Estudio de la propiedad antiinflamatoria de Cannabidiol en un modelo de sensibilización locomotora inducido por cocaína y cafeína en ratón

Cannabidiol (CBD) es uno de los principales cannabinoides de la planta Cannabis sativa, sin acción psicotomimética o reforzadora. Varios estudios preclínicos han reportado que CBD posee propiedades beneficiosas como antiepiléptico, antidepresivo y ansiolítico, antiinflamatorio y neuroprotector. Estas propiedades han despertado el interés en su uso médico en varios desórdenes neurológicos y neuropsiquiátricos entre las cuales se incluye el trastorno por uso de sustancias (Substance Use Disorder, SUD). El SUD es un trastorno crónico caracterizado por la búsqueda compulsiva de drogas, pérdida de control sobre su consumo y la aparición de un síndrome de abstinencia cuando se ve impedido el consumo de la sustancia. Cocaína es una droga de abuso, psicoestimulante prototípica. Su prevalencia de consumo y sus efectos negativos son un problema de salud a nivel mundial. El desafío principal se encuentra en la búsqueda de estrategias eficaces para el tratamiento del desorden de uso de drogas psicoestimulantes. Desde hace varios años, en nuestro laboratorio trabajamos con una forma fumable de cocaína, la pasta base de cocaína (PBC). Reportamos que muestras de PBC incautadas en Uruguay, tenían un contenido variable de cocaína, y estaban adulteradas con cafeína. En modelos animales, demostramos que la presencia de cafeína potenciaba o aceleraba las acciones de cocaína, entre las cuales se encuentra el fenómeno de sensibilización locomotora. Existen reportes en la literatura que asocian este fenómeno inducido por cocaína con la aparición de procesos inflamatorios, sugiriendo que agentes antiinflamatorios podrían ser útiles en el tratamiento del SUD. De manera interesante, demostramos que CBD es capaz de atenuar la sensibilización locomotora inducida por la combinación de cocaína y cafeína (CocCaf) a las proporciones encontradas en las muestras de PBC. Quedaba pendiente avanzar en los mecanismos subyacentes. En este trabajo de tesis hipotetizamos que: 1) la sensibilización locomotora inducida por la administración repetida de CocCaf se asocia a la aparición de procesos inflamatorios en regiones del circuito motivacional, y 2) CBD atenúa la sensibilización locomotora a través de su propiedad antiinflamatoria. Teniendo en cuenta que el bloqueo del transportador equilibrativo de nucleósidos de tipo 1 (ENT1) se relaciona con la propiedad antiinflamatoria de CBD evidenciada en modelos in vitro se comenzó a estudiar el papel de esta proteína en la acción de CBD. El objetivo general de este trabajo fue evaluar la capacidad de CBD de atenuar la sensibilización locomotora y los procesos inflamatorios asociados, a través de su propiedad antiinflamatoria, vía bloqueo de ENT1. Ratones machos adultos fueron co-tratados con CocCaf (5 y 2.5 mg/kg/i.p.) y CBD (20 mg/kg) o sus respectivos vehículos en un protocolo de sensibilización locomotora de 5 días. La actividad locomotora fue evaluada cada día en un campo abierto durante 60 min, mediante el software de video seguimiento Ethovision XT17. Finalizado el experimento conductual, los animales fueron incluidos en dos grupos experimentales a los que se les realizó: 1) disección del cerebro para evaluar la reactividad microglial en el núcleo accumbens (NAcc) por inmunofluorescencia para Iba-1 en criocortes y microscopía confocal; 2) obtención de muestras de plasma, para posteriormente cuantificar citoquinas plasmáticas pro- y anti-inflamatorias mediante citometría de flujo. En un grupo independiente de animales, se caracterizó el efecto agudo de Nitrobenzylthioinosine (NBTI), un inhibidor selectivo de ENT1 (20-0.1 mg/kg/i.p.), a través de una curva dosis-respuesta. Posteriormente, se evaluó su capacidad de atenuar la hiperactividad aguda inducida por CocCaf. Los resultados indicaron que los animales tratados con CocCaf desarrollaron la sensibilización locomotora. Dicho efecto se acompañó de un aumento en la inmunorreactividad para Iba-1, en las subregiones core y shell del NAcc, sin alterar el número de células positivas para Iba-1. Aunque CBD no atenuó, en términos generales, el desarrollo de la sensibilización locomotora, en un análisis específico se identificaron 3 grupos de animales en los que CBD parece atenuar, potenciar el efecto de CocCaf, o no inducir ningún efecto. No se evidenciaron cambios significativos en la señal Iba-1, ni en los niveles de citoquinas plasmáticas. Por otro lado, únicamente las dosis de 0.1 y 0.5 mg/kg de NBTI no indujeron un efecto per se, aunque no bloquearon la hiperactividad locomotora inducida por el tratamiento agudo de CocCaf. El conjunto de resultados presentados en esta tesis profundiza el estudio de los efectos inducidos por la combinación de cocaína y cafeína sobre el fenómeno de la sensibilización locomotora y los procesos inflamatorios asociados. Se destaca la importancia de estudiar más a fondo el efecto de CBD en ambos procesos, identificando la necesidad de realizar otros protocolos experimentales que contemplen mayor duración del tratamiento o aumento de dosis de CBD, o la inclusión de un periodo de abstinencia y la evaluación de CBD en la expresión de la sensibilización. Los hallazgos de esta tesis sientan las bases para estudios futuros que permitan comprender mejor el impacto de CBD en la neurobiología y tratamiento del SUD.Agencia Nacional de Investigación e InnovaciónComisión Académica de PosgradoPrograma de Desarrollo de las Ciencias BásicasProyecto Fondo Clemente Establ

