In vitro reconstitution and biochemical characterization of yeast silent chromatin

Abstract

Aux niveaux des télomères et du locus HM chez "Saccharomyces cerevisiae", la chromatine organisée en structure d'ordre supérieur conduit à une répression transcriptionnelle dans ces régions. Cette répression nécessite Sir2 ainsi que Sir3 et Sir4. Nous avons mis au point un système in vitro qui permet l'assemblage du complexe Sir2-3-4 sur un fragment d'ADN nucléosomique. L'hétéro-trimère Sir2-3-4 purifié s'associe de façon coopérative au fragment d'ADN produisant un complexe stable de masse moléculaire homogène. Alors que l'association de Sir3 aux nucléosomes est sensible à la présence de la queue de l'histone H4, celle de Sir2-4 ne l'est pas, en raison d'une forte interaction entre Sir4 et l'ADN. La méthylation de la lysine 79 de l'histone H3 par Dot1 réduit l'association de Sir3 ainsi que du complexe entier. Par contre, le produit de la réaction engendrée par Sir2, "O"-acetyl-ADP-ribose, stimule fortement l'association de Sir3 ou du complexe Sir2-3-4 aux nucléosomes