Clonage et séquence du gène de la chaine légère VK-1A du myélome MOPC-460 de souris BALB/c

Abstract

Les gènes de la chaîne légère K se présentent, à l'état germinal, en quatre segments L, V, J et C. Après réarrangement par recombinaison, un des 300 gènes VK fusionne avec l'un des quatre segments JK fonctionnels. Une fois réarrangé, ce gène est sujet aux mutations somatiques, c'est-à-dire qu'un mécanisme localisé et propre aux gènes d'immunoglobuline provoque des mutations dans la région VJ. Le nombre des différents fragments, le réarrangement et les mutations somatiques sont des moyens efficaces d'accroître la diversité des anticorps. Pour apporter plus amples informations sur ces moyens de diversification, la caractérisation plus détaillée des gènes VK1, plus particulièrement VK1A, a été entreprise. Un des moyens d'y parvenir est le clônage et la séquence d'un gène de ce sous-groupe. Afin de clôner le gène réarrangé de la chaîne légère du myélôme MOPC-460, plusieurs étapes ont été franchies. Premièrement, l'identification du fragment d'ADN porteur du gène se fait à l'aide d'une sonde de la région VK1A (1.1) et une autre de la région JKCK. Deuxièmement, le montage d'une bibliothèque de phages et le criblage de cette bibliothèque sont effectués. Troisièmement, un clône est isolé et purifé, puis son ADN est extrait. Quatrièmement, le fragment isolé de l'ADN de phage est sous-clôné dans pBR 322 et une carte de restriction est faite. Et finalement, des fragments du gène sont sous-clônés dans M13 et séquencés. Les résultats obtenus, surtout la séquence de la région LVJK5, ont permis de classer définitivement la chaîne légère de MOPC-460 dans le sous-groupe VK1A, même si elle avait été classée VK1D auparavant (Lazure et al, 1981). Cette séuqence, en plus de lever les ambiguïtés laissées par la séquence protéique, révèle deux substitutions situées dans le V, aux résidus 45 et 86, par rapport à la séquence germinale (T-105). Ces substitutions proviennent certainement de mutations somatiques

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