FhaA plays a key role in mycobacterial polar elongation and asymmetric growth

Mycobacteria, including pathogens like Mycobacterium tuberculosis, exhibit unique growth patterns and cell envelope structures that challenge our understanding of bacterial physiology. This study sheds light on FhaA, a conserved protein in Mycobacteriales, revealing its pivotal role in coordinating cell envelope biogenesis and asymmetric growth. The elucidation of the FhaA interactome in living mycobacterial cells reveals its participation in the protein network orchestrating cell envelope biogenesis and cell elongation/division. By manipulating FhaA levels, we uncovered its influence on cell morphology, cell envelope organization, and the localization of peptidoglycan biosynthesis machinery. Notably, fhaA deletion disrupted the characteristic asymmetric growth of mycobacteria, highlighting its importance in maintaining this distinctive feature. Our findings position FhaA as a key regulator in a complex protein network, orchestrating the asymmetric distribution and activity of cell envelope biosynthetic machinery. This work not only advances our understanding of mycobacterial growth mechanisms but also identifies FhaA as a potential target for future studies on cell envelope biogenesis and bacterial growth regulation. These insights into the fundamental biology of mycobacteria may pave the way for novel approaches to combat mycobacterial infections addressing the ongoing challenge of diseases like tuberculosis in global health. IMPORTANCE Mycobacterium tuberculosis, the bacterium responsible for tuberculosis, remains a global health concern. Unlike most well-studied model bacilli, mycobacteria possess a distinctive and complex cell envelope, as well as an asymmetric polar growth mode. However, the proteins and mechanisms that drive cell asymmetric elongation in these bacteria are still not well understood. This study sheds light on the role of the protein FhaA in this process. Our findings demonstrate that FhaA localizes at the septum and asymmetrically to the poles, with a preference for the fast-growing pole. Furthermore, we showed that FhaA is essential for population heterogeneity and asymmetric polar elongation and plays a role in the precise subcellular localization of the cell wall biosynthesis machinery. Mycobacterial asymmetric elongation results in a physiologically heterogeneous bacterial population which is important for pathogenicity and response to antibiotics, stressing the relevance of identifying new factors involved in these still poorly characterized processes.ANII: FCE_1_2014_1_104045ANII: POS_NAC_2012_1_8824ANII: POS_NAC_2015_1_109755ANII: POS_FCE_2015_1_1005186ANII: POS_FCE_2020__100918

