The influence of miR-32-5p overexpression on the level of C/EBPβ, PPARγ and JNK in 3T3-L1 cells during adipogenesis

Abstract

Adipogeneza to złożony i wysoce kontrolowany proces, dzięki któremu komórki zyskują zdolność do asymilacji lipidów i tworzenia tkanki tłuszczowej. Ostatnie badania wykazały, że małe niekodujące RNA zwane mikroRNA (miRNA) są zaangażowane w wiele szlaków regulacyjnych i procesów biologicznych, w tym w różnicowanie komórek do adipocytów. Funkcja wielu miRNA w tym procesie pozostaje dalej nieznana. Zrozumienie molekularnych podstaw adipogenezy może przyczynić się do identyfikacji nowych biomarkerów i opracowania nowych leków przeciw otyłości oraz innych metod terapeutycznych. Celem przeprowadzonego doświadczenia było wykonanie analizy funkcjonalnej miR-32-5p, jednego z miRNA, które zostało powiązane z procesem różnicowania komórek do adipocytów, jednak mechanizm jego działania wciąż nie został poznany. Przedstawiona analiza pokazuje wpływ miR-32-5p na poziom białek C/EBPβ i PPARγ, które są biomarkerami adipogenezy oraz na poziom kinazy JNK należącej do szlaku kinaz MAP w komórkach 3T3-L1 podczas procesu adipogenezy. W trakcie wykonywania badania komórki mysich fibroblastów 3T3-L1 transfekowano miR-32-5p w celu wywołania jego nadekspresji, po czym oznaczono poziom badanych białek w dniach 0, 2 i 4 różnicowania. Kontrolę w eksperymencie stanowiły komórki transfekowane niespecyficznym miRNA. Wyniki wykazały, że nadekspresja miR-32-5p nie wpłynęła znacząco na poziom białek C/EBPβ i JNK, zaobserwowano za to istotny spadek poziomu PPARγ w dniu 4 różnicowania.Adipogenesis is a complex and highly controlled process by which cells gain the ability to assimilate lipids and form the adipose tissue. Recent studies have shown that small non-coding RNAs called microRNAs (miRNAs) are involved in many regulatory pathways and biological processes, including adipocyte differentiation. The function of many miRNAs in the process is still unclear. Understanding the molecular basis of adipogenesis can contribute to identification of new biomarkers and development of new anti-obesity drugs and therapeuting approaches.The aim of the experiment was to conduct a functional analysis of miR-32-5p, one of the miRNAs that has been associated with the process of cell differentiation to adipocytes, however its mechanism of action is still unknown. The presented analysis shows the effect of miR-32-5p on the level of C/EBPβ and PPARγ which are adipogenesis biomarkers and MAP pathway kinase JNK in 3T3-L1 cells during adipogenesis. In the course of the study, the 3T3-L1 mouse fibroblasts were transfected with miR-32-5p to induce its overexpression and the levels of the tested proteins on day 0, 2 and 4 of differentiation were determined. Cells transfected with non-specific miRNA were used as a control. The results showed that overexpression of miR-32-5p did not significantly affect the level of C/EBPβ and JNK proteins, but there was a significant decrease in the level of PPARγ on day 4 of differentiation