Le facteur activateur des plaquettes (PAF) est un médiateur phospholipidique puissant, exerçant son influence au niveau du système nerveux, cardiovasculaire, reproducteur, respiratoire et immunitaire via un récepteur couplé aux protéines G (GPCR). Plusieurs résidus ont été conservés durant l'évolution des GPCRs dont deux cystéines (première et deuxième boucle extracellulaire). Les résultats obtenus avec le récepteur du PAF humain (hPAFR) supportent l'idée qu'un pont disulfure important existerait entre ces résidus. La réduction des ponts disulfures à l'aide du DTT amène une perte de liaison pour le 3H-PAF et le 3H-WEB2086. De plus, la substitution des cystéines 173 et 90 en alanine ou sérine abolit la réponse au PAF, l'expression à la surface et la liaison des différents ligands. La substitution du résidu cystéine 95 affecte aussi ces fonctions mais sans les abolir. Ceci suggère l'existence d'un pont disulfure reliant les résidus 90 et 173, primordial pour le hPAFR. D'autres résidus compris dans le motif (D/N)PxxY sont aussi importants dans le maintien de la conformation des GPCRs ainsi que dans l'endocytose qui suit une exposition au ligand. Les substitutions D289A, D289N, Y293A et Y293F furent utilisées afin d'évaluer l'importance des résidus de ce motif pour le hPAFR. À l'exception de Y293A, les mutants non-couplés (D63N, A230E, D289A et 'Y293A') sont fortement affectés dans leur capacité d'internalisation. À l'aide de bloqueurs d' internalisation, nous avons mis en évidence l'entrée concomitante du 3H-PAF et du hPAFR via les vésicules à clathrines. Ce processus est PKC indépendant et l'internalisation de Y293A démontre que la réponse ne participe pas au phénomène. En mettant au point un test d'internalisation, nous avons observé qu'une stimulation au PAF menait à une disparition de sites de liaison de 3H-WEB2086 distincte de la séquestration. Par contre, la réapparition de la liaison est internalisation et déphosphorylation dépendante. Elle suit donc une cinétique classique de resensibilisation. Les tyrosines kinases, la PKC et les caséines kinases 1 et 2 ne sont pas impliquées dans cette disparition. Cet état réfractaire semble découler d'un changement de conformation indépendant du couplage et mesurable par son effet sur la liaison du 3H-WEB2086. Certaines études font part de l'existence d'un état oligomérique des GPCRs. Par la coexpression du PAFR de type sauvage avec des récepteurs mutants, nous avons vérifié si certains possédaient un phénotype dominant. Les mutants N285I et K298stop sont capables d'inhiber la liaison du 3H-WEB2086 et d'affecter l'expression à la surface cellulaire. Les mutants D63N et D289A affectent l'affinité apparente pour le PAF. De plus, l'activité constitutive s'accroît fortement en présence du mutant D63N. Ces résultats démontrent qu'il est possible d'utiliser différents mutants pour affecter les caractéristiques apparentes des GPCRs. Des études plus approfondies pourraient mener à une meilleure compréhension de différentes maladies héréditaires dominantes et mener à des avenues de thérapies géniques