Plasmid Library Construction From Genomic DNA

Functional genomic approaches have been effective at uncovering the function of uncharacterized genes and identifying new functions for known genes. Often these approaches rely on an in vivo screen or selection to associate genes with a phenotype of interest. These selections and screens are dependent upon the expression of proteins encoded in genomic DNA from an expression vector, such as a plasmid. Despite the utility of genomic DNA plasmid libraries, the protocols for their construction have remained unchanged in the past 40 years. Here, we present a procedure for constructing plasmid libraries from genomic DNA. This procedure is scalable and relies on simple techniques and common laboratory equipment and reagents. Briefly, the genomic DNA is extracted and then physically fragmented with a g-TUBE, overhangs are repaired, and fragments are selectively purified with magnetic beads to obtain an average fragment size of 2.5 kb. Blunted fragments are ligated into a blunt-end-digested and dephosphorylated vector. Finally, the library is amplified by electroporating the ligation into a high-transformation-efficiency Escherichia coli strain and extracting the plasmid DNA from the transformants. As a proof of concept, we built and sequenced three genomic libraries from different genomes and calculated their coverage using a next-generation sequencing (NGS) workflow. © 2025 The Author(s). Current Protocols published by Wiley Periodicals LLC. Basic Protocol: Plasmid library construction Alternate Protocol: Selection of gDNA fragments using SageELF gel fractionator Support Protocol 1: Extraction of gDNA with phenol/chloroform Support Protocol 2: Vector preparation.Agencia Nacional de Investigación e InnovaciónNew England Biolabs, Inc.Programa de Desarrollo de las Ciencias Basicas, Universidad de la Republica, Urugua

Reporte de Aristas 18. Cambios en creencias y actitudes de los adolescentes con relación a la diversidad e igualdad de género

El presente reporte se centra específicamente en los cambios en las creencias y actitudes de los estudiantes de tercero de educación media con relación a la apertura hacia la diversidad e igualdad de género. Para esto se utilizan los datos de Aristas Media 2018 y 2022. En primer lugar, se describe la evolución de las creencias y actitudes sobre la diversidad e igualdad de género entre 2018 y 2022 y cómo difieren entre distintos grupos de estudiantes. En segundo lugar, se analiza en qué medida el entorno y la convivencia dentro del centro educativo se asocian con estas creencias y cómo han variado estos aspectos de la convivencia. Por último, se indagan características de los estudiantes y sus familias asociadas con estas creencias y actitudes, y su variación entre 2018 y 2022

Aluminum compounds as a management tool for Eutrophic Lakes : state of the art

Chemical applications in eutrophic lakes, known as geoengineering interventions, have been utilized for decades. This review provides an overview of the applications of aluminum compounds for lake rehabilitation based on numerous case studies obtained through a systematic search methodology. The results reviewed indicate that, given appropriate doses, aluminum compounds have generally proven effective in reducing the internal phosphorus load and preventing cyanobacterial blooms. However, it is important to acknowledge certain limitations and cases where undesired effects have been detected (such as acidification and fish mortality), emphasizing the need to design off the applications carefully. Polyaluminum chloride (PAC) is preferred mainly due to its higher pH buffering capacity, flocculation efficiency, and avoidance of sulfate addition and interference in sulfur cycles. Dose calculation should be based on the internal load criterion, with limitations on the amount dosed in each application. Direct application in the water column is the most reported methodology and has shown logistic advantages. Climate and weather knowledge are relevant for defining timing. However, varied treatment efficiencies have been reported, so it is necessary to conduct comprehensive pre-application experiments. It is also recommended to include mesocosm-scale testing as a preliminary stage before applying treatments to the entire lake. The review also discusses the effects on water characteristics, the factors that affect the efficacy and longevity of applications, and the use of aluminum compounds in combination with other substances for ballasting or capping purposes. Furthermore, the interaction of such treatments with biota is also considered. We conclude that the intervention strategy should consider the systemic and functional perspective, as well as each lake’s characteristics. The lake-specific nature of aluminum treatments underscores the importance of characterizing individual lakes before designing applications or extrapolating results to other systems

Caracterización patológica y cinética de diseminación e inmunogenicidad de la infección por Leptospira spp. autóctonas en un modelo experimental bovino

