Activité recombinogène de l'antigène grand T du virus du polyome dans des cellules de mammifères. Implication de la séquence 5'-CTC(AT)GAGA (GGCC)AA-3' dans l'amplification d'un minigène DHFR.

Abstract

Afin d'élucider le mécanisme par lequel les antigènes grand T des papovavirus induisent la recombinaison dans les cellules de mammifères, nous avons conçu un système permettant d'étudier la recombinaison homologue qui a lieu entre 2 copies défectueuses du gène T moyen du virus du polyome. Dans un tel système, les copies du gène sont situées à proximité l'une de l'autre sur un même chromosome dans des cellules de rat. Une recombinaison intramoléculaire entre les séquences homologues des gènes défectueux reconstitue un gène intact, capable de convertir les cellules au phénotype transformé. Dans un tel système, la recombinaison spontanée se produit à une fréquence de l'ordre de 10-7 par génération cellulaire, tandis que l'introduction de grand T de polyome dans les cellules provoque de la recombinaison à une fréquence de 10-2 par génération. Par contre, si dans le système précédent, l'origine de réplication virale est mutée de telle sorte que le taux de réplication inductible par grand T est quasiment nul, alors grand T perd son aptitude recombinogène. En outre dans le système où l'origine virale de polyome est intacte, grand T de SV40 induit de la recombinaison à haute fréquence bien qu'il soit inapte à induire la réplication de l'ADN de polyome. La mutation qui rend l'origine de polyome défectueuse dans la réplication est une délétion qui inclut une séquence de 12 bp ayant une grande homologie avec une séquence qui serait une origine de réplication et/ou d'amplification cellulaire. Afin de déterminer si cette séquence, qui est aussi retrouvée en 3' de la séquence codante du gène DHFR, à un tel impact, nous avons réalisé un essai d'amplification d'un minigène DHFR. Cet essai a mis en évidence que le niveau d'amplification n'est pas drastiquement dépendant de la présence de cette séquence