孔的控制能力下降,导致生...【Objective】The relationship between biomass and water consumption characteristics of Zizyphus jujuba Mill var.Spinosus(Bunge)Hu ex H.F.Chou which was cultivated in pot on different soil water contents was studied,then the result can be consulted by wild jujube growers.【Method】Wild jujube seedling was cultivated in soils of three moisture levels,which was severe drought(SD,water content was 35% of field capacity),moderate drought(MD,water content was 55% of field capacity)and suitable water(CK,water content ..

Growth and Water Consumption Characteristics of wild jujube on Different Soil Water Contents

通过盆栽实验对不同土壤水分(相对含水量80%、65%和45%)下酸枣生长及耗水特性进行研究。结果发现:不同土壤水分下,酸枣耗水量差异很大,土壤水分含量越高,酸枣耗水量越大,相对含水量80%时酸枣平均耗水0.066 0 kgH_2O&middot;株~(-1)&middot;d~(-1);土壤越干旱,酸枣组织含水量越低,相对含水量65%的酸枣平均耗水0.024 6kgH_2O&middot;株~(-1)&middot;d~(-1),相对含水量45%的酸枣平均耗水0.016 5 kgH_2O&middot;株~(-1)&middot;d~(-1);土壤水分供应充足有利于酸枣地上部分的生长,而干旱胁迫则有利于酸枣根系的生长

投喂水平对长吻仔稚鱼生长和存活的影响

以长吻仔鱼为实验对象,探讨不同投喂水平对7—14日龄阶段和21—29日龄阶段的长吻仔稚鱼存活、生长以及鱼体组成的影响。7—14日龄阶段设计6个投喂水平,分别为:20、30、40、50、60和70%IBW/d(IBW:initial body weight);21—29日龄阶段设计6个投喂水平:10、20、30、40、50、60%IBW/d。实验结果表明:(1)投喂水平显著影响长吻仔稚鱼的存活和生长(P<0.05)。7—14日龄阶段,投喂水平为30%—60%IBW/d处理组的仔鱼存活率显著高于20%与70%IBW/d投喂组(P<0.05)。特定生长率随投喂水平的增加显著上升,以60%IBW/d投喂组最高(P<0.05)。21—29日龄期间,10%IBW/d投喂组存活率显著低于50%IBW/d投喂组(P<0.05),特定生长率(SGR)则显著低于其他各处理组(P<0.05);(2)鱼体体长体重变异系数未受投喂水平的显著影响。鱼体产出与饲料投入之比、鱼体水分含量随投喂水平升高显著下降(P<0.05),粗蛋白含量则显著上升(P<0.05);粗脂肪和粗灰分含量无显著差异;(3)分别通过存活率和投喂水平做一元二次回归、特定生长率与投喂水平做折线回归得到7—14日龄阶段的仔鱼最适投喂水平为43%IBW/d;通过仔鱼存活率和特定生长率与饲料投喂水平做折线回归得到21—29日龄阶段的仔鱼最适投喂水平分别为30.62%IBW/d和28.41%IBW/d

饲料中不同维生素C含量对长吻的影响

用维生素C含量为38、364和630mg/kg的三种饲料饲喂初体重为(23.19&plusmn;0.58)g的长吻8个月,实验结果表明,38mg/kgVC饲料组饲喂的长吻表现出了典型的VC缺乏症状:体色发黑,脊椎侧弯,鳍边由开始的萎缩直到腐烂、贫血、特定生长率显著降低(p&lt;0.05)。并且38mg/kgVC饲料组长吻的生理指标也受到影响:血清溶菌酶活性显著下降(p&lt;0.05),肝脏的SOD活性及MDA含量均显著升高(p&lt;0.05),血清皮质醇没有显著差异(p&gt;0.05),但各处理组长吻肝脏中均未检测到诱导型H

投喂水平对长吻(鱼危)仔稚鱼生长和存活的影响

以长吻(鱼危)仔鱼为实验对象,探讨不同投喂水平对7—14日龄阶段和21—29日龄阶段的长吻(鱼危)仔稚鱼存活、生长以及鱼体组成的影响。7—14日龄阶段设计6个投喂水平,分别为:20、30、40、50、60和70%IBW/d(IBW:initial body weight);21—29日龄阶段设计6个投喂水平:10、20、30、40、50、60%IBW/d。实验结果表明:(1)投喂水平显著影响长吻(鱼危)仔稚鱼的存活和生长(P<0.05)。7—14日龄阶段,投喂水平为30%—60%IBW/d处理组的仔鱼存活率显著高于20%与70%IBW/d投喂组(P<0.05)。特定生长率随投喂水平的增加显著上升,以60%IBW/d投喂组最高(P<0.05)。21—29日龄期间,10%IBW/d投喂组存活率显著低于50%IBW/d投喂组(P<0.05),特定生长率(SGR)则显著低于其他各处理组(P<0.05);(2)鱼体体长体重变异系数未受投喂水平的显著影响。鱼体产出与饲料投入之比、鱼体水分含量随投喂水平升高显著下降(P<0.05),粗蛋白含量则显著上升(P<0.05);粗脂肪和粗灰分含量无显著差异;(3)分别通过存活率和投喂水平做一元二次回归、特定生长率与投喂水平做折线回归得到7—14日龄阶段的仔鱼最适投喂水平为43%IBW/d;通过仔鱼存活率和特定生长率与饲料投喂水平做折线回归得到21—29日龄阶段的仔鱼最适投喂水平分别为30.62%IBW/d和28.41%IBW/d