El objetivo de este trabajo fue determinar la capacidad de infección a través de mucosas, cinética de diseminación, inmunogenicidad y el cuadro lesional de cuatro variantes de Leptospira spp. autóctonas: Leptospira noguchii sg Autumnalis, Leptospira interrogans sg Pomona sv Kennewicki, Leptospira borgpetersenii sg Sejroe sv Hardjo y Leptospira interrogans sg Canicola sv Canicola, en un modelo experimental bovino. Para esto se utilizaron 20 terneras Braford de tres meses de edad, de madres/terneras seleccionadas con test serológico y molecular negativo a leptospira; divididas en 5 grupos (cuatro infectantes y un grupo control). Se inoculó por vía intranasal e intraconjuntival simultáneamente las distintas variantes a cada grupo (n=4) y fueron evaluadas durante 21 días post-infección (p.i). Ninguna de las variantes ocasionó enfermedad aguda y lesiones macroscópicas en las terneras en los 21 p.i. Histológicamente, se observó nefritis, hepatitis, miocarditis y colecistitis linfohistiocitaria, en los cuatro grupos infectantes. En la tinción de Warthin-Starry se observaron leptospiras en la luz de túbulos renales en animales infectados con las cuatro variantes. Se observó inmunomarcación positiva en riñón, hígado y vesícula biliar. Las cuatro variantes estudiadas fueron detectadas por qPCR y cultivo microbiológico en riñón, hígado y orina. Además, la variante Kennewicki fue detectada por qPCR y cultivo en sangre y la variante Autumnalis se detectó mediante qPCR y cultivos en útero. Se logró obtener cultivos puros de la variante Kennewicki de muestras de orina; y de la variante Canicola de muestras de orina, hígado y riñón. En cuanto a la serología (MAT), se detectaron títulos de anticuerpos en los cuatro grupos infectantes. En conclusión, las cuatro variantes utilizadas demostraron ser infectivas, inmunogénicas y presentaron un patrón sistémico de infección, sin embargo, no desencadenaron enfermedad clínica ni lesiones macroscópicas en 21 días p.i. A nivel histopatológico, se observó colecistitis, lesión reportada anteriormente en humanos afectados por leptospirosis pero que no había sido descrita en bovinos

Canine obesity, overweight, and adipokine serum concentration are associated with hematological, biochemical, hormonal, and cardiovascular markers

Background: Canine obesity is an increasingly concerning issue that negatively impacts dogs’ health, quality of life, and lifespan. Aim: This study aimed to evaluate the adipokine profiles of overweight (OW) and obese (OB) dogs and their associations with various hematological, biochemical, hormonal, and cardiovascular markers. Methods: A total of 84 dogs were classified according to their body condition scores as normal weight (NW), OW, or OB, and were subsequently subjected to blood pressure measurement, blood testing, and urine sampling. Results: The findings revealed that OB dogs had higher serum concentrations of leptin and resistin while exhibiting lower levels of adiponectin when compared to NW dogs. Additionally, they showed higher systolic blood pressure. Serum creatinine levels were lower in OB dogs, and urinary specific gravity was reduced in both OW and OB dogs compared to their NW counterparts. Furthermore, total leukocyte counts and neutrophil counts were elevated in OW and OB dogs. The study also found that serum insulin levels were positively correlated with triglycerides, cholesterol, and C-reactive protein. Conclusion: Canine obesity is reflected in altered adipokine concentrations and is associated with insulin resistance, as well as changes in renal function, protein metabolism, and hematological markers

Motivações hedônicas, eudaimônicas e extrínsecas para práticade exercício físico : modelo de medida e redes nomológicas

