Las lipoproteínas de baja densidad (LDL) se cuentan entre los inhibidores circulantes de la actividad procoagulante del factor tisular. El objetivo del trabajo fue explorar el comportamiento electroforético de las proteínas involucradas y la cinética de inhibición que permitieran desarrollar un ensayo cuantitativo in vitro capaz de poner en evidencia dicha capacidad. El ensayo cinético consistió en incubar tromboplastina cálcica comercial a 37 ºC con volúmenes crecientes de LDL aislada por precipitación selectiva redisuelta; se realizó a distintos tiempos el tiempo de protrombina en una etapa; se calcularon las actividades respectivas y el porcentaje de inhibición de la coagulabilidad respecto a un blanco. Los resultados muestran inhibición creciente hasta los 60 min en el intervalo entre 0,013 y 0,026 nmol de apoB, parámetros que definen las condiciones seleccionadas del ensayo que aplicado sobre 30 muestras de personas normolipémicas de ambos sexos (edades entre 30 y 70 años) presentó una media +/- SEM de 2.512 +/- 101,4 expresadas en porcentaje de inhibición de la coagulabilidad / nmol de apoB, hallando diferencia significativa en la condición diabética. El comportamiento electroforético, evaluado a tiempo cero mostró dos bandas pre-beta y beta, atribuibles a la tromboplastina y a la LDL respectivamente; en tanto que luego de incubar 60 min se observó una única banda intensificada de migración pre-beta que se podría atribuir a la presencia del complejo LDL - factor tisular. Son necesarios estudios clínicos que permitan evaluar los alcances de aplicación de los ensayos propuestos.Low-density lipoproteins (LDL) are circulating inhibitors of the pro-coagulant activity of tissue factor. The objective of the present work was to explore the electrophoretic mobility of the involved proteins and the kinetic of pro - coagulant activity inhibition, that allow us to propose a quantitative in vitro assay of potential clinical use. For the kinetic assay, commercial calcic thromboplastine was incubated with increasing volumes of redisolved - selectively precipitated LDL at 37 ºC. Then the prothrombine time in one step was made; the inhibitory activity and percentage of inhibition against a blank were calculated. The results show an increasing inhibition of procoagulant activity until 60 min between 0.013 – 0.026 nmol apoB. The conditions for the assay of 30 samples of normolipemic individuals (ages between 30 – 70 years old) were selected on the basis of these results.
The assay of % coagulation inhibition / nmol apoB showed signficative differences for control group versus diabetic one. The protein electrophoresis showed two bands in pre-beta and beta positions corresponding to thromboplastine and LDL respectively at time zero. After 60 min of incubation one intense band corresponding to LDL – tissue factor complex can be observed. This work proposes a simple assay for the evaluation of LDL role in haemostatic control in pathological conditions, although further clinical assays are still required.Facultad de Ciencias Exacta
