八肋游仆虫Rab家族新成员Eo—rab-1N基因的克隆与序列分析

Abstract

Rab蛋白家族属于小分子GTP结合蛋白家族Ras超家族中最大的亚家族，主要在囊泡运输中起作用。实验运用PCR、RT-PCR等技术，从八肋游仆虫中克隆到一种新的tab基因。序列分析结果表明：在大核中，该基因全长884bp，除去两端的端粒与非编码区，该基因在大核中由723bp组成。从小核中克隆相应的基因片段，此基因片段序列与大核中序列一致，表明该基因在小核中无内部删除序列的存在。通过RT-PCR，从mRNA获得的该基因的开放读框为663bp，表明该基因在转录过程中有内含子的删除。大核基因序列和cDNA序列比较，发现60bp的内含子序列位于大核基因的153～212bp之间，并符合一类内含子GU-AG剪切规则。在遗传密码使用上，该基因内部含有2个TGA，在游仆虫中编码半胱氨酸。同时首次发现，八肋游仆虫基因使用TAG作为终止密码子。NCBI上序列比对表明该基因翻译的蛋白与其他物种Rabl蛋白的同源性达49％～52％，因此我们将它命名为Eo-rab-1N，GenBank登录号为DQl05562。Eo-rab-1N与其他物种的Rab1蛋白构建进化树，发现该蛋白的进化与物种的进化保持一致，表明该基因在细胞中具有重要功能