O exercício contribui para o desenvolvimento pessoal, assim como sentir prazer na atividade física pode aumentar a adesão e a motivaçãopara a prática. Desse modo, o estudo teve como objetivo adaptar a Escala de Motivações Hedônica, Eudaimônica e Extrínseca no Exercício (HEEMA) para a população brasileira e estimar evidências de validade baseadas na estrutura interna, relação com outras variáveis e precisão. A amostra foi composta por 232 atletas, com idades entre 18 e 67 anos, de diferentes gêneros. A análise confirmatória demonstrou a adequação da estrutura oblíqua de três fatores, todos com bons indicadores de precisão, semelhante a proposta original. As motivações hedônicase eudaimônica relacionaram-se positivamente com mindfulness, satisfação das necessidades psicológicas básicas e paixão harmoniosa pelo exercício. A motivação extrínseca relacionou-se positivamente com frustração das necessidades psicológicas básicas e paixão obsessiva. Os resultados sugerem que a HEEMA é uma medida adequada para avaliar diferentes motivações nos atletas brasileiros.El ejercicio contribuye al desarrollo personal, al igual que experimentar placer en la actividad física puede aumentar la adherencia y la motivación para la práctica. Por lo tanto, el estudio tuvo como objetivo adaptar la Escala de Motivaciones Hedónicas, Eudaimónicas y Extrínsecas en el Ejercicio (HEEMA) para la población brasileña y estimar evidencias de validez basadas en la estructura interna, relación con otras variables y precisión. La muestra estuvo compuesta por 232 atletas, con edades entre 18 y 67años, de diferentes géneros. El análisis confirmatorio demostró la adecuación de la estructura oblicua de tres factores, todos con buenos indicadores de precisión, similar a la propuesta original. Las se relacionaron positivamente con la atención plena, la satisfacción de las necesidades psicológicas básicas y la pasión armoniosa por el ejercicio. La motivación extrínseca se relaciona positivamente con la frustración de las necesidades psicológicas básicas y la pasión obsesiva. Los resultados sugieren que la HEEMA es una medida adecuada para evaluar diferentes motivaciones en los atletas brasileños.The exercise contributes to personal development, just as experiencing pleasure in physical activity can increase adherence and motivation for practice. Thus, the study aimed to adapt the Hedonic, Eudaimonic, and Extrinsic Motivations in Exercise Scale (HEEMA) for the Brazilian population and estimate validity evidence based on internal structure, relationship with other variables, and precision. The sample consisted of 232 athletes, aged between 18 and 67, of different genders. Confirmatory analysis demonstrated the adequacy of the oblique three-factor structure, all with good indicators of precision, similar to the original proposal. Hedonic and eudaimonic motivations were positively related to mindfulness, satisfaction of basic psychological needs, and harmonious passion for exercise. Extrinsic motivation was positively related to frustration of basic psychological needs and obsessive passion. The results suggest that the HEEMA is an appropriate measure for assessing different motivations in Brazilian athletes

"There where Independence was born". Patriotic pilgrimages and commemorations of Mexican Independence in Dolores Hidalgo (1900-1910)

La investigación plantea el análisis de las conmemoraciones de la Independencia mexicana en Dolores Hidalgo en un período clave, marcado por la consolidación de Dolores como centro de peregrinaciones patrióticas y por el ambiente producto de los festejos del Centenario de la Independencia. Este período muestra la instrumentalización de la historia por el estado porfiriano, además, de los imaginarios que surgieron alrededor del mito del Grito, que ejemplifican la relación entre tiempo y espacio en los rituales conmemorativos. Por otro lado, el estudio de caso permite demostrar como los Estados nación han empleado etiquetas simbólicas para estructurar y sustentar la narrativa de sus mitos nacionalistas. Así categorías como Padre de la Patria, Día de la Independencia y Cuna de la Independencia son etiquetas que jerarquizan, explican y estructuran la narrativa del proceso de Independencia.The research proposes an analysis of the commemorations of Mexican Independence in Dolores Hidalgo during a key period, marked by the consolidation of Dolores as a center for patriotic pilgrimages and by the atmosphere created by the celebrations of the Centennial of Independence. This period shows the instrumentalization of history by the Porfirian state, as well as the imaginaries that arose around the myth of the «Grito», exemplifying the relationship between time and space in commemorative rituals. On the other hand, the case study demonstrates how nation-states have used symbolic labels to structure and sustain the narrative of their nationalist myths. Thus, categories such as Father of the Nation, Independence Dayand Cradle of Independenceare labelsthat hierarchize, explain, and structure the narrative of the independence process