The effect of TGF-β on migration and metastasis markers of murine breast cancer E0771 in vitro

Abstract

TGF-β jest cytokiną wpływającą na migrację, proliferację, różnicowanie i apoptozę wielu typów komórek. Bierze on również udział w indukcji przejścia epitelialno – mezenchymalnego, przez co staje się potencjalnym czynnikiem wpływającym na progresję nowotworu. TGF-β prowadzi do wzrostu ekspresji N-kadheryn, wimentyny oraz czynników transkrypcyjnych EMT takich jak Snail.W celu zbadania wpływu TGF-β na komórki linii E0771 traktowano je TGF-β w stężeniu 1ng/ml przez cztery tygodnie. Wykonywano testy proliferacji, aktywności migracyjnej komórek oraz barwienia markerów przerzutowania: Snail-1, wimentyna, N-kadheryna oraz Cx43.Analiza proliferacji nie wykazała istotnych różnic pomiędzy komórkami kontrolnymi a traktowanymi TGF-β. Zauważono jednak promujący wpływ badanej cytokiny na ruchliwość komórek. Po traktowaniu komórki poruszały się szybciej i przebywały dłuższą drogę w porównaniu do komórek hodowanych w standardowych warunkach. Również ekspresja markerów przerzutowania takich jak Snail-1, wimentyna czy N-kadheryna uległa wzrostowi po potraktowaniu komórek TGF-β. Nie wykazano jednak istotnych różnic w ilości koneksyny 43. Na podstawie przeprowadzonych doświadczeń można wnioskować, że TGF-β pełni kluczową rolę w indukcji przejścia epitelialno – mezenchymalnego w komórkach E0771 i może przyczyniać się do nabywania przez komórki nowotworowe fenotypu inwazyjnego.TGF-β is a cytokine that affects migration, proliferation, differentiation and apoptosis in many cell types. TGF-β plays also an important role in the induction of the epitelial - mesenchymal transition (EMT), and therefore can affect the progression of a cancer. TGF-β causes an enhancement in expression of N-cadherin, wimentin and EMT transcription factors, such as Snail.To investigate effect of TGF-β on E0771 cells, cells were treated with TGF-β at a concentration of 1 ng/ml for 4 weeks. After this period proliferation and migration tests were done. Additionally, staining for metastasis markers, including Snail-1, vimentin, N-cadherin and Cx43, was performed.Proliferation test have not shown any significant differences between control and treated cells. However, TGF-β enhanced cell motility. Stimulated cells migrated faster and further compared to cells cultured in standard conditions. Also level of the metastasis markers such as Snail-1, vimentin, or N-cadherin increased after treatment with TGF-β. Any significant changes in expression of connexin 43 was not observed.This study has shown that TGF-β plays a key role in the induction of epitellial-mesenchymal transition in E0771 cells and may contribute to enhancement of invasiveness of cancer cells