Étude transcriptionnelle de l'actinophage JHJ-3

Abstract

Dans le but d'établir un modèle de régulation génétique chez les actinomycètes, le bactériophage JHJ-3 a été choisi. L'actinophage tempéré JHJ-3 a été isolé suite à une induction à la mytomycine C de la souche Saccharopolyspora hirsuta 367 UC8106. Ce bactériophage a la même morphologie que le bactériophage $\lambda$ et possède un répresseur puisqu'il peut lysogéniser certaines souches de Saccharopolyspora. Ce répresseur a été localisé, caractérisé et nommé JrpI. De plus, un second gène transcrit de façon divergente a été localisé et nommé ORF II. Entre ces deux gènes, c'est-à-dire dans la région intergénique, 2 promoteurs ont été détectés: pr1 le promoteur du gène jrpI et pr2 le promoteur de l'ORF II. Ainsi, la région intergénique a été étudiée pour déterminer les nucléotides représentant ces deux promoteurs, et l'interaction entre JrpI et la région intergénique a été mise en évidence. Dans un premier temps, la région intergénique a subi des délétions par PCR et par exonuclease III - nuclease S1, pour donner plusieurs fragments de différentes longueurs de cette région. Ceci a permis de réduire les deux promoteurs d'environ 75%. En utilisant le plasmide rapporteur xylE-pOK12, la séquence représentant pr2 a été localisée dans un fragment d'ADN de 57 pb, tandis que pr1 n'a pu être localisé à cause d'un artéfact causé par le plasmide rapporteur. Ensuite, l'interaction entre JrpI et la région intergénique a été mise en évidence en établissant les conditions de liaison in vitro permettant de faire des gels de retardement. Ainsi, JrpI régulerait l'expression de l'ORF II et de son propre gène. [Résumé abrégé par UMI]