Propriétés enzymatiques de l'ATP diphosphohydrolase du pancréas de porc

Abstract

L'ATP diphosphohydrolase est un enzyme qui hydrolyse à vitesse égale l'ATP et l'ADP et qui se retrouve dans le pancréas de porc. L'ATP diphosphohydrolase est purifiée à partir de membranes de granules de zymogène. Cette étape permet d'obtenir une préparation enzymatique 160 fois plus active que l'homogénat. Après solubilisation dans du Triton X-100, cette préparation est soumise à une chromatographie d'affinité sur 5'-AMP Sepharose -4B et le gain de purification obtenu est de 1500 fois par rapport à l'homogénat. L'électrophorèse sur gel de polyacrylamide en présence de SDS effectuée sur notre préparation enzymatique purifiée révèle l'existence de deux protéines majeures de poids moléculaire de 58 000 et 28 000. Une bande mineure à 46 000 est aussi présente. Nous avons ensuite mesuré les effets des tons calcium et magnésium sur la cinétique d'hydrolyse du groupement y -phosphate à l'aide de l'ATP ( y - 32P). L'ATP en absence de tout cation divalent est hydrolysé et un Ks de 0.40 µ M est obtenu. En présence de sels et à des concentrations fixes de cation libre, des courbes hyperboliques normales sont obtenues pour l'hydrolyse de l'ATP en fonction de la concentration du complexe cation-ATP-2. Avec le CaCl2, le Kapp et le Yapp augmentent quand la concentration de ca2+ passe de 25 à 1000µ M. Avec le MgCl2, le Kapp augmente mais le Yapp diminue quand la concentration de Mg2+ passe de 25 à 500 µ M