基于质谱技术分析补骨颗粒对软骨细胞蛋白质组学的影响

Abstract

目的:通过定量观察补骨颗粒对大鼠膝关节软骨细胞蛋白质表达的影响,探讨补肾活血中药对软骨细胞的作用机制。方法:将软骨细胞经补骨颗粒含药血清传代培养后通过定量蛋白质组学串联质谱标签标记技术进行检测,使用Maxquant(v1.5.2.8)进行检索。选择UniProt-GOA数据库注释工具对差异蛋白进行基因功能聚类GO分析;采用KEGG在线服务工具KAAS对提交的蛋白进行注释,之后通过KEGG mapper将注释过的蛋白匹配入数据库相应的通路中进行检索分析;使用预测亚细胞定位的软件wolfpsort对所提交的蛋白进行亚细胞定位注释。结果:通过数据库检索,补骨颗粒含药血清及空白血清干预软骨细胞后共鉴定到5028个蛋白质,包含25 423个肽段,其中4297个蛋白质包含定量信息。以1.3倍为变化阈值,t检验中P <0.05为标准,空白血清组中163个蛋白表达发生上调,188个蛋白表达发生下调;补骨颗粒含药血清干预后有164个蛋白表达发生上调,58个蛋白表达发生下调。其中,具有生物学信息的目标差异蛋白有腺苷酸转位酶1、热休克蛋白27、肌浆/内质网钙ATP酶1、钠/钾转运ATP酶、果糖二磷酸醛缩酶A、3-磷酸甘油醛脱氢酶、磷酸甘油酸变位酶1、β-烯醇化酶、L-乳酸脱氢酶、糖原合成酶、肉碱棕榈酰转移酶1。结论:补骨颗粒能够影响软骨细胞的腺苷酸转位酶1、热休克蛋白27、醛缩酶A、β-烯醇化酶及肉碱棕榈酰转移酶1等表达,对于揭示软骨细胞的凋亡机制具有重要意义。福建省自然科学基金资助项目(2016J01597)福州市科技计划项目(2017-S-130-5