Crioconservación de semen de dorada Brycon sinuensis con diferentes crioprotectores a dos porcentajes de inclusión

El objetivo del estudio fue evaluar la criopreservación de semen de dorada Brycon sinuensis con dimetilsulfóxido (DMSO), dimetilacetamida (DMA) o etilenglicol (EG) a dos porcentajes de inclusión (5 o 10%); para lo cual se indujeron 12 machos con 5 mg extracto hipofisario de carpa por Kg de peso y seis horas después el semen fue colectado en tubos Falcón de 20 ml. El semen fue diluido (1:4) en la solución crioprotectora compuesta por glucosa 6%, yema de huevo 12% y DMSO o DMA o EG a dos porcentajes de inclusión (5 o 10%); luego fue empacado en pajillas de 2.5 mL y congelado en vapores de nitrógeno líquido (NL) durante 30 minutos y posteriormente almacenadas en NL en termos de 34 L. El semen fue descongelado por inmersión directa en baño serológico a 35°C durante 60 segundos. La calidad del semen fresco, precongelado y descongelado fue evaluada con la ayuda del software Sperm Class Analyzer (SCA, Microptic, España) y un microscopio de contraste de fase (Nikon E55, Japón) mediante la movilidad total, tipos de movilidad (rápida, media, lenta), espermatozoides inmóviles, velocidades (lineal y curvilínea), progresividad total y concentración espermática. Además, en el semen descongelado, se evaluaron los daños en membrana espermática (D-Mem), en mitocondria (D-Mit) y fragmentación de DNA (F-DNA) mediante citometría de flujo (Citómetros FACS CANTO II, BD Biosciences San José, CA y LSR 2 FORTESSA) (BD Biosciences San José, CA). El semen fresco presentó alta movilidad total (97.07.0%); mientras que en semen precongelado (82.517.9%) y descongelado (45.413.6%) fue mayor cuando fue tratado con DMSO10% (p0.05). Los resultados del presente estudio permiten concluir que DMSO incluido a 5 o 10%, registró mejor calidad del semen descongelado al compararlo con los obtenidos con DMA y EG; sin embargo, la capacidad fecundante del semen criopreservado con esta solución crioprotectora (DMSO 5 o 10%, yema de huevo 12% y glucosa 6%) debe ser evaluada mediante pruebas de fertilidad y eclosión.1. INTRODUCCIÓN 142. OBJETIVOS 172.1. OBJETIVO GENERAL 172.2. OBJETIVO ESPECÍFICO 173. HIPÓTESIS 183.1. HIPÓTESIS NULA (H0) 183.2. HIPÓTESIS ALTERNATIVA (H1) 184. MARCO TEÓRICO 194.1. BIOECOLOGÍA DE DORADA Brycon sinuensis 194.2. CRIOCONSERVACIÓN DE SEMEN DE PECES 204.2.1. Crioprotectores 234.3. EVALUACIÓN DE LA CALIDAD ESPERMÁTICA 244.3.1. Movilidad espermática 254.3.2. Daño en membrana espermática y mitocondrias 264.3.3. Fragmentación del DNA 274.3.3. Fragmentación del DNA 275. METODOLOGÍA 285.1. LOCALIZACIÓN Y DESCRIPCIÓN DEL ÁREA DEL ESTUDIO 285.2. MATERIAL BIOLÓGICO 285.3. OBTENCIÓN DEL SEMEN Y EVALUACIÓN SEMINAL 295.4. TRATAMIENTOS 295.5. CRIOPRESERVACIÓN DEL SEMEN 305.5.1. Empacado y congelación 305.5.2. Descongelación del semen 315.6. CALIDAD SEMINAL 315.6.1. Volumen seminal 315.6.2. Concentración espermática 315.6.3. Tiempo de activación 325.6.4. Movilidad total, tipos de movilidad, velocidades y progresividad espermática 325.7. EVALUACIÓN DE DAÑOS POR CITOMETRÍA DE FLUJO 325.7.1. Daño en la membrana espermática y mitocondrias 325.7.2. Fragmentación del DNA 335.8. DISEÑO EXPERIMENTAL Y ANALISIS ESTADÍSTICO 346. RESULTADOS 356.1. CARACTERÍSTICAS DEL SEMEN DE DORADA 356.2. CALIDAD DEL SEMEN PRECONGELADO 356.3. CALIDAD DEL SEMEN DESCONGELADO 376.4. DAÑO CELULAR EN SEMEN DESCONGELADO 396.4.1. Daño en mitocondrias 396.4.2. Daño en membrana espermática 406.4.3. Fragmentación del DNA 406.5. EFECTO DE FACTORES EVALUADOS Y SU INTERACCIÓN 417. DISCUSIÓN 438. CONCLUSIONES 539. BIBLIOGRAFÍA 54MaestríaMagíster en Ciencias AmbientalesTrabajos de Investigación y/o Extensió